。工程細(xì)胞株的單克隆源性指用于制備產(chǎn)品的細(xì)胞要求來(lái)源于同一祖細(xì)胞，是影響產(chǎn)品質(zhì)量的關(guān)鍵因素，獲取工程細(xì)胞株單克隆源性的證明是藥物研發(fā)整體控制策略的關(guān)鍵步驟［3-4］。傳統(tǒng)單克隆篩選采用有限稀釋法，克隆形成率較低，為確保獲得足夠的候選克隆，每次實(shí)驗(yàn)均需接種30～50塊96孔板，且進(jìn)行連續(xù)2輪篩選，工作量極大［5-8］。采用單克隆篩選儀器ClonePix 并基于半固體培養(yǎng)基進(jìn)行單克隆挑選可提高克隆形成率，但也需進(jìn)行連續(xù)2 輪篩選或另加1 輪有限稀釋法篩選亞克隆

4 細(xì)胞融合與單克隆抗體制備1.4.1 細(xì)胞融合及雜交瘤細(xì)胞的篩選取沖刺免疫后3 d的小鼠的脾臟組織，分離脾細(xì)胞后與SP2/0 細(xì)胞用PEG1500進(jìn)行融合。融合后3 d，用含有HAT的RPMI 1640篩選培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。用以fiber2蛋白為包被抗原的間接ELISA篩選能夠分泌特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞。選取檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性、生長(zhǎng)狀態(tài)良好的細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)孔、亞克隆以及凍存。1.4.2 腹水的制備與純化取0.5 mL弗氏不完全佐劑對(duì)2只16周齡雌性BALB/c小鼠

抗綿羊紅細(xì)胞的單克隆抗體，由此發(fā)現(xiàn)了可產(chǎn)生抗體的雜交瘤細(xì)胞。他們發(fā)現(xiàn)，雜交瘤細(xì)胞具有單一的特異性抗原識(shí)別位點(diǎn)，具有小鼠淋巴細(xì)胞的特性和骨髓瘤細(xì)胞持續(xù)增殖的能力[1]。單克隆抗體的識(shí)別性專一，只針對(duì)特定的抗原決定簇反應(yīng)，大大提高了敏感性。雜交瘤細(xì)胞表達(dá)的是針對(duì)淋巴細(xì)胞的特異性抗體，以及其在組織培養(yǎng)中生長(zhǎng)的骨髓瘤細(xì)胞的永生特征。重要的是，雜交瘤是單克隆的，因?yàn)榕囵B(yǎng)的細(xì)胞起源于一個(gè)細(xì)胞。雜交瘤細(xì)胞可注射到組織相容性小鼠體內(nèi)產(chǎn)生腹水細(xì)胞腫瘤，此方法成為高濃度單克隆

的中和IgG1單克隆抗體（mAb），維持了針對(duì)目前已知和報(bào)道的所有變異株的結(jié)合和中和活性，包括Omicron和BA.2。此次獲批是基于一項(xiàng)2期隨機(jī)單劑量臨床試驗(yàn)，評(píng)估了bebtelovimab單藥和bebtelovimab聯(lián)合其他單克隆抗體治療輕至中度COVID-19的療效。該試驗(yàn)的安慰劑對(duì)照部分招募了380名低風(fēng)險(xiǎn)患者。在這部分試驗(yàn)中，患者被隨機(jī)分為單次輸注bebtelovimab、bebtelovimab與其他單克隆抗體或安慰劑。結(jié)果顯示，與安慰劑相比

-18的商品化單克隆抗體或試劑盒較為罕見(jiàn)。為此，本試驗(yàn)制備了抗chIL-18單克隆抗體，為深入研究chIL-18的生物學(xué)功能及炎性小體細(xì)胞焦亡的檢測(cè)打下基礎(chǔ)。1 材料與方法1.1 質(zhì)粒、細(xì)菌種類、蛋白、細(xì)胞類型和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 pGEX-6p-1、pET-28a兩種質(zhì)粒，大腸埃希菌(E.coli)BL21/DH5α，標(biāo)簽蛋白His-IL-1、His-IFN-β、His-IL-10，骨髓瘤細(xì)胞SP2/0，均為本實(shí)驗(yàn)室留存；6～8周齡BALB/c小鼠，購(gòu)自北京維通利

的特異性反應(yīng)。單克隆抗體具有靈敏高、特異性強(qiáng)和制備方便等優(yōu)點(diǎn)，已被廣泛應(yīng)用于疾病的診斷與治療[10]。國(guó)內(nèi)檢測(cè)CDV的抗體產(chǎn)品質(zhì)量不一，雖然國(guó)外有比較成熟化的抗體產(chǎn)品，但其價(jià)格高昂。前期研究已制備了高純度、特異性強(qiáng)的CDV NP。本研究以CDV NP為抗原免疫BALB/c小鼠，采用PEG1500為化學(xué)誘導(dǎo)劑，進(jìn)行細(xì)胞融合，間接ELISA法篩選單克隆雜交瘤細(xì)胞，進(jìn)行腹水誘生，并對(duì)制備的抗體進(jìn)行生物特性鑒定。本研究制備的CDV NP單抗對(duì)犬瘟熱的診斷及防控具有

