張野

鐵嶺市婦嬰醫(yī)院檢驗科，遼寧鐵嶺112000

化學法、單克隆抗體法和聯(lián)合免疫法檢測便隱血的臨床比較

張野

鐵嶺市婦嬰醫(yī)院檢驗科，遼寧鐵嶺112000

目的探討化學法、單克隆抗體法和聯(lián)合免疫法檢測便隱血的臨床效果。方法選取該院2013年5月—2014年5月間收治的大便標本90例作為研究對象，通過靈敏性、干擾性和特異性對化學法、單克隆抗體法和聯(lián)合免疫法三種試驗方法進行比較，并采用三種試驗方法同時對90例大便標本進行便隱血檢測。結果聯(lián)合免疫法、化學法以單克隆抗體法三種方式檢測出血紅蛋白的最低檢出濃度分別為2、20、0.2；化學法對人和動物的血紅蛋白可發(fā)生反應，聯(lián)合免疫法和單克隆抗體僅和人的血紅蛋白發(fā)生反應；單克隆抗體法和聯(lián)合免疫法不受維生素C的干擾，當維生素C濃度超過10 mg/mL可引起化學法的陰性結果，而對聯(lián)合免疫法和單克隆抗體的檢測無影響。50例大便標本作為健康對照組，22例診斷為上消化道出血，記為上消化道出血組，18例診斷為下消化道腫瘤性病變，記為下消化道腫瘤性病變組，其中，化學法檢出陽性例數(shù)30例、22例、18例，單克隆抗體法檢出陽性例數(shù)17例、10例、15例，聯(lián)合免疫法檢出陽性例數(shù)25例、22例、18例。結論聯(lián)合免疫法具有較好的特異性且靈敏度比較高，抗干擾性比較強，具有良好的發(fā)展前景，在臨床上有良好的應用價值。

化學法；單克隆抗體法；聯(lián)合免疫法；便隱血

臨床上，便隱血主要是檢測消化道出血的常規(guī)診斷指標，同時也是消化道惡性腫瘤早期診斷的重要篩查指標。隨著醫(yī)療技術的快速發(fā)展，化學法、單克隆抗體法和聯(lián)合免疫法檢測便隱血具有顯著的臨床效果。其中，化學法以匹拉米洞法為主要檢測方法，但極易受到食物和藥物的影響，發(fā)假陽性反應[1]。而單克隆抗體法雖不受食物影響，但血紅蛋白極易產(chǎn)生變性，發(fā)生假陰性反應[2]。聯(lián)合免疫法則不受食物和藥物影響，對便隱血的檢測擁有良好的應用價值。對此，為了對比分析化學法、單克隆抗體法和聯(lián)合免疫法檢測便隱血的臨床效果，現(xiàn)選取該院2013年5月—2014年5月間收治的大便標本90例作為研究對象?，F(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取該院收治的大便標本90例作為研究對象，通過靈敏性、干擾性和特異性對化學法、單克隆抗體法和聯(lián)合免疫法三種試驗方法進行比較，并采用三種試驗方法同時對90例大便標本進行便隱血檢測。其中，50例大便標本作為健康對照組，為臨床未診斷有任何消化道疾病的常規(guī)檢測標本；22例診斷為上消化道出血，記為上消化道出血組，18例診斷為下消化道腫瘤性病變，記為下消化道腫瘤性病變組；血紅蛋白由正常人血液制成，以人、兔、羊、雞等動物血液制成濃度不同的血紅蛋白和維生素C。其中，前者用于靈敏性試驗，后者用于干擾性試驗。

1.2 試劑和方法

聯(lián)合免疫法主要以華普曼生物工程有限公司提供的聯(lián)合免疫法診斷試紙，按照說明書操作，結果判讀參照說明書，單克隆抗體法采用華普曼生物工程有限公司提供的“速而準”便隱血單克隆抗體試劑盒，嚴格按照使用說明測定，5 min內(nèi)讀取結果。兩條紫紅色條帶出現(xiàn)為陽性，一條紫紅色條帶出現(xiàn)為陰性?；瘜W法采用珠海貝索的貝索大便隱血Ⅱ號試紙進行檢測，利用紙卡作為大便檢體的輸送容器，其陽性反應最終呈色為紫紅色。

1.3 靈敏性、特異性和干擾性試驗

1.3.1 靈敏性試驗取已知濃度轉鐵蛋白，采用蒸餾水將其稀釋成500、200、100、20、2和0.25種濃度的大便懸浮液，用化學法、單克隆抗體法和聯(lián)合免疫法分別對其進行測定。

1.3.2 特異性試驗用化學法、單克隆抗體法和聯(lián)合免疫法這三種方法對500的人、兔、羊、雞血紅蛋白液反應。

1.3.3 干擾性試驗在含500的大便混懸液中加入4種不同濃度的維生素C，用化學法、單克隆抗體法和聯(lián)合免疫法這三種方法對其進行測定。

1.4 統(tǒng)計方法

數(shù)據(jù)均采用統(tǒng)計學軟件SPSS18.0處理，計量資料以均數(shù)±標準差（±s）表示，組間比較采用χ2檢驗，P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 三種便隱血試驗靈敏性比較

