畢赤
- 畢赤酵母表達(dá)系統(tǒng)及其發(fā)酵策略
350117）畢赤酵母（Pichia pastoris）因其生長快、蛋白表達(dá)效率高，且易于進(jìn)行分子遺傳學(xué)操作等優(yōu)良特點(diǎn)，被認(rèn)為是工業(yè)上最重要的外源蛋白生產(chǎn)宿主之一。畢赤酵母表達(dá)系統(tǒng)作為一種優(yōu)秀的真核表達(dá)系統(tǒng)，不僅能夠有效的對(duì)外源蛋白基因進(jìn)行轉(zhuǎn)錄和翻譯，而且擁有蛋白質(zhì)折疊、糖基化和分泌的必要細(xì)胞機(jī)制，可以用來生產(chǎn)與天然蛋白在生理、生化功能上非常接近的蛋白。外源蛋白可由醇氧化酶1（alcohol oxidase 1,AOX1）基因啟動(dòng)子誘導(dǎo)表達(dá)，并且其自身蛋
福建輕紡 2023年10期2023-10-27
- 微生物干預(yù)降低醬香型白酒釀造中的乳酸
酵母的抑制作用。畢赤酵母是白酒發(fā)酵中最常用的產(chǎn)酒功能菌株之一,在汾酒酒醅發(fā)酵前期畢赤酵母占真菌群落的60%以上[9],白云邊出入窖酒醅中,畢赤酵母屬占比約為40%[10],醬香型白酒釀造酒醅中畢赤酵母在前期輪次中占比大于80%[11]。畢赤酵母具有生長周期短、發(fā)酵能力強(qiáng)、容易進(jìn)行大規(guī)模培養(yǎng)以及含有多種蛋白質(zhì)、氨基酸、維生素、生物活性物質(zhì)等豐富營養(yǎng)成分的優(yōu)點(diǎn),是基礎(chǔ)研究及應(yīng)用研究的主要對(duì)象,廣泛應(yīng)用于食品、醫(yī)藥等領(lǐng)域[12]。研究發(fā)現(xiàn),畢赤酵母有一定的降解乳
食品與發(fā)酵工業(yè) 2023年15期2023-08-15
- 畢赤酵母對(duì)甲醇脅迫的響應(yīng)及其對(duì)蛋白表達(dá)的影響
550000)畢赤酵母(，最新系統(tǒng)命名為)是當(dāng)今科研和商業(yè)化生產(chǎn)重組蛋白最常用、最受歡迎的表達(dá)平臺(tái)之一。畢赤酵母具有良好的生物安全性、易高密度培養(yǎng)、高轉(zhuǎn)錄活性的啟動(dòng)子、較強(qiáng)的蛋白合成分泌能力、胞外產(chǎn)物易分離純化及與更高級(jí)真核細(xì)胞類似的翻譯后修飾等諸多優(yōu)點(diǎn)。畢赤酵母相比釀酒酵母()而言，其表達(dá)分泌蛋白的能力更卓越。蛋白高水平表達(dá)技術(shù)和策略一直是該領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)，當(dāng)前，提高蛋白表達(dá)的主要技術(shù)有：一是優(yōu)化發(fā)酵條件，包括培養(yǎng)基優(yōu)化、誘導(dǎo)策略優(yōu)化、高密度培養(yǎng)等手段
安徽農(nóng)業(yè)科學(xué) 2022年16期2022-09-02
- RT-qPCR分析拷貝數(shù)及mRNA轉(zhuǎn)錄水平對(duì)表達(dá)左聚糖蔗糖酶的影響
coli）相比，畢赤酵母（Pichia pastoris）的安全性更好，已被認(rèn)定為一般公認(rèn)為安全（generally recongnized as safe，GRAS）微生物[7]。畢赤酵母（Pichia pastoris）表達(dá)系統(tǒng)是當(dāng)前最有效、最方便、最廣泛的外源蛋白表達(dá)系統(tǒng)之一[8-9]，其具有安全性好[10]、外源基因可穩(wěn)定存在[11]、可實(shí)現(xiàn)分泌表達(dá)和適合工業(yè)化生產(chǎn)[12]等優(yōu)點(diǎn)，畢赤酵母（Pichia pastoris）表達(dá)系統(tǒng)已在食品、醫(yī)藥和工
中國釀造 2022年4期2022-06-22
- Microbacterium sp.XT11黃原膠內(nèi)切酶在畢赤酵母中的異源表達(dá)、性質(zhì)及應(yīng)用
制了大規(guī)模應(yīng)用。畢赤酵母(Pichiapastoris)是一種成熟的蛋白表達(dá)宿主，在畢赤酵母中胞外表達(dá)的酶具有更高的生產(chǎn)率和純度，操作相對(duì)比較簡單且成本較低，主要用于生物制藥和工業(yè)酶的生產(chǎn)[12-13]。合適的啟動(dòng)子能使外源蛋白高效表達(dá)，畢赤酵母的啟動(dòng)子分為誘導(dǎo)型啟動(dòng)子和組成型啟動(dòng)子，其中AOX1和GAP最為常用[14]。本研究首次將來自Microbacteriumsp.XT11的黃原膠內(nèi)切酶，以畢赤酵母GS115為表達(dá)宿主進(jìn)行異源表達(dá)。并對(duì)其啟動(dòng)子及發(fā)酵
食品與發(fā)酵工業(yè) 2022年6期2022-04-01
- 畢赤酵母產(chǎn)類人膠原蛋白發(fā)酵條件的優(yōu)化
白就更加受重視。畢赤酵母是一種著名的甲基營養(yǎng)型蛋白質(zhì)表達(dá)系統(tǒng)。它具有基因操作成熟,高密度發(fā)酵,可以對(duì)目的蛋白進(jìn)行類人的糖基化、二硫鍵形成等后修飾[15]。畢赤酵母的分泌表達(dá)模式也有利于重組蛋白的純化[16-17]。本研究利用已構(gòu)建的表達(dá)類人膠原蛋白的重組畢赤酵母菌株,進(jìn)行發(fā)酵優(yōu)化以顯著提高類人膠原蛋白的表達(dá)量,為重組膠原蛋白在食品工業(yè)中的應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。1 材料與方法1.1 菌株和試劑重組畢赤酵母GS115-Collagen由本實(shí)驗(yàn)室構(gòu)建并保藏；酵母粉、蛋白
食品與發(fā)酵工業(yè) 2022年3期2022-02-23
- 基于開源和節(jié)流兩種策略的耐高滲畢赤酵母菌株的構(gòu)建
4122)巴斯德畢赤酵母(Komagataellaphaffii)是一種甲醇營養(yǎng)型酵母，其特有的醇氧化酶1(alcohol oxidase 1，Aox1)可以代謝甲醇，使其能在甲醇為唯一碳源的培養(yǎng)基中生長[1]。畢赤酵母具有可嚴(yán)緊調(diào)控，可高密度發(fā)酵，可翻譯后修飾等諸多優(yōu)點(diǎn)，因而被開發(fā)為現(xiàn)在應(yīng)用最為廣泛的重組蛋白表達(dá)系統(tǒng)之一。至今已有抗菌肽[2]，病毒樣顆粒[3]，牛胃溶菌酶[4]，普魯蘭酶[5]等多種外源蛋白成功在畢赤酵母中表達(dá)。但畢赤酵母對(duì)滲透壓脅迫的抵
食品與發(fā)酵工業(yè) 2021年24期2022-01-13
- 畢赤酵母新型反向篩選標(biāo)記基因的鑒定
