雙雜交
- 利用酵母雙雜交系統(tǒng)篩選水稻中與OsCRK5互作蛋白
織特異性。酵母雙雜交系統(tǒng)于1989年首次開發(fā)，距今已有30年多的時間，但它依然是鑒定和驗證蛋白質(zhì)互作的最常見和最直接的方法［24］。該系統(tǒng)最大的優(yōu)點是待測蛋白在實驗過程中能夠保持天然構(gòu)象，從而提高了檢測的準確性和靈敏度［25］。這項技術的基本原理是，兩種待測蛋白分別與DNA結(jié)合域或轉(zhuǎn)錄激活域融合表達，當兩個融合蛋白之間發(fā)生相互作用時，轉(zhuǎn)錄激活因子能夠激活報告基因的表達，使酵母可以在缺陷型培養(yǎng)基上繼續(xù)生長。通過酵母菌斑的生長狀態(tài)可以判斷兩種待測蛋白是否存在相
生物技術通報 2023年9期2023-10-25
- 非生物脅迫誘導的棉花酵母雙雜交文庫構(gòu)建及GhJAZ1互作蛋白篩選
尚不清楚。酵母雙雜交技術是一種研究蛋白之間相互作用的有力工具［23］。通過構(gòu)建酵母雙雜交cDNA 文庫，利用酵母雙雜交技術篩選鑒定與目的蛋白（誘餌）相互作用的蛋白質(zhì)，對于深入研究目的蛋白的作用機理、理解蛋白參與的信號傳導途徑和調(diào)控網(wǎng)絡具有重要的理論指導意義。目前，利用酵母雙雜交cDNA 文庫篩選鑒定蛋白質(zhì)相互作用關系已經(jīng)在小麥［24］、棉花［25］、苦瓜［26］等多種農(nóng)作物得到了廣泛應用。鑒于此，本研究以陸地棉標準系TM-1 為材料，構(gòu)建棉花非生物脅迫誘導
核農(nóng)學報 2023年11期2023-10-23
- 梨酵母雙雜交cDNA文庫的構(gòu)建與鑒定
息[1]。酵母雙雜交技術是研究蛋白互作的有效分子生物學方法,在檢測蛋白之間互作和篩選未知互作蛋白方面得到了廣泛的應用[2-3]。例如,前人構(gòu)建了海島棉纖維均一化酵母cDNA文庫,篩選到了4個可以與GbTCP5互作的蛋白[4]。郭振華等構(gòu)建了桃酵母雙雜交cDNA文庫,篩選出了26個與生長素響應因子PpARF4互作的蛋白[5]。程寅勝等利用碭山酥梨cDNA文庫篩選獲得了13個與梨糖轉(zhuǎn)運相關蛋白PbTMT4潛在互作的蛋白[6]。這些研究促進了相關基因功能機制的解
中國南方果樹 2023年3期2023-06-15
- 梨幼果FWL1膜系統(tǒng)酵母雙雜交三框cDNA文庫構(gòu)建及互作蛋白的篩選
1 膜系統(tǒng)酵母雙雜交三框cDNA 文庫，對研究FWL1基因調(diào)節(jié)果實大小機理有重要意義。【前人研究進展】目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了多個與果實大小性狀關聯(lián)的基因，以不同方式影響植物生長發(fā)育，調(diào)控果實大小。目前，從番茄中分離的fw2.2 是目前已知調(diào)節(jié)果實大小最關鍵的基因。細胞分裂時期，在小果野生種表達量較高，在大果栽培品種中表達量較低，影響細胞數(shù)目，負調(diào)控果實大小，占整個果實大小變異的30%。fw2.2為細胞膜蛋白，不能直接行使其功能，通過酵母雙雜交表明，與酪蛋白激酶II
新疆農(nóng)業(yè)科學 2022年8期2022-12-21
- 致病疫霉誘導的馬鈴薯酵母雙雜交文庫構(gòu)建及無毒蛋白PiAVR3b寄主靶標篩選