抗破傷風(fēng)類毒素單克隆抗體的制備為破傷風(fēng)疫苗效價(jià)檢測(cè)新方法的建立、低含量破傷風(fēng)類毒素測(cè)定、吸附度測(cè)定等奠定基礎(chǔ)，以提升我國(guó)破傷風(fēng)疫苗質(zhì)量控制水平。1 材料與方法1.1 材料破傷風(fēng)類毒素由本室提供；HRP標(biāo)記的羊抗鼠二抗為Invitrogen產(chǎn)品；石蠟油為MP Bio‐medical產(chǎn)品；DMEM培養(yǎng)液、胎牛血清為Gibco產(chǎn)品；G蛋白柱為GE Healthcare產(chǎn)品；超濾管為Milli‐pore產(chǎn)品；96孔聚苯乙烯酶標(biāo)板為Greiner Bio-One G

備了抗PbPH單克隆抗體，通過(guò)WB和IFA檢測(cè)PbPH的表達(dá)階段和抗PbPH單克隆抗體的特異性，并通過(guò)體外配子體出絲和動(dòng)合子形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)抗PbPH單克隆抗體的傳播阻斷效果。1 材料與方法1.1 材料1.1.1 試驗(yàn)材料 伯氏瘧原蟲(chóng)(Plasmodiumberghei)ANKA 株，為中國(guó)醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院免疫學(xué)教研室保存；6～8周齡的雌性BALB/c小鼠購(gòu)自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司。1.1.2 培養(yǎng)基 裂殖體培養(yǎng)基：RPMI1640，50 mg/L

-L1為靶點(diǎn)的單克隆抗體可以有效阻斷PD-1/PD-L1信號(hào)通路，促使T細(xì)胞恢復(fù)免疫活性，提高其殺傷腫瘤細(xì)胞的能力。目前經(jīng)美國(guó)FDA批準(zhǔn)上市的抗體有6種，其中帕博利珠單克隆抗體(pembrolizumab)、納武利尤單克隆抗體(nivolumab)和西米普利單克隆抗體(cemiplimab)均是PD-1單克隆抗體，阿特珠單克隆抗體(atezolizumab)、阿維魯單克隆抗體(avelumab)和度伐魯單克隆抗體(durvalumab)均是PD-L1單克隆

16]。中和性單克隆抗體具有特異性強(qiáng)、敏感性高，能夠阻斷病毒感染等特點(diǎn)，被廣泛用于病毒的免疫學(xué)檢測(cè)、免疫保護(hù)評(píng)價(jià)和病毒感染機(jī)制研究等領(lǐng)域[17-20]。孫建慧等[21]利用桿狀病毒表達(dá)的重組PPV VP2蛋白免疫BALB/c小鼠，經(jīng)細(xì)胞融合后采用免疫過(guò)氧化物酶單層細(xì)胞試驗(yàn)（Immunoperoxidase monolayer assay，IPMA）篩選，共獲得8 株抗PPV 的單克隆抗體，這些單克隆抗體均與PPV 感染的豬睪丸細(xì)胞反應(yīng)。劉秀芬等[22]利用

制備了一系列的單克隆抗體，廣泛應(yīng)用于CSFV診斷方法的建立[19-20]。中性單克隆抗體能夠有效抑制病毒感染活性，在病毒與宿主的相互作用、病毒中和性抗原表位研究和免疫評(píng)價(jià)方法建立方面發(fā)揮重要作用。但是，具有中和活性的CSFV單克隆抗體報(bào)道較少，限制了CSFV的相關(guān)研究[21-24]。為此，分別以CSFV SM株和桿狀病毒表達(dá)的CSFV E2蛋白免疫BABL/c小鼠，用經(jīng)典的雜交瘤技術(shù)篩選針對(duì)CSFV E2蛋白中和表位的特異性單克隆抗體，為進(jìn)一步研究CSFV