引言甲醇營養(yǎng)型畢赤酵母(Pichiapastoris)作為目前生產(chǎn)重組蛋白最重要的表達(dá)系統(tǒng)之一，具有分子遺傳簡單、能夠?qū)Ρ磉_(dá)的蛋白進(jìn)行翻譯后修飾等優(yōu)點(diǎn)[1]．隨著分子生物學(xué)的發(fā)展，在基因水平對(duì)畢赤酵母進(jìn)行基因改造成為研究畢赤酵母基因功能的主要手段．對(duì)于酵母菌的遺傳操作中，經(jīng)常使用標(biāo)記基因來篩選重組菌株，然而目前應(yīng)用廣泛的標(biāo)記基因主要是編碼抗生素的基因[2]．對(duì)于畢赤酵母而言，能夠被實(shí)際運(yùn)用于基因工程的標(biāo)記基因數(shù)量有限，而且進(jìn)行多次基因操作時(shí)，由于可供選擇
- 不同來源抗凍蛋白在畢赤酵母中的異源表達(dá)
十分困難[8]。畢赤酵母表達(dá)系統(tǒng)既有原核生物分子基因操作與生長的特征，又具備真核生物翻譯后蛋白修飾的亞細(xì)胞機(jī)制，是目前應(yīng)用最廣泛的真核表達(dá)系統(tǒng)[9]。畢赤酵母表達(dá)系統(tǒng)主要具有以下優(yōu)點(diǎn)：(1) 外源基因通過表達(dá)載體整合到酵母基因組上，基因工程菌的遺傳穩(wěn)定性良好[10]；(2) 所得目的蛋白易于分離純化[11]；(3) 不存在內(nèi)毒素殘留問題[12]；(4) 所得目的蛋白具有天然的高級(jí)結(jié)構(gòu)和生物活性[13]；(5) 具有釀酒酵母系統(tǒng)的優(yōu)點(diǎn)，可進(jìn)行高密度發(fā)酵，易于
- 柔嫩艾美耳球蟲微線4N端蛋白序列分析與真核表達(dá)
MIC4N，利用畢赤酵母(Pichiapastoris)表達(dá)rEtMIC4N，為后續(xù)其免疫原性研究打基礎(chǔ)。1 材料和方法1.1 材 料柔嫩艾美耳球蟲孢子化卵囊，北京農(nóng)學(xué)院病理實(shí)驗(yàn)室保存。pGEM-T克隆載體、表達(dá)載體pPICZαA、大腸桿菌JM109、畢赤酵母GS115、Trizol為Invitrogen公司產(chǎn)品，M-MLV反轉(zhuǎn)錄酶、Taq DNA聚合酶、dNTPs、Oligo(dT)15、Rnasin、DNA膠回收試劑盒為TaKaRa產(chǎn)品。1.2 方 法
北京農(nóng)學(xué)院學(xué)報(bào) 2021年3期2021-09-18
- α-法尼烯在巴斯德畢赤酵母中的生物合成
宿主相比，巴斯德畢赤酵母表達(dá)系統(tǒng)成本低、周期短、表達(dá)量高且可高密度培養(yǎng)，具有大規(guī)模生產(chǎn)α-法尼烯的潛力。一些研究已經(jīng)證明，巴斯德畢赤酵母是生產(chǎn)類異戊二烯的合適宿主[10]。然而，目前沒有報(bào)道描述巴斯德畢赤酵母中α-法尼烯的異源生產(chǎn)。在本項(xiàng)研究中，首先成功構(gòu)建了產(chǎn)α-法尼烯的巴斯德畢赤酵母重組菌株。然后揭示了巴斯德畢赤酵母甲羥戊酸途徑和α-法尼烯合成途徑中限速步驟。之后對(duì)限速酶組合過表達(dá)并優(yōu)化基因拷貝數(shù)以平衡代謝途徑逐步提高α-法尼烯產(chǎn)量。最后通過外源添加不
食品與發(fā)酵工業(yè) 2021年16期2021-08-31
- 一種通過過表達(dá)畢赤酵母翻譯相關(guān)因子提高重組蛋白胞內(nèi)表達(dá)的策略
0006）巴斯德畢赤酵母（Pichia pastoris）是重組蛋白表達(dá)生產(chǎn)的優(yōu)良宿主，它被美國食品藥物管理局認(rèn)定為GRAS（通常認(rèn)為安全的）級(jí)微生物[1]，且具有遺傳操作簡便、培養(yǎng)成本低、有接近高等真核生物的蛋白質(zhì)翻譯后加工和修飾能力[2,3]、可進(jìn)行高密度發(fā)酵[4,5]等優(yōu)點(diǎn)。此外，畢赤酵母還具有甲醇誘導(dǎo)型強(qiáng)啟動(dòng)子PAOX1，在以廉價(jià)碳一化合物甲醇為唯一碳源的條件下，由PAOX1啟動(dòng)的AOX1蛋白可達(dá)到胞內(nèi)總蛋白的30%[6]。大量研究實(shí)例證明，除了在
現(xiàn)代食品科技 2021年7期2021-07-27
- 畢赤酵母醇氧化酶2啟動(dòng)子上游調(diào)控序列的隨機(jī)突變研究
海 200093畢赤酵母(Komagataellaphaffii,曾命名Pichiapastoris) 是能夠利用甲醇作為唯一碳源生長的甲基營養(yǎng)型微生物，是目前一種重要的表達(dá)外源蛋白的工業(yè)微生物[1]。其過氧化酶體中的醇氧化酶1(AOX1)和醇氧化酶2(AOX2)將甲醇氧化為甲醛。醇氧化酶對(duì)甲醇和氧氣的親和力比較低[2,3]，因此，需要大量的醇氧化酶來代謝甲醇。但是PAOX1和PAOX2都受甲醇嚴(yán)格調(diào)控，調(diào)控機(jī)制相同[4,5]。畢赤酵母在含有葡萄糖、乙醇、
工業(yè)微生物 2021年3期2021-06-30
- 畢赤酵母對(duì)斷奶仔豬采食量等指標(biāo)的影響
春 130062畢赤酵母的主要成分為破壁酵母，其中含有豐富的甘露聚糖、酵母核苷酸、葡聚糖、游離氨基酸以及各種維生素、有機(jī)微量元素等物質(zhì)，可以起到干擾有害菌定植、促進(jìn)有益菌繁殖、提升飼料適口性、增強(qiáng)動(dòng)物免疫力的功能，是最新一代綠色環(huán)保型飼料添加劑。1 材料與方法畢赤酵母實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)并處理。選取40頭健康、體重相近的斷奶仔豬，隨機(jī)分組，每組10頭。仔豬飼料組成見表1，試驗(yàn)組分別添加1.0 kg/t、1.5 kg/t和2.0 kg/t的畢赤酵母，飼料均制成顆粒體。
吉林畜牧獸醫(yī) 2020年11期2020-12-30
- lys1-d缺陷型標(biāo)記介導(dǎo)畢赤酵母超高拷貝質(zhì)粒整合
功能，甲醇營養(yǎng)型畢赤酵母已經(jīng)成為生產(chǎn)重組蛋白最重要的表達(dá)平臺(tái)之一[1-2].為了進(jìn)一步提高畢赤酵母中外源蛋白的產(chǎn)量，研究者們已經(jīng)提出了很多策略，其中最普遍的一個(gè)策略就是通過引入多個(gè)拷貝的外源基因來提高mRNA的水平[3].很多蛋白表達(dá)的實(shí)例已經(jīng)顯示這一策略能顯著增加畢赤酵母重組蛋白產(chǎn)量[4-5].但是，這需要通過構(gòu)建含有多拷貝外源基因的表達(dá)菌株來實(shí)現(xiàn).傳統(tǒng)構(gòu)建畢赤酵母多拷貝菌株的方法有兩種：第一種方法是通過體外構(gòu)建含有多個(gè)重復(fù)外源基因表達(dá)盒的載體，然后將其
- 基于代謝工程構(gòu)建產(chǎn)β-胡蘿卜素重組畢赤酵母