3-8]。酵母雙雜交(yeast two-hybrid)技術是一種直接于酵母細胞內(nèi)檢測蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用且靈敏度很高的分子生物學方法。其原理是利用真核生物轉(zhuǎn)錄因子(GAL4等)的DNA結(jié)合功能域(DNA binding domain, DNA-BD)和轉(zhuǎn)錄激活結(jié)構(gòu)域(activation domain, DNA-AD),將待研究的病原菌效應蛋白和寄主靶標蛋白分別與BD和AD結(jié)構(gòu)域連接并共轉(zhuǎn)化進入酵母菌中,若效應蛋白和寄主靶標蛋白存在互作,則轉(zhuǎn)錄因子的B
植物保護 2022年4期2022-08-08
- 羔羊睪丸細胞酵母雙雜交cDNA文庫構(gòu)建及鑒定
NA文庫、酵母雙雜交cDNA文庫、差示cDNA文庫、限制性cDNA文庫等.近年來，隨著生物技術的不斷發(fā)展，構(gòu)建cDNA文庫的方法在逐漸改進，主要有Cap-trapper、Cap-jumping、Oligo-capping及SMART法等[12].其中，SMART法較其他方法便捷，其無需分離、純化mRNA，且得到的cDNA為全長cDNA.基于此，本研究采用SMART技術合成ds cDNA，通過同源重組的方法將cDNA克隆至編碼轉(zhuǎn)錄激活結(jié)構(gòu)域(activati
福建農(nóng)林大學學報（自然科學版） 2022年2期2022-04-14
- 冬瓜均一化酵母雙雜交cDNA文庫的構(gòu)建及鑒定
用［1］。酵母雙雜交技術是研究蛋白質(zhì)互作的重要分子生物學技術，也是研究生物大分子互作和調(diào)控的重要方法。構(gòu)建高質(zhì)量cDNA文庫是運用酵母雙雜交技術的前提，其中均一化cDNA文庫可增加克隆低豐度mRNA的機會，克服基因轉(zhuǎn)錄水平的巨大差距給文庫篩選和分析帶來的障礙［2］。此外，構(gòu)建冬瓜酵母雙雜交cDNA文庫為探究冬瓜基因功能奠定重要的材料基礎?！厩叭搜芯窟M展】構(gòu)建均一化cDNA文庫對新基因發(fā)掘并研究其調(diào)節(jié)網(wǎng)絡具有重要作用，而運用SMART技術結(jié)合DSN均一化處理
廣東農(nóng)業(yè)科學 2021年8期2021-10-05
- 酵母雙雜交技術研究進展
東 泰安）酵母雙雜交系統(tǒng)是研究活細胞內(nèi)蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)之間相互作用的一種強大且常用的分子生物學技術。該技術不僅能夠檢測細胞內(nèi)穩(wěn)定的蛋白互作，而且可以檢測微弱的或者瞬時的蛋白相互作用。實驗方法具有成本低，易操作，設計簡單等一系列優(yōu)點，在生物學實驗中的應用十分廣泛。酵母雙雜交技術在眾多生物學相關領域應用廣泛且前景廣闊。本文對酵母雙雜交技術的基本原理、應用、發(fā)展前景等方面進行綜述。蛋白質(zhì)在生命活動的的許多過程發(fā)揮著不可或缺的作用，如細胞間的信號轉(zhuǎn)導，胞內(nèi)物質(zhì)的代謝
山東畜牧獸醫(yī) 2021年6期2021-01-11
- 植物類鈣調(diào)素CML37 的轉(zhuǎn)錄激活活性分析
]。在通過酵母雙雜交實驗來研究CML37 與IQM4 的相互作用時，觀察到轉(zhuǎn)化了pGBKT7- CML37 和pGADT7 質(zhì)粒的酵母菌在四缺培養(yǎng)基(SD- Ade/His/Leu /Trp)上正常生長并激活了報告基因LacZ 的表達。同時，酵母單雜交實驗也證實了擬南芥類鈣調(diào)素CML37 具有轉(zhuǎn)錄激活活性。1 材料與方法1.1 材料擬南芥為Columbia 生態(tài)型；大腸桿菌為E.coli DH5α；酵母雙雜交系統(tǒng)為Clontech公司的Matchmaker