動(dòng)物細(xì)胞融合和單克隆抗體”是人教版高中生物選修3《現(xiàn)代生物科技專題》的動(dòng)物細(xì)工程的內(nèi)容，其中的單克隆抗體技術(shù)是動(dòng)物細(xì)胞工程的新技術(shù)，與當(dāng)前人類社會(huì)的生活、生產(chǎn)密切相關(guān)，是本節(jié)教材的重點(diǎn)內(nèi)容；但又因其實(shí)驗(yàn)操作技術(shù)復(fù)雜，目前普通中學(xué)的實(shí)驗(yàn)設(shè)備、精密儀器和藥品配備等大都不能滿足學(xué)生實(shí)驗(yàn)需求，故又是難點(diǎn)內(nèi)容。傳統(tǒng)課堂教學(xué)中一般以講述形式先對(duì)動(dòng)物細(xì)胞融合部分進(jìn)行授課，再學(xué)習(xí)單克隆抗體的制備。經(jīng)過(guò)多年教學(xué)實(shí)踐，筆者發(fā)現(xiàn)以上述形式開(kāi)展教學(xué)，學(xué)生往往印象不深刻且很難深入理

體的概念。由于單克隆抗體具有特異性強(qiáng)、靈敏度高、生產(chǎn)成本低等優(yōu)點(diǎn)[11]，已被廣泛應(yīng)用于病毒學(xué)診斷中。為此，本研究利用H1N1和H3N2病毒感染犬腎MDCK細(xì)胞，建立免疫過(guò)氧化物酶單層細(xì)胞試驗(yàn)(IPMA)單克隆抗體檢測(cè)方法，篩選具有保守性的SIV單克隆抗體，為豬流感的檢測(cè)奠定基礎(chǔ)。1 材料和方法1.1 供試動(dòng)物、細(xì)胞系和毒株SPF級(jí)雞胚購(gòu)自北京勃林格殷格翰維通生物技術(shù)有限公司，SPF級(jí)6～8周齡雌性BALB/c小鼠購(gòu)自濟(jì)南朋悅實(shí)驗(yàn)動(dòng)物繁殖有限公司，H1N1

]。病毒特異性單克隆抗體是研究病毒免疫機(jī)制，特別是體液免疫識(shí)別機(jī)制的基本工具，也是開(kāi)發(fā)和診斷檢測(cè)試劑的必需材料。制備病毒的單克隆抗體需要經(jīng)過(guò)抗原純化、小鼠免疫、細(xì)胞融合、單抗篩選、鑒定等重要步驟。其中，單抗篩選是指用病毒抗原來(lái)識(shí)別鑒定混合在大量雜交瘤細(xì)胞中少數(shù)能夠分泌特異性單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株的過(guò)程。建立準(zhǔn)確、簡(jiǎn)單、快速的高通量病毒單克隆抗體篩選方法，在細(xì)胞融合后用于短時(shí)間內(nèi)數(shù)百至數(shù)千個(gè)培養(yǎng)上清樣品的篩選，是制備病毒單克隆抗體的關(guān)鍵技術(shù)。PRRSV具有高

6]。MDCK單克隆細(xì)胞是本實(shí)驗(yàn)室由MDCK工作庫(kù)細(xì)胞通過(guò)有限稀釋法所制備，共制備114株.不同的MDCK單克隆細(xì)胞株在生長(zhǎng)特性上有較大的差異.本研究前期通過(guò)有限稀釋法將MDCK細(xì)胞進(jìn)行單克隆化，獲得了自建MDCK單克隆細(xì)胞庫(kù)，庫(kù)內(nèi)共有114株單克隆細(xì)胞.現(xiàn)通過(guò)復(fù)蘇MDCK單克隆細(xì)胞，統(tǒng)計(jì)細(xì)胞復(fù)蘇活率、生長(zhǎng)狀態(tài)、生長(zhǎng)速度和生長(zhǎng)形態(tài)等特性，確定MDCK單克隆細(xì)胞庫(kù)的可用性，旨在為后期篩選病毒敏感的MDCK單克隆細(xì)胞實(shí)驗(yàn)提供資源和理論參考，為流感疫苗的生產(chǎn)提供

啟科【摘要】 單克隆免疫球蛋白血癥由一組異質(zhì)性疾病組成， 其特征在于B淋巴細(xì)胞或漿細(xì)胞克隆性增殖產(chǎn)生免疫球蛋白， 漿細(xì)胞疾病的特征在于單克隆漿細(xì)胞的增殖。大多數(shù)患者血液或尿液中可檢測(cè)到單克隆免疫球蛋白。這種疾病譜廣泛、疾病表現(xiàn)多樣， 可侵及多器官， 如心臟、肝臟、皮膚、腎臟和神經(jīng)等， 而且大多為少見(jiàn)甚至是罕見(jiàn)疾病， 而有血液學(xué)意義的單克隆免疫球蛋白血癥報(bào)道較少， 此病發(fā)病率低， 極易被誤診?！娟P(guān)鍵詞】 單克隆免疫球蛋白血癥;腫瘤單克隆免疫球蛋白血癥由一組異