業(yè)化[8-9]。畢赤酵母表達(dá)系統(tǒng)成本低、周期短、表達(dá)量高且可高密度培養(yǎng)，為大規(guī)模生產(chǎn)β-胡蘿卜素帶來了希望[10-12]。ARAYA-GARAY等[12]首次構(gòu)建了異源表達(dá)歐文氏菌類胡蘿卜素相關(guān)基因的巴斯德畢赤酵母突變菌株，所得菌株的β-胡蘿卜素產(chǎn)量僅為339 μg/g(DCW)。我們預(yù)測，引入鎖擲酵母類胡蘿卜素途徑可以獲得更高β-胡蘿卜素產(chǎn)量的重組巴斯德畢赤酵母。本研究首次克隆來自鎖擲酵母的類胡蘿卜素基因并在巴斯德畢赤酵母中異源表達(dá)以產(chǎn)生β-胡蘿卜素，并
食品與發(fā)酵工業(yè) 2020年11期2020-06-15
- 巴斯德畢赤酵母MAPK/HOG信號(hào)通路的分子互作研究
子。甘油是巴斯德畢赤酵母(Pichiapastoris)廣泛應(yīng)用的碳源[10]，高濃度甘油形成的高滲環(huán)境，影響細(xì)胞周期和細(xì)胞代謝。而針對(duì)畢赤酵母MAPK/HOG信號(hào)通路的研究很少，因此不能很好地解決上述問題，這對(duì)此系統(tǒng)的應(yīng)用十分不利。與釀酒酵母相比，畢赤酵母中的Hog1具有85%的同源性，然而Hot1、Msn2/4和Sko1等Hog1的主要轉(zhuǎn)錄因子同源性卻很低。這表明，畢赤酵母MAPK/HOG信號(hào)通路可能已經(jīng)發(fā)生了很大的變化，響應(yīng)高滲的機(jī)制也相應(yīng)改變。本研
生物學(xué)雜志 2020年3期2020-06-12
- 重組人源膠原蛋白制備關(guān)鍵技術(shù)研究
015）采用巴氏畢赤酵母基因工程菌GS115/pPIC9KG6 進(jìn)行高密度發(fā)酵，獲得細(xì)胞外分泌型重組人源膠原蛋白。 SDS-PAGE 電泳分析證明：RHSC 具有確定的相對(duì)分子質(zhì)量， 分別約為56 000 的蛋白質(zhì)單體與112 000 的二聚體。實(shí)驗(yàn)中運(yùn)用透析法、鹽析與柱層析結(jié)合法對(duì)工程菌的發(fā)酵上清液進(jìn)行純化。 侯增淼等（2019）為了獲得可實(shí)現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)的重組人源性膠原蛋白，根據(jù)人Ⅰ型膠原蛋白Gly-X-Y 序列， 優(yōu)選親水性的Gly-X-Y 膠原肽段設(shè)
食品與生物技術(shù)學(xué)報(bào) 2020年2期2020-01-05
- D-氨基酸脫氫酶在不同宿主中發(fā)酵產(chǎn)酶條件優(yōu)化
DH的大腸桿菌和畢赤酵母。大腸桿菌的細(xì)胞壁含有D-氨基酸，DAADH會(huì)分解D-氨基酸，從而使大腸桿菌破胞，導(dǎo)致清液酶活升高，不利于下游提取純化，也限制了細(xì)胞內(nèi)酶活提升，但大腸桿菌發(fā)酵時(shí)間短。畢赤酵母屬于真菌，真菌細(xì)胞壁中不含D-氨基酸，DAADH不會(huì)使畢赤酵母產(chǎn)生破胞問題，但發(fā)酵時(shí)間長。筆者旨在通過對(duì)大腸桿菌產(chǎn)DAADH和畢赤酵母產(chǎn)DAADH的發(fā)酵工藝條件進(jìn)行優(yōu)化，為工業(yè)生產(chǎn)提供參考依據(jù)。1 材料與方法1.1 菌 種大腸桿菌BL21(DE3)、畢赤酵母X-
發(fā)酵科技通訊 2019年4期2020-01-03
- 畢赤酵母含硫氨基酸生物合成途徑
相關(guān)基因信息，對(duì)畢赤酵母基因組信息分析發(fā)現(xiàn)，畢赤酵母細(xì)胞中可能同時(shí)存在OAS途徑、OAH途徑、轉(zhuǎn)硫途徑及逆轉(zhuǎn)硫途徑。圖1 不同類型酵母含硫氨基酸生物合成途徑Fig.1 Different pathways of sulfur amino acid synthesis and transsulfuration in yeast species1 材料與方法1.1 菌株、質(zhì)粒、培養(yǎng)基菌株：畢赤酵母SMD1186（作者所在實(shí)驗(yàn)室保存）及以SMD1168為出發(fā)菌株
食品與生物技術(shù)學(xué)報(bào) 2019年7期2019-10-30
- 廢棄畢赤酵母核糖核酸提取條件的優(yōu)化
6]。甲醇營養(yǎng)型畢赤酵母（Pichia pastoris）是能夠利用甲醇作為唯一碳源和能源的酵母菌，作為一類優(yōu)秀的表達(dá)系統(tǒng)，除了具有蛋白質(zhì)的加工和折疊等真核表達(dá)系統(tǒng)所共有的優(yōu)點(diǎn)外，還兼具諸如大腸桿菌等微生物的易于操作的特點(diǎn)；與動(dòng)物細(xì)胞等真核表達(dá)系統(tǒng)相比，它具有簡便、快捷、成本低、表達(dá)水平較高等優(yōu)點(diǎn)。畢赤酵母表達(dá)系統(tǒng)已被廣泛應(yīng)用于植酸酶、木聚糖酶、白蛋白等產(chǎn)品生產(chǎn)基因工程菌的構(gòu)建[7-10]，并實(shí)現(xiàn)了這些產(chǎn)品的工業(yè)化生產(chǎn)。在生產(chǎn)過程中會(huì)產(chǎn)生大量的畢赤酵母菌體
浙江化工 2019年4期2019-05-13
- 畢赤酵母甘露寡糖對(duì)大腸桿菌攻毒斷奶仔豬免疫細(xì)胞數(shù)量的影響
損傷條件下，研究畢赤酵母甘露寡糖對(duì)斷奶仔豬生產(chǎn)性能、腸上皮細(xì)胞內(nèi)免疫細(xì)胞數(shù)量變化與分布的影響，探討畢赤酵母甘露寡糖的作用機(jī)理。1 材料與方法1.1 試驗(yàn)材料本試驗(yàn)所使用的畢赤酵母甘露寡糖標(biāo)識(shí)含量為：甘露糖≥15%、甘露寡糖≥20%、蛋白質(zhì)≥25%，水分≤6%和粗灰分≤2%。1.2 試驗(yàn)動(dòng)物分組與日糧本試驗(yàn)選用48頭平均體重為7.34 kg的健康斷奶仔豬，共飼養(yǎng)24 d。試驗(yàn)初期分為兩個(gè)日糧處理組：對(duì)照組和0.2%畢赤酵母甘露寡糖組，對(duì)照組飼喂基礎(chǔ)日糧，試驗(yàn)
飼料工業(yè) 2019年6期2019-04-08
- 畢赤酵母中tRNA基因的表達(dá)及其作用效果
目前應(yīng)用較廣泛的畢赤酵母真核表達(dá)系統(tǒng)中還未有相關(guān)研究報(bào)道。為了實(shí)現(xiàn)在畢赤酵母中提高稀少tRNA豐度提高外源基因表達(dá)量的目的，需要獲得準(zhǔn)確的畢赤酵母稀少tRNA基因。目前，tRNA基因主要依靠軟件預(yù)測技術(shù)進(jìn)行發(fā)掘，其中應(yīng)用最為廣泛的是tRNAScan-SE軟件[19]。其預(yù)測結(jié)果被大多數(shù)基因組作為測序分析tRNA基因的注釋依據(jù)而采用。但由于真核生物tRNA基因的轉(zhuǎn)錄后修飾較為復(fù)雜，依靠識(shí)別基因組中tRNA基因的第34–37位堿基作為反密碼子的預(yù)測方式偏差較大