科技視界 2020年26期2020-09-24
- 綿羊卵巢組織細胞酵母雙雜交cDNA文庫的構(gòu)建及鑒定
尚不清楚。酵母雙雜交技術是一種研究蛋白互作的方法，其主要是在建立宿主細胞酵母cDNA文庫的基礎上，構(gòu)建包含特定基因的誘餌質(zhì)粒，使其與文庫雜交后，在選擇性培養(yǎng)基上，篩選宿主細胞蛋白，能夠與目的基因編碼的蛋白發(fā)生相互作用。該技術不但可以檢測已知蛋白質(zhì)之間的相互作用，而且可以篩選與已知蛋白相互作用的未知蛋白[8]。酵母雙雜交技術已經(jīng)被廣泛用于蛋白與宿主細胞的互作機制、蛋白質(zhì)組學、細胞信號轉(zhuǎn)導等眾多生物學領域的研究[9-10]。利用酵母雙雜交技術發(fā)現(xiàn)，在人內(nèi)皮細胞
畜牧與獸醫(yī) 2020年8期2020-08-14
- 干旱脅迫下“Micro-Tom”番茄酵母雙雜交cDNA文庫構(gòu)建和鑒定
理論意義。酵母雙雜交系統(tǒng)是檢測蛋白質(zhì)間是否存在相互作用的一種技術方法[7]。該技術首次由Fields等提出，可直接驗證已知蛋白相互作用情況，也可篩選文庫中與誘餌蛋白質(zhì)存在相互作用的新蛋白，確定新蛋白質(zhì)功能[8]。隨酵母雙雜交技術發(fā)展，該技術已應用于多種蔬菜作物。李穎波等在鹽脅迫下構(gòu)建大麥酵母雙雜交cDNA文庫[9]。雷海英等構(gòu)建玉米酵母雙雜交cDNA文庫[10]。鄒禹等構(gòu)建高鹽脅迫下水稻酵母雙雜交cDNA文庫[11]。許向陽等構(gòu)建Cf-19介導的抗番茄葉霉
東北農(nóng)業(yè)大學學報 2020年7期2020-08-04
- 轉(zhuǎn)錄因子ZmMYB153 與TPL/TPRs 蛋白的互作研究
等人通過酵母雙雜交和雙分子熒光互補試驗，證實了EAR 基序在MYB44 與TPRs蛋白互作中具有重要作用，EAR 基序突變能阻斷AtMYB44 與TPRs 蛋白之間的互作［12-13］。目前，玉米中R2R3-MYB型轉(zhuǎn)錄因子的相關研究尚未見報道。本實驗室前期通過對玉米R2R3-MYB 基因家族進行分析，發(fā)現(xiàn)ZmMYB153 與MYB44 序列一致性最高，為63.54%（NCBI-blastp），且同樣含有EAR 基序。但是，ZmMYB153 與TPL/T
河北農(nóng)業(yè)大學學報 2020年3期2020-07-29
- 去乙酰轉(zhuǎn)移酶ZmHDA101 與TPL/TPRs 蛋白的互作研究
本研究利用酵母雙雜交（Yeast two-hybrid, Y2H）技術，對ZmHDA101 與TPL/TPRs 之間的互作關系進行深入研究，為闡明ZmHDA101 在玉米生長發(fā)育和抵抗生物/非生物脅迫中的功能及其調(diào)控機制奠定基礎。1 材料和方法1.1 試驗材料酵母雙雜交載體PGADT7（AD）、PGBKT7（BD），酵母轉(zhuǎn)化菌株AH109、玉米自交系B73和擬南芥野生型Col-0 等，均由河北農(nóng)業(yè)大學真菌毒素與植物分子病理學實驗室提供和保存。1.2 ZmH
河北農(nóng)業(yè)大學學報 2020年2期2020-06-09
- 野生大豆陽離子質(zhì)子轉(zhuǎn)運體CHX19.3 與14-3-3 蛋白的相互作用研究