18-19]。單克隆抗體具有特異性強(qiáng)、靈敏度高、均一性好的特點(diǎn)。國(guó)外學(xué)者已研制出抗牛IgG、IgG1、IgG2和IgG Fc片段的抗體[18-21]。國(guó)內(nèi)高東微[22]、王平[23]、韓秀娥[24]等研究了牛IgG單克隆抗體的制備，但目前還沒(méi)有商品化的抗牛IgG單克隆抗體，僅有的2 株單克隆抗體由國(guó)外進(jìn)口，價(jià)格十分昂貴。因此，利用雜交瘤技術(shù)制備分泌抗牛IgG的單克隆抗體，對(duì)于牛IgG的免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的建立，具有重要的實(shí)際應(yīng)用價(jià)值和理論研究意義。1 材料與方

研究背景最初，單克隆抗體藥物源于鼠身體中的細(xì)胞。隨著患者應(yīng)用鼠源單抗相關(guān)藥物的增多，此種藥物負(fù)面作用也在臨床治療中所顯現(xiàn)出來(lái)。因此，國(guó)內(nèi)外著重研究治療效果相對(duì)的較好的抗體藥物。伴隨著生物技術(shù)的進(jìn)步，2007年利用能夠產(chǎn)生人類抗體的轉(zhuǎn)基因小鼠XenoMouse技術(shù)，首個(gè)完全人源化單克隆抗體藥物Panitumumab上市，代表著著單克隆抗體抗腫瘤藥物進(jìn)入了一個(gè)新的發(fā)展階段。2.單克隆抗體抗腫瘤類藥物新藥研制狀況2.1 單克隆抗體來(lái)源的抗腫瘤類藥物經(jīng)典品種隨著基

著對(duì)補(bǔ)體調(diào)節(jié)及單克隆免疫球蛋白相關(guān)腎損害的認(rèn)識(shí)，對(duì)MPGN分類有了新的看法。2012年，Sethi等[2]在新英格蘭雜志提出MPGN的新分類，將MPGN根據(jù)免疫熒光分為免疫球蛋白伴補(bǔ)體(Ig和C3均陽(yáng)性)沉積的MPGN和單純補(bǔ)體(Ig-、C3+)沉積的C3腎小球病，前者(免疫復(fù)合物介導(dǎo)的MPGN)再根據(jù)血、尿有無(wú)單克隆免疫球蛋白(monoclonal gammopathy，M蛋白)、病毒感染等體液標(biāo)志物分為單克隆免疫球蛋白和自身免疫、感染相關(guān)的MPGN。隨

830000）單克隆抗體制備的理論基礎(chǔ)是F. Macfarlane Burnet的克隆選擇學(xué)說(shuō)（1959）：每個(gè)哺乳動(dòng)物B淋巴細(xì)胞有特異性抗體的潛力?？贵w鏈的恒定區(qū)域可能會(huì)改變?cè)诹馨图?xì)胞克隆的分化過(guò)程中，但可變區(qū)保留這種奇異的特異性。1975年Kohler和Milstein開(kāi)發(fā)出一種能提高抗原表位的特異性抗體技術(shù)；這種技術(shù)被命名為雜交瘤技術(shù)，用這種方法生產(chǎn)的抗體稱為單克隆抗體。隨著單克隆抗體的廣泛應(yīng)用，其純化技術(shù)也在快速發(fā)展。本文將介紹幾種試用于中小規(guī)模的

犬病病毒中和性單克隆抗體為人類進(jìn)行有效的狂犬病暴露后處置奠定了基礎(chǔ)。同人或馬狂犬病多克隆免疫球蛋白相比，人源化或全人狂犬病病毒中和性單克隆抗體具有數(shù)個(gè)顯著的優(yōu)勢(shì)。最先進(jìn)的人源化或全人狂犬病病毒中和性單克隆抗體應(yīng)當(dāng)廣譜中和狂犬病病毒街毒株，與狂犬病病毒糖蛋白保守的抗原決定簇結(jié)合，在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中對(duì)狂犬病病毒表現(xiàn)出高的中和效價(jià)。組合使用的人源化或全人狂犬病病毒中和性單克隆抗體應(yīng)當(dāng)分別識(shí)別不重疊的抗原表位。本文綜述了對(duì)抗狂犬病治療性抗體的基本要求，討論了尋求新的狂犬

於瑞敏 陳贏對(duì)單克隆抗體制備技術(shù)及應(yīng)用研究進(jìn)展的認(rèn)識(shí)● 於瑞敏 陳贏單克隆抗體是現(xiàn)代生命科學(xué)研究的重要內(nèi)容，本文對(duì)單克隆抗體的類別進(jìn)行了簡(jiǎn)單分析，并且明確指出了現(xiàn)階段應(yīng)用的多種單克隆抗體制備技術(shù)，同時(shí)，也對(duì)單克隆抗體制備技術(shù)的應(yīng)用研究進(jìn)展進(jìn)行了一定的介紹，希望能夠?yàn)槲覈?guó)生命科學(xué)研究事業(yè)的發(fā)展提供一定的理論支持。單克隆抗體;制備技術(shù);應(yīng)用研究在分子生物學(xué)及細(xì)胞生物學(xué)發(fā)展的影響下，單克隆抗體技術(shù)逐漸被應(yīng)用在多個(gè)領(lǐng)域。單克隆抗體就是用特定的培養(yǎng)基篩選出既能穩(wěn)定生