生物工程學(xué)報(bào) 2019年1期2019-01-30
- 傳統(tǒng)食品“稻庭面條”內(nèi)部的空洞和龜裂之作用
條的面勁兒里添加畢赤酵母M2，放幾小時(shí)即可變軟，抻拉性增強(qiáng)，很適合做面條，且面條的內(nèi)部會(huì)形成比較大的空隙，這是稻庭面條所特有的。如果不添加畢赤酵母，做成的面條其間空隙很小。面條煮的時(shí)間長短與鹽的含量有關(guān)，為此監(jiān)測了煮面條過程中溶出的鹽含量，計(jì)算式是（煮湯里鹽的最終濃度）-（面湯隨煮時(shí)間鹽濃度的變化值）。將添加和不添加畢赤酵母的面條進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)添加了畢赤酵母的面條斷面發(fā)生龜裂和空隙，而未添加一方的斷面沒有龜裂。前者由于有龜裂和較大空隙，不僅鹽的溶出速度加快
中國釀造 2019年5期2019-01-14
- 畢赤酵母甘露寡糖對(duì)母豬及仔豬生產(chǎn)及免疫性能的影響
期母豬提供來源于畢赤酵母細(xì)胞壁的甘露寡糖產(chǎn)品，研究其對(duì)母豬的繁殖性能、血清、初乳成分以及后代仔豬生產(chǎn)性能的影響來探討畢赤酵母甘露寡糖的適宜添加量，為畢赤酵母甘露寡糖的合理使用提供理論依據(jù)[1]。1 材料與方法1.1 試驗(yàn)材料本試驗(yàn)所使用的畢赤酵母甘露寡糖來由北京華美源生物科技有限公司提供，產(chǎn)品標(biāo)識(shí)含量為：甘露糖≥15%，甘露寡糖≥20%，蛋白質(zhì)≥25%，水分≤6%，粗灰分≤2%。1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)本試驗(yàn)選用胎次在2～4胎、分娩日期相近、妊娠日齡為85 d的二
飼料博覽 2018年10期2018-11-20
- 海洋源金屬硫蛋白畢赤酵母重組菌株的構(gòu)建及其表達(dá)活性研究
的熱點(diǎn)研究方向。畢赤酵母(Pichia pastoris)表達(dá)系統(tǒng)具有優(yōu)良特性，是目前廣泛應(yīng)用的微生物表達(dá)系統(tǒng)之一，作為真核生物，其不僅具備原核表達(dá)系統(tǒng)的繁殖速度快、操作簡單及價(jià)格低廉、外源蛋白表達(dá)量高等優(yōu)點(diǎn)，還能夠?qū)ν庠吹鞍走M(jìn)行翻譯后加工、折疊及修飾，自身分泌的蛋白質(zhì)少便于分離純化，更適用于大批量發(fā)酵生產(chǎn)。目前，已有多種外源基因在巴斯德畢赤酵母表達(dá)系統(tǒng)中成功地重組表達(dá)[5-7]。底棲雙殼類海洋動(dòng)物為濾食性生物，對(duì)重金屬有較強(qiáng)的生物富集能力，其體內(nèi)MT基因
- 非甲醇誘導(dǎo)重組畢赤酵母表達(dá)木聚糖酶的條件優(yōu)化
表達(dá)[2-3]。畢赤酵母(Komagataellaphaffii)是一種較為理想的外源蛋白表達(dá)宿主[4]，它以甲醇為唯一碳源而生長。甲醇誘導(dǎo)的醇氧化酶啟動(dòng)子AOX1能大量表達(dá)醇氧化酶。畢赤酵母作為真核表達(dá)宿主的優(yōu)點(diǎn)可以總結(jié)如下：(1)具有醇氧化酶AOX1基因啟動(dòng)子，這是目前最強(qiáng)，調(diào)控機(jī)理最嚴(yán)格的啟動(dòng)子之一；(2)表達(dá)效率高,其表達(dá)的外源蛋白可占總表達(dá)蛋白的90%以上,有利于目的蛋白的分離純化；(3)類似于細(xì)菌表達(dá)系統(tǒng)，酵母的生長是快速和便宜的，而且酵母細(xì)胞
食品與發(fā)酵工業(yè) 2018年3期2018-04-12
- 食品用酶畢赤酵母表達(dá)載體的構(gòu)建
圳 518102畢赤酵母由于其強(qiáng)大的分泌表達(dá)能力，已經(jīng)成為最常用的真核表達(dá)系統(tǒng)，利用畢赤酵母表達(dá)各種的蛋白和酶類已廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、工業(yè)和食品等領(lǐng)域[1]。此外，畢赤酵母已被美國食品藥品管理局（FDA）認(rèn)定為 GRAS（GenerallyRecog?nized as Safe）微生物，畢赤酵母表達(dá)的乳糖酶也在國內(nèi)被批準(zhǔn)用于食品行業(yè)?？梢灶A(yù)期，越來越多的食品用酶將可以通過畢赤酵母生產(chǎn)。對(duì)于食品用酶而言，其安全評(píng)價(jià)至關(guān)重要，不僅要求生產(chǎn)菌株的安全性，而且還要求其
生物技術(shù)通訊 2018年2期2018-04-09
- 畢赤酵母表達(dá)系統(tǒng)中啟動(dòng)元件的研究進(jìn)展
238000）畢赤酵母表達(dá)系統(tǒng)中啟動(dòng)元件的研究進(jìn)展蔣慧慧（巢湖學(xué)院，安徽 巢湖 238000）畢赤酵母是真核細(xì)胞常用表達(dá)系統(tǒng)之一，具有細(xì)胞密度高、純化方法簡單、轉(zhuǎn)錄后修飾功能完善等優(yōu)點(diǎn)。作為重要的調(diào)控元件，表達(dá)系統(tǒng)中啟動(dòng)元件的功能強(qiáng)弱與表達(dá)效率的高低密切相關(guān)。目前，畢赤酵母表達(dá)系統(tǒng)中常用的啟動(dòng)元件分為三類，分別是以pAOX為代表的甲醇誘導(dǎo)型、以pGAP為代表的非甲醇誘導(dǎo)型，還有一些新型工業(yè)酵母啟動(dòng)子也是理想的表達(dá)系統(tǒng)啟動(dòng)元件。充分了解這些酵母啟動(dòng)子的最新
巢湖學(xué)院學(xué)報(bào) 2017年3期2017-08-12
- 一種增加畢赤酵母生產(chǎn)胰島素前體的方法
，吳靜?一種增加畢赤酵母生產(chǎn)胰島素前體的方法梁晨晨1,2，王立1,2，羅秋玲2，吳靜11 江南大學(xué)藥學(xué)院，江蘇無錫 214122 2 江南大學(xué)食品科學(xué)與技術(shù)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，江蘇無錫 214122梁晨晨,王立, 羅秋玲, 等. 一種增加畢赤酵母生產(chǎn)胰島素前體的方法. 生物工程學(xué)報(bào), 2017, 33(7): 1178–1189.Liang CC, Wang L, Luo QL, et al. A method to increase the producti