3，并利用酵母雙雜交技術篩選CHX19.3 互作蛋白，發(fā)現(xiàn)其互作蛋白中有1 個14-3-3 蛋白。研究克隆了10 個野生大豆14-3-3 家族基因，并進一步驗證GsCHX19.3與14-3-3 家族蛋白的相互作用，為深入了解其蛋白互作機制，揭示CHXs 調(diào)控耐鹽堿性的分子機制提供依據(jù)。1 材料與方法1.1 試驗材料野生大豆G07256 由東北農(nóng)業(yè)大學植物基因工程研究室提供。酵母菌（Saccharomyces cerevisiae）NMY51 菌株、大腸桿菌
黑龍江八一農(nóng)墾大學學報 2020年1期2020-03-04
- 酵母雙雜交技術構(gòu)建稀有鮈鯽不同雌激素受體亞型的重組熒光酵母
實驗室對傳統(tǒng)的雙雜交宿主酵母Y187的基因進行了改良，在其基因組上插入了可以被GAL4調(diào)控的報告基因熒光素酶(luciferase, Luc)的片段，已構(gòu)建成Y187-Luc酵母。本研究利用酵母雙雜交技術在Y187-Luc中構(gòu)建不同稀有鮈鯽ER亞型的重組熒光雙雜交酵母，用于檢測環(huán)境雌激素和環(huán)境水體的雌激素活性，同時也可以研究稀有鮈鯽不同ER亞型的LBD與配體之間的相互作用。1 材料與方法(Materials and methods)1.1 實驗儀器恒溫振蕩
生態(tài)毒理學報 2019年5期2020-01-08
- 鹽脅迫下大麥酵母雙雜交文庫的構(gòu)建與鑒定
參考價值。酵母雙雜交是利用酵母遺傳學分析蛋白質(zhì)之間相互作用的方法，已廣泛用于蛋白質(zhì)組學、細胞信號轉(zhuǎn)導和功能基因組學等領域［8］。酵母雙雜交不但可以檢測已知蛋白之間的相互作用，而且可以發(fā)現(xiàn)已知蛋白的互作蛋白，并且可以發(fā)現(xiàn)蛋白的新功能。近年來，研究者已在小麥、水稻、大麥、玉米等許多重要農(nóng)作物中構(gòu)建了不同組織、器官的酵母雙雜交cDNA文庫［9-11］，為相關作物的蛋白質(zhì)組學研究奠定了基礎。本實驗室前期獲得了與鹽脅迫相關的E3泛素連接酶基因，擬采用酵母雙雜交技術篩
上海農(nóng)業(yè)學報 2019年6期2020-01-02
- 利用酵母雙雜交技術篩選卵菌效應因子互作蛋白概述
修國?利用酵母雙雜交技術篩選卵菌效應因子互作蛋白概述盛慧,陳姍姍,艾聰聰,馮銳,張修國*山東農(nóng)業(yè)大學植物保護學院;山東省蔬菜病蟲生物學省級重點實驗室, 山東 泰安 271018蛋白質(zhì)是生命活動的執(zhí)行者，其通過與DNA、RNA、蛋白質(zhì)、脂類以及多糖等物質(zhì)結(jié)合形成復合體以參與信號轉(zhuǎn)導、防衛(wèi)反應等復雜的生命活動，因此研究蛋白質(zhì)之間相互作用可為揭示生命現(xiàn)象本質(zhì)提供依據(jù)。酵母雙雜交（Yeast two hybrid, Y2H）系統(tǒng)是篩選互作蛋白最常用的方法，它具快速
山東農(nóng)業(yè)大學學報（自然科學版） 2019年3期2019-06-28
- 鯽腦組織細胞系酵母雙雜交cDNA文庫的構(gòu)建及初步應用
方法主要有酵母雙雜交技術、免疫共沉淀技術、pull down技術、串聯(lián)親和層析技術等[16]。酵母雙雜交技術作為一種高效研究蛋白質(zhì)間相互作用的方法，不僅可以檢測已知蛋白質(zhì)之間的相互作用，而且可以篩選與已知蛋白相互作用的未知蛋白，被廣泛用于研究病原與宿主細胞的互作機制[17，18]。已有研究表明，CyHV-2 ORF25編碼蛋白與GiCB細胞孵育后能夠吸附于GiCB細胞表面[19]，因此探尋CyHV-2 ORF25的相互作用蛋白，將有助于深入了解病毒與宿主間
