● 於瑞敏 陳贏

對單克隆抗體制備技術(shù)及應(yīng)用研究進展的認識

● 於瑞敏 陳贏

單克隆抗體是現(xiàn)代生命科學(xué)研究的重要內(nèi)容，本文對單克隆抗體的類別進行了簡單分析，并且明確指出了現(xiàn)階段應(yīng)用的多種單克隆抗體制備技術(shù)，同時，也對單克隆抗體制備技術(shù)的應(yīng)用研究進展進行了一定的介紹，希望能夠為我國生命科學(xué)研究事業(yè)的發(fā)展提供一定的理論支持。

單克隆抗體;制備技術(shù);應(yīng)用研究

在分子生物學(xué)及細胞生物學(xué)發(fā)展的影響下，單克隆抗體技術(shù)逐漸被應(yīng)用在多個領(lǐng)域。單克隆抗體就是用特定的培養(yǎng)基篩選出既能穩(wěn)定生長又能產(chǎn)生抗體的雜交瘤細胞，經(jīng)過多年的研究，相關(guān)科研人員已經(jīng)意識到單克隆抗體技術(shù)對于科研發(fā)展的重要性，所以，我國加強了對單克隆抗體制備技術(shù)的重視，不斷提高單克隆抗體制備技術(shù)水平。

1 單克隆抗體的類別

1.1 人源化抗體

抗體的人源化改造主要是對抗體進行表面重塑或者重新構(gòu)造，其中，表面塑造是指對鼠源抗體特殊區(qū)域表面的氨基酸進行重新塑造，這種方式具有一定的局限性，這只適合在與人抗體具有明顯差異的表面氨基酸，利用與人抗體相似的氨基酸殘基對其進行替換，從而提高抗體與抗原的特異性結(jié)合;重構(gòu)抗體，是目前應(yīng)用最常見的基本方法，其中的互補決定區(qū)移植抗體是通過對鼠源抗體上的互補決定區(qū)，經(jīng)過分子克隆后，克隆到人體抗體與之相對應(yīng)的區(qū)域內(nèi)，但這種方法仍會存在非人源基因的少量殘留，仍存在因其人體免疫排斥的可能[1]。

1.2 嵌合單克隆抗體

圖1 小鼠單克隆抗體制備

自從單克隆抗體技術(shù)出現(xiàn)以來，單抗制備技術(shù)的一般流程就是從具有抗原免疫的小鼠中獲取它的脾細胞，再將其與骨髓瘤細胞進行融合處理，最后對單個細胞進行克隆，從而培養(yǎng)出既能分泌抗體又能穩(wěn)定生長的克隆細胞(如圖1)。首先，免疫細胞表面F鍛受體親和力弱，產(chǎn)生的抗體依賴性細胞介導(dǎo)的細胞毒作用較弱，而且它與人補體成分結(jié)合能力低，對腫瘤細胞的殺傷能力較弱，并且鼠源性抗體在人血循環(huán)中的半衰期短，它發(fā)揮細胞毒作用的時間較短;其次，鼠單克隆抗體具有自身的免疫原性，這極易導(dǎo)致宿主發(fā)生過敏反應(yīng)，這樣不僅會影響單抗的效價，而且會嚴重影響病人的身體狀況，所以，為了更好的應(yīng)用于臨床治療，相關(guān)人員還需要對鼠源單克隆抗體做進一步的完善。

2 單克隆抗體制備技術(shù)

2.1 噬菌體抗體庫技術(shù)

噬菌體抗體庫技術(shù)主要是促進基因表達產(chǎn)物與親和選擇相結(jié)合的一種技術(shù)，它的實施載體是被改造的噬菌體，在噬菌體外殼蛋白質(zhì)基因區(qū)域插入待選基因片段，這就使得蛋白質(zhì)或者外源多肽的表達產(chǎn)物呈現(xiàn)在噬菌體的表面，進而通過親和富集法表達有特異膚或蛋白質(zhì)的噬菌體，該技術(shù)實現(xiàn)了基因型和表型的轉(zhuǎn)換。利用這種方式，促使一個具有上億個體外方式獲得的不同抗體基因數(shù)據(jù)庫的形成，使從真實的抗原中迅速分離高度相似的同族抗體成為可能，得到的抗體可用于制備完全人源化抗體。