聯(lián)合免疫法、化學法以單克隆抗體法三種方式檢測出血紅蛋白的最低檢出濃度分別為2、20、0.2。其中，“+”為陽性，“-”為陰性，見表1。

表1 三種檢測方法人的血紅蛋白液（μg/mL）

2.2 三種便隱血試驗特異性比較

化學法對人和動物的血紅蛋白可發(fā)生反應，聯(lián)合免疫法和單克隆抗體僅和人的血紅蛋白發(fā)生反應。其中，“+”為陽性，“-”為陰性，見表2

表2 三種檢測方法檢測人和動物的血紅蛋白（μg/mL）

2.3 三種便隱血試驗抗干擾性比較

單克隆抗體法和聯(lián)合免疫法不受維生素C的干擾，當維生素C濃度超過10 mg/mL可引起化學法的陰性結果，而對聯(lián)合免疫法和單克隆抗體的檢測無影響。其中，“+”為陽性，“-”為陰性，見表3。

表3 三種便隱血試驗抗干擾性比較（mg/L）

2.4 三種便隱血試驗檢測陽性率比較

50例大便標本作為健康對照組，22例診斷為上消化道出血，記為上消化道出血組，18例診斷為下消化道腫瘤性病變，記為下消化道腫瘤性病變組，化學法檢出陽性例數(shù)30例、22例、18例，單克隆抗體法檢出陽性例數(shù)17例、10例、15例，聯(lián)合免疫法檢出陽性例數(shù)25例、22例、18例。聯(lián)合免疫法檢測陽性率和單克隆抗體法差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），化學法和單克隆抗體差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。

表4 三種便隱血試驗檢測陽性率比較[n(%)]

3 討論

通常情況下，單克隆抗體和聯(lián)合免疫法兩種檢測便隱血的方法，主要為了檢測人體血紅蛋白抗原，而聯(lián)合免疫法除了檢測人體血紅蛋白抗原外，還檢測人轉鐵蛋白，具有較強的特異性和靈敏性，不會受到食物和藥物等因素的影響，基于這種優(yōu)勢，單克隆抗體和聯(lián)合免疫法兩種檢測方法均被廣泛應用于各個醫(yī)院中。但也有不足之處，當患者正常生理失血時，很容易產(chǎn)生假陽性結果；而單克隆抗體法極易因血紅蛋白變性產(chǎn)生假陰性結果；化學法則很容易受到藥物和食物的影響，進而產(chǎn)生假陽性結果。因此，化學法多以匹拉米洞組為代表，其原理是利用匹拉米洞為呈色指示劑，在酸及過氧化氫溶液作用下，與血紅蛋白作用，產(chǎn)生紫藍而后呈現(xiàn)紫紅的顏色[3]。但匹拉米洞化學法跟其他化學法一樣都是基于過氧化物酶活性的測定[4]，此法不具有特異性，其靈敏度比較低[5]，不易進行質(zhì)量管理等問題。所以，聯(lián)合免疫法具有較好的特異性且靈敏度比較高，抗干擾性比較強，具有良好的發(fā)展前景，在臨床上有良好的應用價值。

從研究中可以看出，22例上消化道出血組利用聯(lián)合免疫法、化學法和單克隆抗體法檢測陽性率分別為100%、98.5%、75.6%，其中聯(lián)合免疫法和單克隆抗體法差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）?；瘜W法和單克隆抗體法差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），而18例下消化道出血利用聯(lián)合免疫法、化學法和單克隆抗體法檢測陽性率分別為100%、96.4%、82.5%，化學法和單克隆抗體法、化學法與聯(lián)合免疫法之間差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。而對照組采用聯(lián)合免疫法、化學法和單克隆抗體法檢測陽性率分別為52.8%、65.8%、21.4%?；瘜W法與單克隆抗體差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。由此可見，聯(lián)合免疫法中的轉鐵蛋白在糞便中的穩(wěn)定性高于血紅蛋白，所以同時檢測轉鐵蛋白可以減少由于血紅蛋白抗原性消失而出現(xiàn)的假陰性結果，提高檢出的精度[6]。而單克隆抗體法利用抗人血紅蛋白或抗人紅細胞基質(zhì)抗體與膠體金結合，可檢測微量的血紅蛋白，對人體微量的消化道出血更敏感。而化學法則受的影響因素較多[7]。所以，三種檢測方法各有其獨自的適用性[8]。

綜上所述，化學法快捷方便，但對人和動物的血紅蛋白可發(fā)生反應，靈敏度比較低，而單克隆抗體能夠直接測定人體血紅蛋白，靈敏度比較高，不易受外界因素干擾，但很容易受到血紅蛋白抗原性變化，出現(xiàn)假陰性結果。而聯(lián)合免疫法則彌補了以上方法的不足，一旦化學法和單克隆方法的測定結果有疑問時，則可以結合患者實際病情測定結果，采用聯(lián)合免疫法作為有效互補，進一步提高檢測便隱血的準確性。

[1]劉蘭英.糞便隱血試驗聯(lián)合檢測的臨床應用探討[J].醫(yī)藥前沿,2011,15 (23):190-191.

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[3]鄧紅艷，赫蘭輝.糞便隱血試驗聯(lián)合檢測的臨床應用[J].檢驗醫(yī)學與臨床,2013,10(10):1315-1316.

[4]李功軍，鄒偉.探討大便隱血的檢測方法[J].醫(yī)藥前沿,2014,11(13):34-35.

[5]陳健康，肖敏敏.免疫膠體金法檢測糞便隱血的應用評價[J].檢驗醫(yī)學與臨床,2010,7(11):1113-1114.

[6]潘崖，馮家伍.血紅蛋白聯(lián)合轉鐵蛋白便隱血實驗在大腸癌檢測中的應用[J].醫(yī)藥前沿,2009,49(16):46-47.

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R446.6

A

1672-5654（2014）12（c）-0183-02

2014-09-25）

張野（1979-），滿族，本科，主管檢驗技師，研究方向：臨床基礎檢驗。