淡水漁業(yè) 2019年1期2019-01-22
- 酵母雙雜交文庫篩選HBX相互作用蛋白*
們已經(jīng)利用酵母雙雜交系統(tǒng)篩選HBX相互作用蛋白，如HBX與蛋白酶體α亞基、DNA結(jié)合蛋白UVDDB、電壓依賴的離子通道HVDAC3等的相互作用均是通過酵母雙雜交文庫篩選發(fā)現(xiàn)的[11-15]。但是由于早期技術手段的限制，并不能有效篩選HBX相互作用蛋白。為篩選鑒定新的HBX相互作用蛋白，我們以HBX為誘餌蛋白，將其與GAL4 DBD融合表達。同時，將新一代人肝臟均一化cDNA文庫克隆至AD區(qū)表達載體pGADT7中，通過酵母雙雜交篩選得到多個潛在的HBX相互作
交通醫(yī)學 2018年5期2018-12-04
- 乙型肝炎病毒X蛋白與線粒體延長因子G1相互作用
oTrap酵母雙雜交試劑盒（批號：217438）購自 Stratagene公司；TaqDNA Polymerase High Fidelity（批號：11304-011）、pcDNA3.1／myc-His（-）A 載體（批號：V855-20）、Anti-myc（批號：46-0603）和 Lipofectamine 2000（批號：11668-019）均購自Invitrogen公司；限制性內(nèi)切酶 Xba I（批號：1093 A）、Hin dIII（批號：10
中華實驗和臨床病毒學雜志 2018年4期2018-10-15
- 利用膜蛋白酵母雙雜交系統(tǒng)構(gòu)建人尿道上皮細胞cDNA文庫
早提出來的酵母雙雜交系統(tǒng)(Yeast two-hybrid system)是用來檢測細胞核內(nèi)的蛋白之間的相互作用。而瑞士Dual systems Biotech AG公司開發(fā)了一種新的基于分離的泛素介導的膜蛋白酵母雙雜交系統(tǒng)(DUAL membrane starter kit)，該系統(tǒng)可以簡便、快速、特異地用于檢測膜蛋白之間的相互作用[1-3]。生殖支原體、沙眼衣原體等泌尿生殖道感染病原體主要通過與宿主細胞膜上相應的受體蛋白相互作用而感染或侵入宿主細胞[4
中南醫(yī)學科學雜志 2018年5期2018-10-13
- 加工番茄PVYN：O HC-Pro、STV RdRp酵母雙雜交誘餌載體的構(gòu)建及自激活驗證
尚不了解。酵母雙雜交系統(tǒng)是植物病毒學研究中的重要手段，主要應用于病毒蛋白與寄主編碼蛋白相互作用的研究，可以通過酵母雙雜交系統(tǒng)篩選與PVYHC-Pro和STVRdRp基因相關的加工番茄內(nèi)源基因。由于酵母雙雜交系統(tǒng)可能出現(xiàn)假陽性現(xiàn)象，所以需要進行誘餌載體自激活試驗，本研究利用以Sos恢復系統(tǒng)(一種不依賴轉(zhuǎn)錄激活機制的酵母雙雜交系統(tǒng))為原理的胞質(zhì)酵母雙雜交系統(tǒng)，構(gòu)建PVYHC-Pro和STVRdRp基因的誘餌載體，并在酵母中進行自激活檢測及毒性分析，為從加工番茄
江蘇農(nóng)業(yè)科學 2018年17期2018-10-13
- 新孢子蟲NcGRA7基因酵母雙雜交誘餌載體的構(gòu)建與鑒定
