楊芳

化學(xué)法、單克隆抗體法和聯(lián)合免疫法檢測(cè)便隱血的臨床比較

楊芳

目的 對(duì)比化學(xué)法、單克隆抗體法和聯(lián)合免疫法檢測(cè)便隱血的臨床效果。方法 選取大便標(biāo)本90例，采用化學(xué)法、單克隆抗體法和聯(lián)合免疫法3種試驗(yàn)方法，對(duì)其進(jìn)行便隱血檢測(cè)。結(jié)果 化學(xué)法、單克隆抗體法和聯(lián)合免疫法3種方式檢測(cè)出血紅蛋白的最低檢出率分別為2、0.2、0.2mg/ L；化學(xué)法對(duì)人和動(dòng)物的血紅蛋白可發(fā)生反應(yīng)，聯(lián)合免疫法和單克隆抗體僅和人的血紅蛋白發(fā)生反應(yīng)；維生素C濃度超過(guò)10g/L可引起化學(xué)法的陰性結(jié)果，而對(duì)聯(lián)合免疫法和單克隆抗體的檢測(cè)無(wú)影響?；瘜W(xué)法、單克隆抗體法和聯(lián)合免疫法3種不同的檢測(cè)方法檢測(cè)上消化道出血組的陽(yáng)性率分別為95.2%、72.1%、91.2%，檢測(cè)下消化道出血組的陽(yáng)性率分別為75.6%、96.8%、100%；檢測(cè)正常組的陽(yáng)性率分別為10.5%、3.2%、6.8%。結(jié)論 化學(xué)法、單克隆抗體法和聯(lián)合免疫法3種檢測(cè)方法相互結(jié)合、相互補(bǔ)充，有助于提高消化道出血性疾病的檢出率，為臨床提供更加精確的結(jié)果。

化學(xué)法；單克隆抗體法；聯(lián)合免疫法；便隱血

臨床上，便隱血主要是檢測(cè)消化道出血的常規(guī)診斷指標(biāo)，同時(shí)也是消化道惡性腫瘤早期診斷的重要篩查指標(biāo)。隨著醫(yī)療技術(shù)的快速發(fā)展，化學(xué)法、單克隆抗體法和聯(lián)合免疫法檢測(cè)便隱血具有顯著的臨床效果。其中，化學(xué)法以匹拉米洞法為主要檢測(cè)方法，但極易受到食物和藥物的影響，發(fā)生陽(yáng)性反應(yīng)。而單克隆抗體法雖不受食物影響，但血紅蛋白極易產(chǎn)生變性，發(fā)生假陰性反應(yīng)[1]。聯(lián)合免疫法則不受食物和藥物影響，對(duì)便隱血的檢測(cè)擁有良好的應(yīng)用價(jià)值。對(duì)此，為了對(duì)比分析化學(xué)法、單克隆抗體法和聯(lián)合免疫法檢測(cè)便隱血的臨床效果，現(xiàn)選取大便標(biāo)本90例作為研究對(duì)象?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取河南省商丘市第一人民醫(yī)院2013年5月～2014年5月收治的大便標(biāo)本90例作為研究對(duì)象，其中，以50例大便標(biāo)本未診斷出任何消化道疾病，將其設(shè)為對(duì)照組，22例診斷為上消化道出血，記為上消化道出血組，18例診斷為下消化道出血，記為下消化道出血組；血紅蛋白由正常人血液制成，以豬、雞、鴨等動(dòng)物血液制成濃度不同的血紅蛋白和維生素C。其中，前者用于靈敏性試驗(yàn)，后者用于干擾性試驗(yàn)。

1.2 方法 采用化學(xué)法、單克隆抗體法和聯(lián)合免疫法3種試驗(yàn)方法，分別對(duì)90例大便標(biāo)本其進(jìn)行便隱血檢測(cè)。