2.2 核糖體展示技術(shù)

核糖體展示技術(shù)的基本原理就是利用PCR技術(shù)對目的基因進行擴增，使其形成DNA文庫，同時，將啟動子、核糖體結(jié)合位點等加入其中，并且將它們放置在具有藕聯(lián)轉(zhuǎn)錄翻譯的無細胞翻譯系統(tǒng)中進行發(fā)育，在核糖體表面上承載目的基因的翻譯產(chǎn)物，并且形成mRNA—蛋白質(zhì)—核糖體的三元復(fù)合體，最后通過常規(guī)的免疫學(xué)檢測方法，通過固相化的靶分子直接從三元復(fù)合體中篩選出感興趣的核糖體復(fù)合體，再利用RTPLR擴增，經(jīng)過多次循環(huán)過程，最終篩選出高親和力的目標(biāo)分子[2]。

3 單克隆抗體制備技術(shù)的應(yīng)用前景

3.1 應(yīng)用于疾病的檢測

單克隆抗體可以對病原體類型進行準確識別，并且針對感染性疾病能夠進行精確判斷。同時，單克隆抗體還可以通過檢測淋巴細胞表面分子，并且能夠判斷出淋巴細胞的分化階段。其中，激素類單克隆抗體能夠測定人體內(nèi)的激素含量，并且利用該信息可以對體內(nèi)的內(nèi)分泌情況進行判斷。

3.2 應(yīng)用于疾病的臨床治療

單克隆抗體可以針對多種疾病進行治療，其中對腫瘤臨床治療具有明顯的效果。單克隆抗體治療腫瘤的方式主要有生物導(dǎo)彈和純抗體兩種，現(xiàn)階段已有幾十種特異性單克隆抗體應(yīng)用于臨床治療，推動了腫瘤治療技術(shù)的發(fā)展。

3.3 均應(yīng)用于疾病的預(yù)防

人體免疫主要由自身主動免疫及特異性免疫等構(gòu)成，特異性免疫屬于被動免疫，在抗原侵入人體后，在人體內(nèi)部加入抗體，對病原體進行中和及清除，從而實現(xiàn)對疾病的預(yù)防。主動免疫是指在對病原體進行減毒化操作后，將其接種到人體內(nèi)，使人體產(chǎn)生一定的免疫，促使體內(nèi)的抗體對其產(chǎn)生相應(yīng)的記憶，比如，對人體接種卡介苗等。雖然這兩種免疫方式有所不同，但是，它們都可以利用單克隆抗體技術(shù)進行免疫。

4 結(jié)束語

本文通過對單克隆抗體的類別、單克隆抗體制備技術(shù)、單克隆抗體制備技術(shù)應(yīng)用前景的研究分析，明確了單克隆抗體制備技術(shù)對于我國科學(xué)研究事業(yè)發(fā)展的重要作用。單克隆抗體制備技術(shù)的應(yīng)用研究主要體現(xiàn)在用于疾病的檢測、治療及預(yù)防等方面，這充分的體現(xiàn)出了單克隆抗體制備技術(shù)不僅關(guān)乎科學(xué)事業(yè)的發(fā)展，而且還關(guān)系到人類的健康水平，所以，加強對單克隆抗體制備技術(shù)的研究具有重要的現(xiàn)實意義。

(作者單位：基蛋生物科技股份有限公司)

[1]郭粉粉,梁文波,張學(xué)梅.單克隆抗體制備技術(shù)及應(yīng)用的研究進展[J].醫(yī)學(xué)綜述,2011,08：1129-1131.

[2]張力文.單克隆抗體制備技術(shù)的類別與應(yīng)用[J].科技風(fēng) ,2017,03：256.