重要危害因子單克隆抗體的制備及其食品安全快速檢測(cè)技術(shù)應(yīng)用食品潛在污染物種類繁多，發(fā)展簡(jiǎn)便、快速、高靈敏、低成本的檢測(cè)方法是保障食品安全的根本途徑。基于單克隆抗體的各類免疫分析技術(shù)是現(xiàn)代食品安全快速檢測(cè)技術(shù)發(fā)展的主要方向之一。因此，高活性單克隆抗體的制備及其應(yīng)用自然為眾多研究者所關(guān)注。單克隆抗體的制備過(guò)程涉及到很多技術(shù)環(huán)節(jié)，包括抗原制備、免疫劑量設(shè)計(jì)、細(xì)胞融合、活性雜交瘤細(xì)胞篩選以及抗體純化等。江南大學(xué)胥傳來(lái)教授團(tuán)隊(duì)發(fā)展了基于理論模型來(lái)預(yù)測(cè)抗原抗體配對(duì)的新方

傅秀慧，劉曉志單克隆抗體藥物耐藥機(jī)制的研究進(jìn)展張懷民1，傅秀慧2，劉曉志3*單克隆抗體藥物的問(wèn)世，使疾病治療的方式發(fā)生了革命性的變化。過(guò)去的20年，單克隆抗體藥物在癌癥、自身免疫等疾病的治療領(lǐng)域發(fā)揮了重要的作用。單克隆抗體藥物低毒和高特異性優(yōu)勢(shì)是其成功的關(guān)鍵。單克隆抗體藥物的這兩個(gè)優(yōu)勢(shì)使其快速替代傳統(tǒng)的化學(xué)療法，但其治療效果也同樣受到耐藥性的困擾。耐藥性是導(dǎo)致單克隆抗體藥物治療效果被抑制的原因之一，單克隆抗體藥物靶向結(jié)合腫瘤細(xì)胞后又被清除的情況，稱為抗體的

雞白細(xì)胞介素4單克隆抗體的制備及鑒定關(guān)曉宇，徐志超，王永強(qiáng)，李曉齊，曹紅，鄭世軍中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué) 動(dòng)物醫(yī)學(xué)院 農(nóng)業(yè)生物技術(shù)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京 100193為了制備雞白細(xì)胞介素4 (chIL-4) 單克隆抗體，將成熟的chIL-4基因亞克隆至原核表達(dá)載體pET-28a和pGEX-6P-1上，然后在大腸桿菌中分別誘導(dǎo)重組蛋白His-chIL-4和GST-chIL-4的表達(dá)，并純化。將純化后的His-chIL-4作為免疫原免疫BALB/c小鼠，經(jīng)4次免疫后，取小鼠

端前B型鈉尿肽單克隆抗體的制備及其鑒定諶海蘭 陳 特 畢小云(重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院檢驗(yàn)科,重慶 400016)目的 通過(guò)經(jīng)典單克隆抗體制備技術(shù)制備氨基端前B型鈉尿肽(NT-proBNP)單克隆抗體，將單克隆抗體進(jìn)行特異性和親和力鑒定，并用于免疫學(xué)檢測(cè)試劑盒的開(kāi)發(fā)。方法 用帶His-Trx-標(biāo)簽蛋白的NT-proBNP免疫Balb/C小鼠制備單克隆抗體。使用PEG1500化學(xué)融合法將小鼠脾細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞SP2/0進(jìn)行融合。用不帶標(biāo)簽的NT-proBNP

免疫球蛋白輕鏈單克隆抗體的鑒定及其應(yīng)用郭永麗，高明春，羅修鑫，鞠環(huán)宇，安東，劉瑩，王君偉東北農(nóng)業(yè)大學(xué) 動(dòng)物醫(yī)學(xué)學(xué)院，黑龍江 哈爾濱 150030郭永麗, 高明春, 羅修鑫, 等. 抗鵝免疫球蛋白輕鏈單克隆抗體的鑒定及其應(yīng)用. 生物工程學(xué)報(bào), 2016, 32(11): 1531?1538.Guo YL, Gao MC, Luo XX, et al. Characterization and application of a monoclonal antib