1.2.1 檢驗(yàn)方法 化學(xué)法主要以匹拉米洞為主，采用BASO公司生產(chǎn)的試劑進(jìn)行檢測(cè)，一旦發(fā)生陽(yáng)性反應(yīng)，則會(huì)呈現(xiàn)紫紅色。單克隆抗體法則采用宜百康生物科技股份有限公司提供的便隱血單克隆抗體試劑盒，根據(jù)說(shuō)明書(shū)的步驟進(jìn)行檢測(cè)，5min后，若出現(xiàn)2條紫紅色條帶，則為陽(yáng)性，如果出現(xiàn)1條則為陰性。聯(lián)合免疫法則采用宜百康生物科技股份有限公司提供聯(lián)合免疫法診斷試紙，其操作同樣嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.2.2 實(shí)驗(yàn)方法

（1）靈敏度實(shí)驗(yàn)方法。取正常人血液制成血紅蛋白，利用蒸餾水，將其稀釋成為血紅蛋白2000、1000、500μg/mL等不同濃度的血紅蛋白混合液，分別利用化學(xué)法、單克隆抗體法和聯(lián)合免疫法3種檢測(cè)方法進(jìn)行檢測(cè)，

（2）干擾性實(shí)驗(yàn)方法。取雞、鴨、豬等集中動(dòng)物全血，將其制成1000、200、20mg/L等濃度的血紅蛋白混合液，分別將50、25、20、10、7.5mg/L等不同濃度的維生素C加入血紅蛋白2000、1000、500mg/L等濃度混合液中，利用化學(xué)法、單克隆抗體法和聯(lián)合免疫法3種檢測(cè)方法進(jìn)行檢測(cè)，

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 數(shù)據(jù)均采用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS18.0處理。正態(tài)計(jì)量資料采用“x±s”表示；計(jì)數(shù)資料用例數(shù)（n）表示，組間率（%）的比較采用χ2檢驗(yàn)；以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 3種檢測(cè)方法檢測(cè)人體血紅蛋白靈敏性比較 聯(lián)合免疫法靈敏度高0.2mg/L；在250～500mg/L內(nèi)應(yīng)比較強(qiáng)；而當(dāng)濃度大于2000mg/L，反應(yīng)為陰性。單克隆抗體靈敏度較高時(shí)為0.2mg/L；當(dāng)在250～500mg/L內(nèi)應(yīng)比較強(qiáng)；一旦超過(guò)2000 mg/L，反應(yīng)為陰性；而化學(xué)法靈敏度為2mg/L，它不受高濃度的影響。因此，免疫法免疫法對(duì)微量出血更有診斷價(jià)值，但濃度太高可能會(huì)引起假陰性，此時(shí)，應(yīng)采取有效措施，對(duì)樣本進(jìn)行稀釋再進(jìn)行檢測(cè)。見(jiàn)表1。

表1 3種檢測(cè)方法檢測(cè)人體血紅蛋白靈敏性比較

2.2 不同濃度的維生素C濃度對(duì)3種檢測(cè)方法干擾結(jié)果對(duì)比 當(dāng)血紅蛋白濃度為1g/L，維生素C濃度大于7.5g/L，化學(xué)法檢測(cè)結(jié)果為陰性；當(dāng)血紅蛋白濃度為0.5g/L，維生素C濃度大于5g/L，化學(xué)法檢測(cè)結(jié)果為陰性；而任何濃度的維生素C對(duì)聯(lián)合免疫法和單克隆抗體法均沒(méi)有任何干擾性。見(jiàn)表2。

