重要危害因子單克隆抗體的制備及其食品安全快速檢測技術(shù)應用

食品潛在污染物種類繁多，發(fā)展簡便、快速、高靈敏、低成本的檢測方法是保障食品安全的根本途徑?；趩慰寺】贵w的各類免疫分析技術(shù)是現(xiàn)代食品安全快速檢測技術(shù)發(fā)展的主要方向之一。因此，高活性單克隆抗體的制備及其應用自然為眾多研究者所關(guān)注。

單克隆抗體的制備過程涉及到很多技術(shù)環(huán)節(jié)，包括抗原制備、免疫劑量設計、細胞融合、活性雜交瘤細胞篩選以及抗體純化等。江南大學胥傳來教授團隊發(fā)展了基于理論模型來預測抗原抗體配對的新方法，創(chuàng)制了重金屬鉛、鎘、汞等元素的免疫分析試劑和產(chǎn)品。設計出真菌毒素、抗菌劑、殺蟲劑、抗生素、激素、病原微生物以及非法添加物等物質(zhì)的特異性新型半抗原和完全抗原，在抗體篩選以及抗原、抗體配對過程中引入食品基質(zhì)，有效提升了檢測試劑的基質(zhì)耐受性，獲得了200余種優(yōu)良抗體和配對抗原，解決了抗體和抗原在實際檢測過程中耐受性差，易失效的難題，提升了快速檢測結(jié)果的可靠性和穩(wěn)定性，相關(guān)檢測試劑和產(chǎn)品在行業(yè)內(nèi)獲得廣泛應用。如中國專利CN201610538905.3提供的抗氫化可的松特異性單克隆抗體雜交瘤細胞株CGMCC No.12022可以分泌產(chǎn)生對氫化可的松具有較好的特異性和較高的靈敏度，可以用于制備氫化可的松的免疫檢測試劑盒以及膠體金試紙條。CN201610480745.1公開了一株重金屬鉻單克隆抗體雜交瘤細胞株C2及其應用。該發(fā)明通過鉻完全抗原與等量弗氏佐劑混合乳化后，通過背部皮下注射免疫BALB/c小鼠，經(jīng)過間接競爭ELISA篩選和三次亞克隆，得到重金屬鉻單克隆抗體雜交瘤細胞株C2。此細胞株分泌的單克隆抗體可識別重金屬三價鉻離子，特異性好和靈敏度高，可以用于食品安全中重金屬鉻的殘留檢測。CN201610480743.2公開了一株砷單克隆抗體雜交瘤細胞株FG1及其應用。該發(fā)明獲得的抗砷離子單克隆抗體細胞株FG1，對砷有較好的檢測靈敏度和特異性。該細胞株FG1分泌的抗體穩(wěn)定性好：雜交瘤細胞凍存于液氮中至少保存5年，純化的抗體在-20℃冰箱中至少可存放2年；抗體特異性高：與其他金屬離子暫未發(fā)現(xiàn)交叉反應。CN201610396856.4公開了基于沙門氏菌核心多糖單克隆抗體SQX6D8的檢測食品中沙門氏菌屬的膠體金試紙條的制備方法，其以高碘酸鈉法合成的鼠傷寒沙門氏菌脂多糖（LPS）與牛血清白蛋白（BSA）的偶聯(lián)物作為膠體金試紙條測試線（T線）的包被原，以沙門氏菌核心多糖單克隆抗體SQX6D8作為金標抗體。CN201610372606.7公開了一株抗呋喃它酮代謝物AMOZ的單克隆抗體雜交瘤細胞株YH4及其應用，該發(fā)明雜交瘤細胞株YH4，已保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號為CGMCC No.12017?？惯秽x物AMOZ單克隆抗體，它由所述雜交瘤細胞株YH4分泌產(chǎn)生。此細胞株YH4分泌的單克隆抗體，對呋喃它酮代謝物AMOZ具有較好的特異性，有較好的檢測靈敏度和親和力，可用于食品安全中抗呋喃它酮代謝物AMOZ的特異性檢測。CN201610324645.X公開了一株抗雌三醇特異性單克隆抗體雜交瘤細胞株NaN2及其應用。該發(fā)明的抗雌三醇特異性單克隆抗體雜交瘤細胞株NaN2，已保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號為CGMCC No. 12016。CN201610056165.X公開了一株特異性抗丙烯酰胺單克隆抗體雜交瘤細胞株2F6及其應用。該發(fā)明將原藥丙烯酰胺與對巰基苯甲酸采用化學衍生加成制備半抗原，半抗原與BSA偶聯(lián)制備免疫原，半抗原與OVA偶聯(lián)制備包被原。對小鼠進行免疫后得到一株特異性抗丙烯酰胺單克隆抗體雜交瘤細胞株2F6。此細胞株2F6分泌的單克隆抗體，僅特異性針對衍生化丙烯酰胺，與丙烯酰胺本身、對巰基苯甲酸交叉率分別為2.19%、3.87%。獲得的抗丙烯酰胺單克隆抗體細胞株，有較好的檢測靈敏度和親和力，可以達到特異性檢測丙烯酰胺的目的。CN201610056172.X公開了一株特異性抗頭孢喹肟單克隆抗體雜交瘤細胞株2D4及其應用。CN201610039900.6公開了一種基于單克隆抗體的檢測食品中李斯特菌屬的雙抗體夾心ELISA法。該發(fā)明用原核表達的單增李斯特菌P60蛋白免疫8周齡BALB/c小鼠，經(jīng)免疫、融合、多重篩選得到15株李斯特菌屬特異性單克隆抗體，分別標記辣根過氧化物酶HRP，并以單增李斯特菌CMCC54003為目標物進行兩兩配對。經(jīng)篩選不同配對的交叉反應，以2G7為包被抗體、2H8-HRP為酶標抗體建立夾心ELISA方法對包括單增李斯特菌在內(nèi)的李斯特菌屬均有交叉反應。對測試的金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、大腸桿菌O157、沙門氏菌、阪崎腸桿菌、空腸彎曲桿菌、結(jié)腸彎曲桿菌沒有交叉反應。

單克隆抗體技術(shù)雖然在食品安全檢測領(lǐng)域有廣泛的應用，但是在如何開發(fā)高活性單克隆抗體方面還有很多技術(shù)問題有待于解決,需要研究者針對每個關(guān)鍵環(huán)節(jié)進行深入研究。

（江南大學圖書館 張群）