生物工程學(xué)報(bào) 2017年7期2017-08-01
- 畢赤酵母分泌表達(dá)JEV prME蛋白及其形成病毒樣顆粒的免疫原性鑒定
范浩杰，曹瑞兵?畢赤酵母分泌表達(dá)JEV prME蛋白及其形成病毒樣顆粒的免疫原性鑒定趙鵬，江雅，王經(jīng)滿，范浩杰，曹瑞兵南京農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院農(nóng)業(yè)部動(dòng)物細(xì)菌學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，江蘇南京 210095趙鵬, 江雅, 王經(jīng)滿, 等. 畢赤酵母分泌表達(dá)JEV prME蛋白及其形成病毒樣顆粒的免疫原性鑒定. 生物工程學(xué)報(bào), 2017, 33(5): 863–874.Zhao P, Jiang Y, Wang JM, et al. Secreted expression o
生物工程學(xué)報(bào) 2017年5期2017-07-05
- 離心法分離畢赤酵母活細(xì)胞和死細(xì)胞
93?離心法分離畢赤酵母活細(xì)胞和死細(xì)胞劉泰瑜， 馮 豪， 張建國*上海理工大學(xué)食品科學(xué)與工程研究所，上海 200093本文以畢赤酵母為研究對(duì)象，探索出一種分離活酵母細(xì)胞的新方法。研究發(fā)現(xiàn)，通過改變淋巴細(xì)胞分離液和50%聚蔗糖溶液的比例，獲得不同密度的酵母細(xì)胞分離液，進(jìn)而通過離心分層的方法可使畢赤酵母活細(xì)胞主要存留于離心液的上層。當(dāng)酵母細(xì)胞分離液的密度為1.1467 g/mL(27.5% 淋巴細(xì)胞分離液+72.5%聚蔗糖溶液)，分離液上下層中酵母活細(xì)胞的分配
工業(yè)微生物 2016年5期2016-11-11
- TTC比色法篩選高存活率的畢赤酵母突變株
法篩選高存活率的畢赤酵母突變株劉勝男，張燕，劉泰瑜，許可，張建國(上海理工大學(xué) 食品科學(xué)與工程研究所，上海 200093)采用TTC比色法篩選高存活率畢赤酵母NTG突變株，探討了pH值、菌體濃度(OD600)、反應(yīng)時(shí)間、細(xì)胞存活率等對(duì)TTC顯色反應(yīng)的影響，并與平板計(jì)數(shù)法進(jìn)行比較。結(jié)果表明，在pH值為4.0～7.0或菌體濃度(OD600)低于50.00時(shí)，pH值、OD600均與1,3,5-三苯基甲臜(TPF)生成量(OD485)呈線性正相關(guān)關(guān)系；反應(yīng)時(shí)間超過
化學(xué)與生物工程 2016年10期2016-11-10
- His標(biāo)簽的水稻硅轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白表達(dá)載體的構(gòu)建及在巴斯德畢赤酵母中的表達(dá)
的構(gòu)建及在巴斯德畢赤酵母中的表達(dá)林紅梅1,3, 方長旬1,3, 林瑞余1,3, 何建宇2,3, 林偉偉1,3, 李穎哲1,3, 林文雄1,3(1.福建農(nóng)林大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院；2.福建農(nóng)林大學(xué)作物科學(xué)學(xué)院；3.福建省農(nóng)業(yè)生態(tài)過程與安全監(jiān)控重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，福建 福州 350002)以水稻根系cDNA為模板，PCR擴(kuò)增含His標(biāo)簽的Lsi1基因開放閱讀框，并將該基因克隆到巴斯德畢赤酵母表達(dá)載體pPIC9k中，PCR及測序驗(yàn)證重組質(zhì)粒pPIC9k-Lsi1目的基因序列.
- 畢赤酵母干粉吸附還原氯金酸制備金納米顆粒
，因此，本文利用畢赤酵母干粉還原氯金酸制備金納米顆粒。1 實(shí)驗(yàn)部分1.1 試劑與儀器氯金酸、無水乙醇、氫氧化鈉、鹽酸、葡萄糖均為分析純;大豆蛋白胨，生化試劑。SHZ-82 氣浴恒溫振蕩器;SPX-150B-Z 生化培養(yǎng)箱;YX-280D 高壓滅菌鍋;SW-CJ-1FD 超凈工作臺(tái);SHZ-82 恒溫振動(dòng)器;BS124 電子天平;SIGMA3-18K 冷凍離心機(jī);Cary 5000 紫外可見近紅外分光光度計(jì);TAS-986 原子吸收分光光度計(jì);TECNAI
應(yīng)用化工 2015年5期2015-12-24
- 畢赤酵母甘露寡糖對(duì)斷奶仔豬生產(chǎn)性能腸道絨毛和細(xì)胞因子的影響
100193）畢赤酵母甘露寡糖對(duì)斷奶仔豬生產(chǎn)性能腸道絨毛和細(xì)胞因子的影響李玉欣，張立梅，韓丹丹，張?jiān)姮?，丁來弟，韓 博（中國農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，北京 海淀 100193）為了研究不同劑量畢赤酵母甘露寡糖對(duì)斷奶仔豬生產(chǎn)性能、腸道腸絨毛形態(tài)結(jié)構(gòu)和細(xì)胞因子的影響，本試驗(yàn)選取144頭28日齡平均體重為7.17±0.16 kg的斷奶仔豬，分別給予3個(gè)日糧處理：對(duì)照組C、0.1%畢赤酵母甘露寡糖組T1和0.2%畢赤酵母甘露寡糖組T2，試驗(yàn)周期28 d。結(jié)果顯示，處理
中國獸醫(yī)雜志 2015年11期2015-12-08
- Effects of Mutagenesis by UV lrradiation and60Co-γ lrradiation on Fermentation of Xylose to Ethanol by Pichia stipitis
pitis（樹干畢赤酵母發(fā)酵木糖生產(chǎn)燃料乙醇）［J］.Liquor-making（釀酒），2009（1）:23-26.［7］ZHONG GF（鐘桂芳），F(xiàn)U XH（傅秀輝），SUN JS（孫軍社），et al.Advance in producing ethanol by xylose-fermenting and its prospect（發(fā)酵木糖生產(chǎn)酒精的研究進(jìn)展及其應(yīng)用前景）［J］.Journal of Microbiology（微生物學(xué)雜志），20
- 基于基因組序列的樹干畢赤酵母生理特性解析