表2 不同濃度的維生素C濃度對(duì)3種檢測(cè)方法干擾結(jié)果對(duì)比

2.3 3種不同檢測(cè)方法檢測(cè)陽(yáng)性率比較 22例上消化道出血組利用化學(xué)法、單克隆抗體法和聯(lián)合免疫法檢測(cè)陽(yáng)性率分別為95.2%、72.1%、91.2%，其中聯(lián)合免疫法和單克隆抗體法差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=4.317,P<0.05）。化學(xué)法和單克隆抗體法差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=7.413,P<0.05）；而18例下消化道出血利用化學(xué)法、單克隆抗體法和聯(lián)合免疫法檢測(cè)陽(yáng)性率分別為75.6%、96.8%、100%，化學(xué)法和單克隆抗體法、化學(xué)法與聯(lián)合免疫法之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=8.043,P<0.05）。而化學(xué)法檢測(cè)正常組的陽(yáng)性率分別為10.5%，單克隆抗體法3.2%，聯(lián)合免疫法6.8%?；瘜W(xué)法與單克隆抗體差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=4.888,P<0.05）。

3 討論

糞便隱血試驗(yàn)作為臨床消化道出血常規(guī)篩查試驗(yàn)，對(duì)慢性消化道出血和消化道腫瘤的診斷，預(yù)后觀察具有重要價(jià)值。尤其在臨床上可借助糞便隱血試驗(yàn)，從自然人群中篩查出早期癌或癌前病變[2]。與傳統(tǒng)的檢測(cè)方法相比，其具有諸多便利之處，由于傳統(tǒng)的檢測(cè)方法雖然具有較多的優(yōu)勢(shì)，如費(fèi)用比較低廉、反應(yīng)比較快速、結(jié)果容易判斷等[3]，這種方法雖然得到不少醫(yī)院長(zhǎng)期應(yīng)用，但很容易引起多種因素的干擾，出現(xiàn)假陽(yáng)性的缺點(diǎn)。隨著臨床醫(yī)學(xué)的快速發(fā)展以及醫(yī)療水平的不斷進(jìn)步，聯(lián)合免疫法與單克隆抗體法成為檢測(cè)糞便隱血新型方法，得到諸多醫(yī)院的廣泛應(yīng)用?；诖?，化學(xué)法、聯(lián)合免疫法與單克隆抗體法正以其先進(jìn)且方便快捷的方式逐漸代替了傳統(tǒng)的檢測(cè)方法，為臨床醫(yī)學(xué)的發(fā)展開(kāi)辟了新的方向。

通常情況下，單克隆抗體和聯(lián)合免疫法兩種檢測(cè)便隱血的方法，主要為了檢測(cè)人體血紅蛋白抗原，而聯(lián)合免疫法除了檢測(cè)人體血紅蛋白抗原外，還檢測(cè)人轉(zhuǎn)鐵蛋白，具有較強(qiáng)的特異性和靈敏性，不會(huì)受到食物和藥物等因素的影響，基于這種優(yōu)勢(shì)，單克隆抗體和聯(lián)合免疫法兩種檢測(cè)方法均被廣泛應(yīng)用于各個(gè)醫(yī)院中。但也有不足之處，由于免疫學(xué)方法具有高度敏感性，當(dāng)患者正常生理失血時(shí)，很容易產(chǎn)生假陽(yáng)性結(jié)果，而單克隆抗體法極易因血紅蛋白變性產(chǎn)生假陰性結(jié)果。而化學(xué)法的基本原理是：血紅蛋白中的含鐵血黃素部分有催化過(guò)氧化物分解的作用，能催化試劑中的過(guò)氧化氫，分解釋放新生態(tài)的氧，氧化上述色原物質(zhì)而呈色，呈色的深淺反應(yīng)了血紅蛋白的多少。但是化學(xué)法的影響因素太多，缺乏準(zhǔn)確性和特異性，如食物中含有血紅蛋白、肌紅蛋白、其血紅素的作用均可使結(jié)果為陽(yáng)性，大量生食蔬菜中含有的活性植物過(guò)氧化物也可催化過(guò)氧化氫分解，結(jié)果也為陽(yáng)性[4]；當(dāng)抗原抗體比例不當(dāng)易出現(xiàn)假陰性結(jié)果；聯(lián)合免疫法是檢測(cè)糞便中人血紅蛋白及轉(zhuǎn)鐵蛋白的常規(guī)方法。轉(zhuǎn)鐵蛋白檢測(cè)消化道出血具有高特異性和不易被細(xì)菌分解的特點(diǎn)，克服了血紅蛋白因變性產(chǎn)生假陰性的缺點(diǎn)，為檢測(cè)消化道出血的良好指標(biāo)。因此，化學(xué)法多以匹拉米洞組為代表，其靈敏度比較低[5]。其中，聯(lián)合免疫法與單克隆抗體法均不受飲食、其他動(dòng)物血紅蛋白、藥物、還原性物質(zhì)的干擾，具有較強(qiáng)的靈敏性和特異度，但由于抗原抗體受許多因素影響導(dǎo)致假陰性結(jié)果，又加之它的價(jià)格相對(duì)較高等多方面因素的影響，因而聯(lián)合免疫法與單克隆抗體法并不能完全檢測(cè)取代匹拉米洞法。所以，在實(shí)際檢測(cè)便隱血是否存在的過(guò)程中，應(yīng)根據(jù)實(shí)際情況，充分結(jié)合化學(xué)法、單克隆抗體法和聯(lián)合免疫法3種檢測(cè)方法，使其相互補(bǔ)充，從而為便隱血的檢測(cè)提供便利，進(jìn)而有助于提高消化道出血性疾病的檢出率。