V）VP3蛋白單克隆抗體的制備與鑒定王彬，李淑芹，李曉齊，曹紅，王永強(qiáng)，鄭世軍（中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院農(nóng)業(yè)生物技術(shù)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京海淀100193）為制備抗IBDV VP3蛋白的單克隆抗體，以VP3-His蛋白免疫BALB/c小鼠，經(jīng)4次免疫、融合、亞克隆，篩選出1株能夠穩(wěn)定分泌抗VP3蛋白單克隆抗體的細(xì)胞株，命名為4H8F7C10。經(jīng)間接ELISA方法檢測(cè)，小鼠的腹水效價(jià)為2.05× 106，單克隆抗體的解離常數(shù)（kD）為9.67×10-8，此株抗體

隆、原核表達(dá)及單克隆抗體的制備崔璐璐，畢嘉成，李俊鑫，劉綠艷，葉秀峰，鄭明星，萬(wàn)曉春，于廣【摘要】目的通過(guò)制備小鼠抗人 IgE 單克隆抗體，為過(guò)敏性疾病的研究及診斷打下基礎(chǔ)。方法以 CRL8033 細(xì)胞的 cDNA 為模板擴(kuò)增人 IgE Fcε3-4 段基因序列并將其連接到 pET-32a（+） 載體中，轉(zhuǎn)化BL21（DE3）大腸桿菌并進(jìn)行表達(dá)。然后將表達(dá)所得包涵體進(jìn)行變復(fù)性，把復(fù)性所得蛋白進(jìn)行親和純化，通過(guò) SDS-PAGE驗(yàn)證純化效果。最后將純化的蛋白

科)細(xì)胞轉(zhuǎn)染中單克隆與混克隆干擾基因效率的比較※劉 燕1，朱吉海2，孫 偉1，趙 珺1(1.青海大學(xué)醫(yī)學(xué)院免疫學(xué)教研室；2.青海大學(xué)附屬醫(yī)院心胸外科)目的 比較細(xì)胞轉(zhuǎn)染中單克隆與混克隆干擾基因效率。方法 采用胃泌素特異干擾載體轉(zhuǎn)染人胃癌原代細(xì)胞株L25，經(jīng)G418抗性篩選獲得混克隆和單克隆細(xì)胞，應(yīng)用RT-PCR、Western blot和免疫熒光三種方法對(duì)混克隆細(xì)胞和單克隆細(xì)胞干擾胃泌素基因的效率進(jìn)行比較。結(jié)果 RT-PCR結(jié)果顯示混克隆細(xì)胞胃泌素mRNA

230601)單克隆抗體治療炎癥性腸病的進(jìn)展聶琳，章禮久(安徽醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院消化內(nèi)科，安徽 合肥230601)摘要：治療炎癥性腸病應(yīng)用較為廣泛的抗腫瘤壞死因子藥物，出現(xiàn)了很多治療失敗的情況。各種新型的有潛力成為治療IBD的藥物已經(jīng)被多個(gè)臨床試驗(yàn)所評(píng)估，考慮到單克隆抗體的靶向性較好，副作用較少等優(yōu)點(diǎn)，該文收集了最新的相關(guān)文獻(xiàn)并歸納總結(jié)了單克隆抗體治療IBD的進(jìn)展。關(guān)鍵詞：結(jié)腸炎，潰瘍性；克羅恩??；抗體，單克隆炎癥性腸病(inflammatorybowe

610021）單克隆抗體的制備現(xiàn)狀及應(yīng)用前景劉 曦（信息產(chǎn)業(yè)電子第十一設(shè)計(jì)研究院科技工程股份有限公司，四川成都 610021）隨著我國(guó)細(xì)胞生物學(xué)技術(shù)以及分子生物學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，單克隆抗體作為重要的生命科技相關(guān)研究技術(shù)在食品、農(nóng)業(yè)、生物科技以及醫(yī)學(xué)等各不同領(lǐng)域均得到較為廣泛的應(yīng)用。其在蛋白質(zhì)的相關(guān)結(jié)構(gòu)以及功能和基因工程等相關(guān)方面發(fā)揮著極為重要的作用，現(xiàn)本文主要對(duì)單克隆抗體在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的相關(guān)疾病診斷以及疾病治療等方面進(jìn)行闡述。單克隆抗體；制備；應(yīng)用前景近年來(lái)，

張秋月單克隆抗體是指由雜交瘤細(xì)胞分泌，針對(duì)復(fù)合抗原分子上單個(gè)抗原決定簇的抗體。其制備原理是將骨髓瘤細(xì)胞sp2/0和免疫過(guò)的小鼠的脾細(xì)胞在促融劑作用下融合，然后檢測(cè)其上清液的抗體，將陽(yáng)性孔經(jīng)過(guò)4～5次亞克隆之后進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)，收集上清液及制備腹水，最后將雜交瘤細(xì)胞凍存起來(lái)以備將來(lái)所需。隨著科技的發(fā)展，單克隆抗體技術(shù)的應(yīng)用也更加廣。由于其可以針對(duì)特異的抗原決定簇，可用于疾病的特異性治療。血清治療根據(jù)定義可知其是運(yùn)用免疫血清來(lái)治療疾病，但是血清包含的免疫球蛋白是多