基因組序列的樹干畢赤酵母生理特性解析劉 婷1，2，劉立明1，史仲平2（1.江南大學(xué) 食品科學(xué)與技術(shù)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，江蘇 無錫 214122；2.江南大學(xué) 工業(yè)生物技術(shù)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，江蘇 無錫 214122）樹干畢赤酵母作為一種潛在的纖維素乙醇生產(chǎn)菌株，有其獨(dú)特的生理優(yōu)勢。然而與釀酒酵母生產(chǎn)乙醇相比，樹干畢赤酵母生產(chǎn)纖維素乙醇還存在著諸多阻礙。為了從細(xì)胞整體水平進(jìn)一步解析樹干畢赤酵母的生理代謝特征，基于樹干畢赤酵母的全基因組序列，利用生物信息學(xué)的分析算法
生物加工過程 2015年1期2015-11-11
- 畢赤酵母表達(dá)系統(tǒng)發(fā)展概況及趨勢
朱泰承，李寅畢赤酵母Pichia pastoris目前已是僅次于大腸桿菌的最常用蛋白表達(dá)系統(tǒng)，廣泛應(yīng)用于實(shí)驗(yàn)室規(guī)模的蛋白質(zhì)制備、表征以及結(jié)構(gòu)解析等方面，已有上千種蛋白在畢赤酵母系統(tǒng)中得到成功地表達(dá)。近些年，畢赤酵母被美國FDA認(rèn)定為GRAS (Generally recognized as safe) 微生物，為其在食品和醫(yī)藥上的應(yīng)用鋪平了道路。在醫(yī)藥蛋白領(lǐng)域，已有胰島素、乙肝表面抗原、人血清白蛋白、表皮生長因子等多種蛋白使用畢赤酵母表達(dá)實(shí)現(xiàn)商品化制備[1
生物工程學(xué)報(bào) 2015年6期2015-02-15
- 內(nèi)切葡聚糖酶與木聚糖酶在畢赤酵母中的共分泌表達(dá)
糖酶與木聚糖酶在畢赤酵母中的共分泌表達(dá)劉高磊1， 胡 蝶2， 鄔敏辰*3， 殷 欣2， 汪俊卿2（1.江南大學(xué) 藥學(xué)院，江蘇 無錫 214122；2.江南大學(xué) 生物工程學(xué)院，江蘇 無錫 214122；3.江南大學(xué) 無錫醫(yī)學(xué)院，江蘇 無錫214122）為實(shí)現(xiàn)內(nèi)切葡聚糖酶和木聚糖酶在畢赤酵母中的共分泌表達(dá)，進(jìn)而降低酶制劑的生產(chǎn)成本，構(gòu)建含木聚糖酶基因的重組表達(dá)載體pPICZαA-Aoxyn11A，經(jīng)Sac I線性化后，電轉(zhuǎn)化至含內(nèi)切葡聚糖酶基因Aucel12A
食品與生物技術(shù)學(xué)報(bào) 2015年3期2015-01-06
- 基于文獻(xiàn)的畢赤酵母研究趨勢分析*
，200093)畢赤酵母是一種能利用甲醇為碳源的甲基營養(yǎng)型微生物［1］。經(jīng)過幾十年的研究，它已經(jīng)是藥物蛋白、酶及積累代謝中間體的熱門來源之一［2-5］。畢赤酵母高密度發(fā)酵后細(xì)胞干重達(dá)到130 g/L［6］，適用于單細(xì)胞蛋白的生產(chǎn)。此外，它富含甲硫氨酸、色氨酸等高附加值營養(yǎng)物質(zhì)。畢赤酵母以過氧化物酶體中3個(gè)酶(醇氧化酶、二羥丙酮合成酶、甲醛脫氫酶)代謝甲醇，畢赤酵母過氧化物酶體中含有2個(gè)醇氧化酶(AOX1、AOX2)。由于醇氧化酶與甲醇結(jié)合的親和力弱，所以醇
食品與發(fā)酵工業(yè) 2014年9期2014-12-16
- 畢赤酵母直接基因敲除方法的研究
6005）巴斯德畢赤酵母（Pichia pastoris）是19世紀(jì)80年代初期發(fā)展起來的一種新型的外源蛋白表達(dá)系統(tǒng)，在生物表達(dá)系統(tǒng)中研究最為廣泛。巴斯德畢赤酵母具有易于高密度發(fā)酵、培養(yǎng)基成本低、外源基因整合穩(wěn)定、外源蛋白以分泌蛋白形式存在、內(nèi)生蛋白較少，以及蛋白翻譯后真核加工等優(yōu)點(diǎn)。該系統(tǒng)相較其他表達(dá)系統(tǒng)而言，彌補(bǔ)了大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)不易表達(dá)復(fù)雜蛋白的限制以及植物、動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)周期長、操作繁瑣、成本高的缺點(diǎn)，完善了釀酒酵母（Saccharomyces
惠州學(xué)院學(xué)報(bào) 2014年6期2014-12-12
- 外源蛋白在巴斯德畢赤酵母中高效表達(dá)的策略
0415)巴斯德畢赤酵母(P.pastoris)是一種單細(xì)胞真核生物,其表達(dá)系統(tǒng)是近些年發(fā)展起來的一種真核表達(dá)系統(tǒng),它與釀酒酵母有著很多相同的遺傳學(xué)和生物學(xué)特性。優(yōu)點(diǎn)概括為三點(diǎn):高穩(wěn)定、高表達(dá)、高分泌。相對(duì)其它酵母來說更加易于操作。畢赤酵母相對(duì)其它酵母更易于分泌外源蛋白,而且外源基因整合非常穩(wěn)定,發(fā)酵工藝相對(duì)成熟,宿主細(xì)胞生長迅速。畢赤酵母能夠進(jìn)行高密度的發(fā)酵,有著很強(qiáng)的誘導(dǎo)啟動(dòng)子。不僅如此,畢赤酵母重組產(chǎn)物的生物活性比較高,其表達(dá)水平是其它酵母的10～1
生物技術(shù)世界 2014年9期2014-08-15
- 畢赤酵母工程菌表達(dá)豬β-干擾素
漢430023）畢赤酵母工程菌表達(dá)豬β-干擾素高智明，趙沁沁，張國華，閆達(dá)中，劉軍*（武漢輕工大學(xué)生物與制藥工程學(xué)院，湖北武漢430023）根據(jù)畢赤酵母密碼子偏愛，人工合成了豬β-干擾素（PoIFN-β）基因，構(gòu)建了重組載體pPICZA-PoIFN-β。重組載體經(jīng)SacI線性化后，電擊轉(zhuǎn)入畢赤酵母GS115，對(duì)在含博萊霉素（Zeocin）平板上生長的轉(zhuǎn)化子進(jìn)行鑒定，得到分泌表達(dá)豬β-干擾素的畢赤酵母基因工程菌株GS115/pPICZA-PoIFN-β。以1
中國釀造 2014年4期2014-03-04
- 川西北牧區(qū)傳統(tǒng)發(fā)酵牦牛酸奶中發(fā)酵畢赤酵母菌的分離鑒定
酵牦牛酸奶中發(fā)酵畢赤酵母菌的分離鑒定王遠(yuǎn)微1，張誠民1，索化夷2，岳 華1，李 鍵1，湯 承1，* （1.西南民族大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，四川成都610041； 2.西南大學(xué)食品科學(xué)學(xué)院，重慶400715）對(duì)川西北部分牧區(qū)的10份傳統(tǒng)發(fā)酵牦牛酸奶樣品進(jìn)行酵母菌的分離，通過常規(guī)形態(tài)特征和26S rRNA基因測序分析鑒定出6株發(fā)酵畢赤酵母菌（Pichia fermentans）。同源性分析顯示6株分離菌與已知發(fā)酵畢赤酵母菌的同源性高達(dá)99.7%～100%。實(shí)驗(yàn)