本研究結(jié)果表明，22例上消化道出血組利用化學(xué)法、單克隆抗體法和聯(lián)合免疫法檢測(cè)陽(yáng)性率分別為95.2%、72.1%、91.2%，其中聯(lián)合免疫法和單克隆抗體法差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）?；瘜W(xué)法和單克隆抗體法差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；而18例下消化道出血利用化學(xué)法、單克隆抗體法和聯(lián)合免疫法檢測(cè)陽(yáng)性率分別為75.6%、96.8%、100%，化學(xué)法和單克隆抗體法、化學(xué)法與聯(lián)合免疫法之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。而化學(xué)法檢測(cè)正常組的陽(yáng)性率分別為10.5%，單克隆抗體法3.2%，聯(lián)合免疫法6.8%?；瘜W(xué)法與單克隆抗體差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。由此可見(jiàn)，3種檢測(cè)方法各有其獨(dú)自的適用性[6]，化學(xué)法是利用血紅蛋白中亞鐵血紅素有類(lèi)似過(guò)氧化酶的活性，能催化過(guò)氧化氫，放出新生態(tài)氧，將受體鄰甲聯(lián)苯胺氧化成鄰甲偶氮苯而顯藍(lán)色。藍(lán)色深淺反映出血最的多少。因此，影響因素很多，基于此，化學(xué)法常用匹拉米洞組為主以檢測(cè)便隱血是否存在，由于具有過(guò)氧化物酶特性的食品、維生素C、過(guò)氧化物酶、各種動(dòng)物的肉、血、肝臟富含葉綠素食品等均可對(duì)化學(xué)法產(chǎn)生干擾，造成假陽(yáng)性，同時(shí)大量生食蔬菜中含有活性的植物過(guò)氧化物，也能夠刺激試驗(yàn)呈現(xiàn)陽(yáng)性反應(yīng)，另外還有一些還原性的藥物史，則很容易造成試驗(yàn)呈現(xiàn)現(xiàn)假陰性反應(yīng)。因此，在利用化學(xué)法檢驗(yàn)前，應(yīng)禁食肉類(lèi)及相關(guān)藥品及食品3d。單克隆抗體法采用抗人體血紅蛋白的單克隆抗體和多克隆抗體，具有一定的特異性。它很難受到動(dòng)物血紅蛋白的干擾，具有較強(qiáng)的準(zhǔn)確性，能夠及時(shí)檢測(cè)出消化道是否出血。究其原因，這主要是因?yàn)閱慰寺】贵w法對(duì)豬、羊等動(dòng)物血紅蛋白液檢測(cè)隱血均為陰性，對(duì)食用豬、羊等動(dòng)物類(lèi)血紅蛋白的糞便隱血進(jìn)行測(cè)。其結(jié)果亦為陰性。因此，采用單克隆法檢測(cè)便隱血更有助于早期發(fā)現(xiàn)腫瘤性消化道出血，特別是早期結(jié)腸、直腸癌[7]，糞便中帶有癌腫的微量出血是早期可以查的唯一異?，F(xiàn)象。而免疫法不受動(dòng)物血紅蛋白的干擾，具有高度的特異性和準(zhǔn)確性，能確診消化道是否有出血，對(duì)豬、羊等動(dòng)物血紅蛋白液檢測(cè)隱血均為陰性，對(duì)食用豬、羊等動(dòng)物類(lèi)血紅蛋白的糞便隱血進(jìn)行測(cè)試，其結(jié)果也為陰性，但在試驗(yàn)前，不須禁食肉類(lèi)及其他有過(guò)氧化物酶的藥品及食品[8]，就能夠確認(rèn)便隱血是否存在，因此，該方法對(duì)患者來(lái)說(shuō)更容易接受。