驗(yàn)室自行研制的單克隆抗體進(jìn)行篩選;采用改良過(guò)碘酸鈉法對(duì)抗體進(jìn)行辣根過(guò)氧化物酶(horseradish peroxidase，HRP)標(biāo)記，從而建立雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(enzyme-linked immune sorbent assay，ELISA)，并將此方法應(yīng)用于癌癥患者PGRP濃度的檢測(cè)，現(xiàn)報(bào)道如下。1 材料與方法1.1 實(shí)驗(yàn)材料 PGRP抗原(本實(shí)驗(yàn)室自行研制);抗原決定簇PGRP(31－98)序列中N端到C端的3個(gè)抗原肽段—GSLKQQLRE

楊芳化學(xué)法、單克隆抗體法和聯(lián)合免疫法檢測(cè)便隱血的臨床比較楊芳目的 對(duì)比化學(xué)法、單克隆抗體法和聯(lián)合免疫法檢測(cè)便隱血的臨床效果。方法 選取大便標(biāo)本90例，采用化學(xué)法、單克隆抗體法和聯(lián)合免疫法3種試驗(yàn)方法，對(duì)其進(jìn)行便隱血檢測(cè)。結(jié)果 化學(xué)法、單克隆抗體法和聯(lián)合免疫法3種方式檢測(cè)出血紅蛋白的最低檢出率分別為2、0.2、0.2mg/ L；化學(xué)法對(duì)人和動(dòng)物的血紅蛋白可發(fā)生反應(yīng)，聯(lián)合免疫法和單克隆抗體僅和人的血紅蛋白發(fā)生反應(yīng)；維生素C濃度超過(guò)10g/L可引起化學(xué)法的陰性結(jié)

洞法、血紅蛋白單克隆抗體法(單克隆抗體法)和轉(zhuǎn)鐵蛋白(Tf)/血紅蛋白(Hb)聯(lián)合免疫法(聯(lián)合免疫法)進(jìn)行性能評(píng)估。方法通過(guò)300例臨床樣本和不同的動(dòng)物血紅蛋白(Hb)、維生素C(VitC)進(jìn)行檢測(cè)，從靈敏度、干擾性實(shí)驗(yàn)、反應(yīng)時(shí)間等檢測(cè)指標(biāo)來(lái)反映三種方法的檢驗(yàn)效能。結(jié)果匹拉米洞法、單克隆抗體法和聯(lián)合免疫法檢測(cè)Hb最低濃度分別為2.5μg/ml、0.1μg/ml、0.1μg/ml，聯(lián)合免疫法檢測(cè)Tf的最低濃度為0.05μg/ml。匹拉米洞法可以和人以及不同動(dòng)

摘要：隨著單克隆抗體技術(shù)應(yīng)用的愈加廣泛，其生產(chǎn)技術(shù)也日臻完善。本文就單克隆抗體制備的篩選過(guò)程及意義進(jìn)行了闡述。關(guān)鍵詞：單克隆；抗體；篩選中圖分類號(hào)：R392 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼： A 文章編號(hào)： 1674-0432（2014）-17-20-11975年英國(guó)劍橋皇家醫(yī)學(xué)委員會(huì)分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室的Kohler和Milstein成功的用細(xì)胞雜交方法把能夠產(chǎn)生針對(duì)特定抗原的抗體分泌細(xì)胞分離出來(lái)，在體外長(zhǎng)期傳代并分泌特異性抗體，這些細(xì)胞經(jīng)過(guò)克隆化，可以形成單克隆細(xì)胞，能產(chǎn)生針

，陳 有EPO單克隆抗體抑制CFU-E研究黃學(xué)文，李素芝，黃 躍，謝曉餓，劉厚東，閆春城，石泉貴，丁浩平，何 鋒，陳 有目的 探討EPO單克隆抗體是否具有抑制紅系集落形成單位(CFU-E)形成的功能。方法 對(duì)大鼠骨髓進(jìn)行定向體外CFU-E培養(yǎng)，按以下條件進(jìn)行分組培養(yǎng)：空白對(duì)照組(不加EPO)、常規(guī)組(加EPO，不加EPO單克隆抗體)、EPO單克隆抗體干預(yù)組(EPO+EPO單克隆抗體)。培養(yǎng)168 h后，觀察各組CFU-E數(shù)量。結(jié)果 空白對(duì)照組、常規(guī)組、EP

ectin-3單克隆抗體的單克隆雜交瘤細(xì)胞，并初步鑒定其生物學(xué)活性，為進(jìn)一步研究Dectin-2和Dectin-3的生物學(xué)功能研究提供有效的工具。1 材料與方法1.1 材料質(zhì)粒 pET28a(+)、pRV3-Dectin-2、pRV3-Dectin-3及菌株E.coliDH5α與BL21(DE3)由本實(shí)驗(yàn)室保存;RT-PCR反應(yīng)試劑盒、高保真DNA聚合酶購(gòu)自美國(guó)TaKaRa公司;限制性內(nèi)切酶BamHⅠ、XholⅠ和T4 DNA連接酶購(gòu)自美國(guó)Thermo公司