食品工業(yè)科技 2014年12期2014-02-28
- 重組畢赤酵母發(fā)酵產(chǎn)PGA的條件優(yōu)化
10004）重組畢赤酵母發(fā)酵產(chǎn)PGA的條件優(yōu)化羅 倩，黎繼烈，王 衛(wèi)，郭 璐，朱曉媛（中南林業(yè)科技大學(xué) 生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院， 湖南 長沙 410004）對(duì)重組畢赤酵母發(fā)酵產(chǎn)青霉素G?；?PGA)的培養(yǎng)條件進(jìn)行探討。依據(jù)基礎(chǔ)鹽搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)基，通過單因素試驗(yàn)考察了接種量、甘油濃度、pH以及誘導(dǎo)過程中氨水濃度、甲醇濃度等因素對(duì)PGA表達(dá)的影響。并采用Box-Behnken實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)進(jìn)行因素組合優(yōu)化。結(jié)果與意義：最佳發(fā)酵條件為：甘油濃度40 g/L、氨水濃度0.1
中南林業(yè)科技大學(xué)學(xué)報(bào) 2013年5期2013-12-27
- 畢赤酵母表達(dá)系統(tǒng)研究進(jìn)展
表達(dá)系統(tǒng)宿主——畢赤酵母(Pichia pastoris)[7］。1 畢赤酵母表達(dá)系統(tǒng)的特點(diǎn)畢赤酵母是一種甲醇營養(yǎng)型酵母，以甲醇為唯一的碳源和能源[8］。畢赤酵母具有強(qiáng)有力的醇氧化酶基因AOX啟動(dòng)子，是目前最強(qiáng)、調(diào)控機(jī)制最嚴(yán)格的啟動(dòng)子之一。它能夠嚴(yán)格調(diào)控外源基因的表達(dá)，使外源基因只在含有甲醇的培養(yǎng)基中有效表達(dá)。基因組中存在兩個(gè)基因AOX1和AOX2，對(duì)AOX基因進(jìn)行編碼，兩個(gè)基因的同源性為92%，編碼蛋白質(zhì)的同源性高達(dá)97%。AOX1啟動(dòng)子受到甲醇的誘導(dǎo)強(qiáng)
黑龍江科學(xué) 2013年9期2013-10-10
- 樹干畢赤酵母基因組文庫的構(gòu)建及纖維二糖酶基因的篩選
[3-4]。樹干畢赤酵母（Pichia stipitis）不僅可以發(fā)酵木糖、葡糖糖、甘露糖、半乳糖，還可以發(fā)酵纖維二糖和木二糖，對(duì)于纖維質(zhì)原料發(fā)酵產(chǎn)燃料乙醇具有重要意義[5-6]。樹干畢赤酵母已被證明具有良好的轉(zhuǎn)運(yùn)和利用纖維二糖的能力，但該菌株產(chǎn)酒精的能力有限，無法在工業(yè)規(guī)模應(yīng)用[7]。近年來也有許多學(xué)者通過改變發(fā)酵條件提高樹干畢赤酵母發(fā)酵產(chǎn)乙醇的得率，但其生產(chǎn)能力距工業(yè)化還有一定的距離，這就凸顯出通過基因手段改造得到理想菌株尤為重要。目前，對(duì)于樹干畢赤酵
食品與生物技術(shù)學(xué)報(bào) 2013年5期2013-02-19
- 畢赤酵母在基因克隆與表達(dá)中的應(yīng)用
酵母體系，其中對(duì)畢赤酵母（Pichia pastoris）的研究最為熱門，該體系既有糖基化程度不高，對(duì)目的蛋白污染小，對(duì)生長環(huán)境要求不高，其培養(yǎng)基易配置，便于高密度發(fā)酵表達(dá)等特點(diǎn)，又具有強(qiáng)效的啟動(dòng)子，還可對(duì)復(fù)雜的外源蛋白的高級(jí)結(jié)構(gòu)進(jìn)行翻譯后加工折疊和修飾過程，比如糖基化、蛋白折疊及生成二硫鍵等，是一種優(yōu)秀的真核生物表達(dá)系統(tǒng)[4]。經(jīng)過多年的研究發(fā)展，畢赤酵母表達(dá)系統(tǒng)已成為一個(gè)相對(duì)成熟和理想的蛋白表達(dá)系統(tǒng)，被國內(nèi)外廣泛應(yīng)用于工農(nóng)生產(chǎn)以及醫(yī)療衛(wèi)生等領(lǐng)域。目前，
豬業(yè)科學(xué) 2012年11期2012-08-15
- 重組畢赤酵母細(xì)胞壁蛋白的抽提和分析*
0006)巴斯德畢赤酵母(Pichia pastoris)作為一種甲醇營養(yǎng)型酵母具有很多優(yōu)點(diǎn)，已有數(shù)百種外源蛋白實(shí)現(xiàn)了在畢赤酵母中的高效表達(dá)［1-2］.巴斯德畢赤酵母細(xì)胞在甲醇誘導(dǎo)培養(yǎng)時(shí)響應(yīng)細(xì)胞變小，細(xì)胞壁增厚［3］.筆者對(duì)甲醇誘導(dǎo)畢赤酵母外源蛋白表達(dá)的RNA-Seq與數(shù)據(jù)分析結(jié)果表明:61個(gè)預(yù)測的畢赤酵母糖基化磷脂酰肌醇(GPI)細(xì)胞壁蛋白基因中，有24個(gè)基因的表達(dá)水平(RPKM)大于全基因表達(dá)的平均水平(約為130)，其中:11個(gè)預(yù)測的GPI蛋白基因的
- 從廢棄畢赤酵母提取甘露聚糖的研究
5035)從廢棄畢赤酵母提取甘露聚糖的研究朱紅蕾，楊海龍?(溫州大學(xué)生命與環(huán)境科學(xué)學(xué)院，浙江溫州 325035)對(duì)廢棄畢赤酵母甘露聚糖的提取條件進(jìn)行了研究.首先通過單因素試驗(yàn)研究了NaOH濃度、時(shí)間、溫度和畢赤酵母濃度對(duì)甘露聚糖提取的影響，然后采用正交試驗(yàn)分析法對(duì)影響甘露聚糖提取的這4個(gè)因素進(jìn)行了優(yōu)化，優(yōu)化結(jié)果表明，畢赤酵母甘露聚糖提取的最佳工藝條件為：NaOH濃度5%，時(shí)間2.5 h，溫度80℃，畢赤酵母濃度12.5%.最佳工藝條件下，甘露聚糖的提取率約
- 重組木聚糖酶的安全高效表達(dá)與應(yīng)用研究
yn2）在巴斯德畢赤酵母（Pichia pastoris）中的高效表達(dá)，但是卻需要甲醇誘導(dǎo)，從而限制其在食品加工等領(lǐng)域的應(yīng)用。本研究以畢赤酵母組成型啟動(dòng)子——GAP啟動(dòng)子替換pPIC9上的甲醇誘導(dǎo)型啟動(dòng)子AOX，成功地表達(dá)了木聚糖酶。在此基礎(chǔ)上以經(jīng)密碼子優(yōu)化后的INU信號(hào)肽替換載體上原有的α-Factor信號(hào)肽，同時(shí)根據(jù)已發(fā)表的基因序列和AOX1基因的氨基酸序列，按照畢赤酵母的酵母偏愛密碼子，對(duì)畢赤酵母表達(dá)載體pPIC9上的α信號(hào)肽序列進(jìn)行改造，結(jié)果表明，