綜上所述，化學(xué)法快捷方便，但對(duì)人和動(dòng)物的血紅蛋白可發(fā)生反應(yīng)，而聯(lián)合免疫法和單克隆抗體不能和動(dòng)物的血紅蛋白發(fā)生反應(yīng)，僅和人的血紅蛋白發(fā)生反應(yīng)；維生素C濃度超過(guò)10g/L可引起化學(xué)法的陰性結(jié)果，但對(duì)聯(lián)合免疫法和單克隆抗體的檢測(cè)沒(méi)有任何影響。因此，這兩種檢測(cè)方法值得臨床進(jìn)一步推廣應(yīng)用，然而，考慮到存在后帶現(xiàn)象及血紅蛋白抗原變性可能會(huì)出現(xiàn)假陰性結(jié)果。而聯(lián)合免疫法克服了以上方法的缺點(diǎn)，有利于對(duì)消化道出血性疾病早期診斷與篩查。所以，化學(xué)法、單克隆抗體法和聯(lián)合免疫法3種檢測(cè)方法相互結(jié)合和補(bǔ)充，有助于提高消化道出血性疾病的檢出率。

Objective To compare the therapeutic effect of chemical method, monoclonal antibody and combined immunoassay for fecal occult blood. Methods 90 cases of fecal specimens were selected admitted in our hospital from May 2013 to May 2014 , using chemical method, monoclonal antibody and combined immunization of three test methods of fecal occult blood testing on it. Results The chemical method, monoclonal antibody method combined with immune method in three ways to detect hemoglobin detection rates were 2, 0.2, 0.2mg/L; hemoglobin chemical method for human and animal could react, combined immunoassay and monoclonal antibody alone and human hemoglobin reacts with negative results; vitamin C concentrations exceeding 10g/L can be caused by chemical method, without influence on the joint detection of immunological method and monoclonal antibodies. The detection of three different detection methods of upper digestive tract hemorrhage group the positive rate were 95.2%, 72.1%, 91.2%, three different methods for the detection of lower digestive tract hemorrhage group the positive rate were 75.6%, 96.8%, 100%; the positive detection rate of normal group of three different detection methods were 10.5%, 3.2%, 6.8%. Conclusion The three methods for detection of chemical method, monoclonal antibody and combined immunization with each other, complement each other, help to improve the detection rate of diseases of digestive tract hemorrhage, provide more accurate results for clinical, worthy of further clinical application.

Chemical method; Monoclonal antibody; Combined immunization; Fecal occult blood

10.3969/j.issn.1009-4393.2015.7.100

河南 476000 河南省商丘市第一人民醫(yī)院（楊芳）