輕鏈分析法檢測(cè)單克隆Y-病王繼貴(中南大學(xué)湘雅二醫(yī)院,湖南長(zhǎng)沙410011)單克隆免疫球蛋白游離輕鏈,對(duì)單克隆γ-病是一種重要的診斷標(biāo)志物.150多年來(lái)一直沿用尿加熱試驗(yàn)檢查Bence-Jones蛋白,以及用血清蛋白電泳及尿蛋白電泳檢查M蛋白區(qū)帶,診斷單克隆γ-病.這些方法敏感度低,特異性差,遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足該病診斷和分類的要求.近十年來(lái),發(fā)展了血清游離輕鏈的自動(dòng)化免疫試驗(yàn),能獨(dú)立地測(cè)定κ鏈、λ鏈、κ/λ比率和游離輕鏈總量,大大地提高了單克隆γ-病的診斷、分類

000化學(xué)法、單克隆抗體法和聯(lián)合免疫法檢測(cè)便隱血的臨床比較張野鐵嶺市婦嬰醫(yī)院檢驗(yàn)科，遼寧鐵嶺112000目的探討化學(xué)法、單克隆抗體法和聯(lián)合免疫法檢測(cè)便隱血的臨床效果。方法選取該院2013年5月—2014年5月間收治的大便標(biāo)本90例作為研究對(duì)象，通過(guò)靈敏性、干擾性和特異性對(duì)化學(xué)法、單克隆抗體法和聯(lián)合免疫法三種試驗(yàn)方法進(jìn)行比較，并采用三種試驗(yàn)方法同時(shí)對(duì)90例大便標(biāo)本進(jìn)行便隱血檢測(cè)。結(jié)果聯(lián)合免疫法、化學(xué)法以單克隆抗體法三種方式檢測(cè)出血紅蛋白的最低檢出濃度分別為2

V）P1蛋白的單克隆抗體（McAb），本研究利用重組犬瘟熱病毒P1蛋白免疫BALB/c小鼠，并將其脾淋巴細(xì)胞與SP2/0進(jìn)行融合，用CDV包被ELISA板，通過(guò)間接ELISA法篩選出兩株穩(wěn)定分泌抗CDV-P1的雜交瘤細(xì)胞株（E9E4C10、E9F8D9）。間接ELISA檢測(cè)腹水效價(jià)均為1∶106，亞類鑒定結(jié)果均為IgG2b。Western blotting和間接免疫熒光（IFA）分析結(jié)果表明，兩株單克隆抗體均能與重組P1蛋白和CDV發(fā)生反應(yīng)；ELISA疊加

。對(duì)PRRSV單克隆抗體的研究可為PRRSV快速檢測(cè)方法的建立提供技術(shù)支持，是PRRS研究中的熱點(diǎn)之一。本研究采用純化的PRRSV全病毒作為抗原，通過(guò)淋巴細(xì)胞雜交瘤技術(shù)，獲得了高親和力、高特異性抗PRRSV M蛋白的單克隆抗體，并對(duì)單克隆抗體的生物學(xué)特性進(jìn)行了鑒定，為建立基于單克隆抗體的雙抗體夾心ELISA、間接免疫熒光試驗(yàn)、膠體金試紙條等快速檢測(cè)技術(shù)奠定基礎(chǔ)。1 材料與方法1.1 毒種和細(xì)胞PRRSV HUB1毒株、Marc-145細(xì)胞、小鼠骨髓瘤SP2

加以綜述。1 單克隆抗體1.1 曲妥珠單克隆抗體 曲妥珠單克隆抗體（trastuzumab）是人源化的重組抗HER-2單克隆抗體，是一個(gè)95%來(lái)自人和5%來(lái)自鼠的IgG抗體。曲妥珠單克隆抗體能夠選擇性作用于HER-2的細(xì)胞外部分，通過(guò)阻斷HER-2介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路、降低細(xì)胞膜HER-2蛋白濃度、加速HER-2受體蛋白降解、參與抗血管生成作用導(dǎo)致細(xì)胞生長(zhǎng)受抑制和誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，以及通過(guò)ADCC誘導(dǎo)機(jī)體殺死腫瘤細(xì)胞。曲妥珠單克隆抗體是針對(duì)HER-2靶點(diǎn)設(shè)計(jì)的第