食品工業(yè)科技 2011年1期2011-11-10
- 微小毛霉凝乳酶基因在畢赤酵母中的誘導(dǎo)表達(dá)研究
毛霉凝乳酶基因在畢赤酵母中的誘導(dǎo)表達(dá)研究鄭 麗1，王 昕1，王景會(huì)2，楊貞耐1，2，*(1.吉林大學(xué)生物與農(nóng)業(yè)工程學(xué)院，吉林長春130024; 2.吉林省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)產(chǎn)品加工研究中心，吉林長春130033)目的:研究重組畢赤酵母GS115PJ5誘導(dǎo)表達(dá)微小毛霉凝乳酶過程中酵母生長、產(chǎn)酶及培養(yǎng)液總蛋白變化情況。方法:測定畢赤酵母生長曲線、凝乳酶凝乳活性、蛋白水解活性、培養(yǎng)基上清液總蛋白含量。結(jié)果:畢赤酵母在開始誘導(dǎo)24h后即進(jìn)入穩(wěn)定生長期，并保持到240h，
食品工業(yè)科技 2011年7期2011-11-06
- 朱黃青霉α-1,6-葡聚糖酶在畢赤酵母中的分泌表達(dá)
,6-葡聚糖酶在畢赤酵母中的分泌表達(dá)莊靈習(xí)1，段 然1，陳龍軍2，凌雪萍1，盧英華1，*(1.廈門大學(xué)化學(xué)化工學(xué)院，福建廈門361005; 2.廣州甘蔗糖業(yè)研究所，廣東廣州510316)α-1，6-葡聚糖酶是專一作用于α-1，6糖苷鍵產(chǎn)生小分子葡聚糖的一類水解酶，廣泛的運(yùn)用于制糖工業(yè)和啤酒工業(yè)中。采用PCR法擴(kuò)增朱黃青霉(Penicillium minioluteum)C12114的α-1，6-葡聚糖酶基因，將其插入畢赤酵母表達(dá)載體pPIC9K。經(jīng)Sac
食品工業(yè)科技 2011年11期2011-11-06
- 拷貝數(shù)對(duì)畢赤酵母重組菌表達(dá)豬胰島素前體的影響
1]。甲醇營養(yǎng)型畢赤酵母(Pichiapastoris)是一種優(yōu)秀的外源蛋白表達(dá)系統(tǒng)，具有乙醇氧化酶基因啟動(dòng)子(PAOX)強(qiáng)、外源蛋白表達(dá)量高、分離容易、外源基因穩(wěn)定性高、培養(yǎng)基要求低等特點(diǎn)[2]，其高密度發(fā)酵工藝日臻成熟。目前，大約有500多種外源蛋白成功地在該系統(tǒng)中得到表達(dá)[3]。鑒于酵母直接表達(dá)人胰島素原比較困難，作者采用表達(dá)豬胰島素前體(Porcine insulin precursor，PIP)，再通過純化和體外轉(zhuǎn)肽反應(yīng)，以轉(zhuǎn)化為醫(yī)用人胰島素[4
化學(xué)與生物工程 2011年2期2011-07-25
- 抗菌肽酵母表達(dá)系統(tǒng)的研究進(jìn)展
1989）。2 畢赤酵母表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)抗菌肽的優(yōu)勢巴斯德畢赤酵母（Pichia pastoris）是一種甲基營養(yǎng)型酵母，在缺乏抑制性碳源（如葡萄糖、甘油）時(shí)，能利用甲醇作為唯一碳源。巴斯德畢赤酵母表達(dá)系統(tǒng)經(jīng)長期發(fā)展，已基本成為可以生產(chǎn)多種融合蛋白的高效表達(dá)系統(tǒng)。它不僅可以克服大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)缺乏轉(zhuǎn)錄后加工修飾的缺陷，生產(chǎn)可溶的、具有正確折疊的重組蛋白，而且可以對(duì)蛋白進(jìn)行轉(zhuǎn)錄后加工（Daly 和 Hearn，2005）。由于從天然資源中提取抗菌肽成本高、得率低
中國飼料 2011年8期2011-02-12
- 樹干畢赤酵母菌對(duì)內(nèi)醚糖的利用*
00083)樹干畢赤酵母菌對(duì)內(nèi)醚糖的利用*代江紅1，余志晟1，王曉燕2，張洪勛11(中國科學(xué)院研究生院資源與環(huán)境學(xué)院，北京，100049)2(北京林業(yè)大學(xué)生物科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，北京，100083)研究了樹干畢赤酵母菌(Pichia stipitis)對(duì)內(nèi)醚糖的利用及發(fā)酵產(chǎn)乙醇的情況。結(jié)果表明，與對(duì)葡糖糖的利用相比，樹干畢赤酵母菌利用內(nèi)醚糖的效率較低，且不能發(fā)酵產(chǎn)乙醇。然而，在內(nèi)醚糖和葡萄糖同時(shí)存在的情況下，內(nèi)醚糖可促進(jìn)樹干畢赤酵母的生長，乙醇產(chǎn)率也獲得提高。
食品與發(fā)酵工業(yè) 2010年12期2010-11-02
- 畢赤酵母中植酸酶和內(nèi)切葡聚糖酶共表達(dá)菌株的構(gòu)建及其高效表達(dá)
安 625014畢赤酵母中植酸酶和內(nèi)切葡聚糖酶共表達(dá)菌株的構(gòu)建及其高效表達(dá)吳振芳，唐自鐘，陳惠，韓學(xué)易，賴欣，吳琦四川農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)與理學(xué)院，雅安 625014植酸酶和內(nèi)切葡萄糖苷酶廣泛應(yīng)用于動(dòng)物飼料添加劑中，能更有效地幫助飼料的利用，同時(shí)為動(dòng)物的生命活動(dòng)提供必需的重要物質(zhì)。首先構(gòu)建重組質(zhì)粒pPICZα-EG，經(jīng)過線性化后，電轉(zhuǎn)化到含有植酸酶phyA基因的畢赤酵母感受態(tài)細(xì)胞中，構(gòu)成含有植酸酶基因和內(nèi)切葡萄糖苷酶基因的重組體菌株 GS115-phyA-EG
生物工程學(xué)報(bào) 2010年5期2010-09-29
- 淺析巴斯德畢赤酵母表達(dá)系統(tǒng)的研究
工作效率，巴斯德畢赤酵母表達(dá)系統(tǒng)就具有這方面的優(yōu)點(diǎn)，其優(yōu)越性表現(xiàn)在：分泌性表達(dá)，不需要復(fù)性，有效率為100%，純化程序簡單，大大降低了生產(chǎn)成本，尤其適用于動(dòng)物干擾素的表達(dá)。1 巴斯德畢赤酵母(Pichia Pastoris)表達(dá)系統(tǒng)的特點(diǎn)巴斯德畢赤酵母是近年來興起的一個(gè)真核高效表達(dá)系統(tǒng)，具有許多獨(dú)特的優(yōu)點(diǎn)，已迅速發(fā)展成為分子生物學(xué)領(lǐng)域中被廣泛用于重組蛋白生產(chǎn)的主要表達(dá)系統(tǒng)之一[1]。Pichia Pastoris是一種噬甲基酵母，可以在以甲醇為唯一碳源和能
山東畜牧獸醫(yī) 2010年10期2010-08-15