新的細胞。酵母雙雜交技術主要是基于對酵母菌轉(zhuǎn)錄因子GAL4性質(zhì)的研究設計而成，1989年由Fields等提出并初步建立[2]。該技術靈敏度非常高，目前在很多蛋白間關系鑒定試驗中已經(jīng)廣泛應用[3]。Liu Q等[4]以TgGRA15為誘餌，將TgGRA15克隆到pGBKT7載體中并在Y2HGold酵母菌株中表達，篩選酵母雙雜交cDNA文庫，首次揭示了與TgGRA15相互作用的新的宿主細胞蛋白。新孢子蟲致密顆粒蛋白(dense granules protein
延邊大學農(nóng)學學報 2018年2期2018-08-20
- 擬南芥抗病相關基因T1N6_22互作蛋白的酵母雙雜交鑒定
作用；利用酵母雙雜交技術，以T1N6_22蛋白為誘餌篩選擬南芥的酵母cDNA文庫，獲得了T1N6_22蛋白的候選互作蛋白[19]。但是，T1N6_22蛋白的互作蛋白及其調(diào)控擬南芥抗病的分子機制尚未明確。本研究利用酵母雙雜交技術，對擬南芥抗病相關基因T1N6_22的互作蛋白進行鑒定，旨在為進一步明確T1N6_22基因調(diào)控擬南芥抗病的分子機制奠定基礎。1 材料和方法1.1 供試材料酵母雙雜交載體PGADT7(AD)和PGBKT7(BD)、酵母菌株AH109、擬
華北農(nóng)學報 2018年2期2018-05-09
- 紅麻酮脂酰輔酶A合成酶（KCS）酵母雙雜交誘餌載體構(gòu)建及自激活檢測
0205）酵母雙雜交技術于1989年由Fields等最先應用，是一種有效的真核活細胞內(nèi)研究蛋白質(zhì)相互作用的技術平臺，其試驗過程中省去了蛋白質(zhì)表達純化及抗體制備的繁瑣步驟，因其簡便、快捷、高通量篩選，能夠反映在正常生理狀態(tài)下蛋白質(zhì)的活性特征等優(yōu)點被廣泛應用于蛋白質(zhì)相互作用方面的研究［1］。紅麻（Hibiscus cannabinus）為錦葵科木槿一年生草本韌皮纖維作物，富含大量優(yōu)質(zhì)天然纖維素，是目前世界上麻紡工業(yè)重要的原料［2］。β－酮脂酰－CoA合成酶（K
中國麻業(yè)科學 2018年2期2018-04-27
- 豬hnRNPK蛋白與酪氨酸蛋白激酶c-Src的互作分析
基因，利用酵母雙雜交和GST-Pull down技術從體內(nèi)外研究它們的互作關系，為進一步揭示hnRNPK和c-Src在豬中的分子功能提供了研究基礎。1 材料與方法1.1 試驗材料組織樣品：淮南豬6月齡背最長肌組織，樣品放入RNase Free的1.5 mL離心管中后迅速投于液氮中，而后轉(zhuǎn)入-80 ℃保存?zhèn)溆?。菌株：E.coliDH5α、E.coliBL21和酵母AH109菌株由本實驗室保存。載體：酵母雙雜交載體(pGBKT7 BD 和pGADT7 AD)、
畜牧獸醫(yī)學報 2018年2期2018-03-13
- 白背飛虱酵母雙雜交cDNA文庫的構(gòu)建
)白背飛虱酵母雙雜交cDNA文庫的構(gòu)建薛 進1，2，李 靜2，羊 健2，唐 彥1，3，梁 瑤1，陳劍平2，*，張恒木2，*(1.植物病蟲害生物學與防控湖南省重點實驗室 湖南農(nóng)業(yè)大學 植物保護學院 病毒研究所，湖南 長沙 410128； 2.浙江省農(nóng)業(yè)科學院 病毒學與生物技術研究所，浙江 杭州310021； 3.湖南農(nóng)業(yè)大學 東方科技學院，湖南 長沙 410128)白背飛虱(SogatellafurciferaHorvth)作為一種遷飛性害蟲，不僅自身危害水
浙江農(nóng)業(yè)學報 2017年12期2018-01-05
- 藍氏賈第鞭毛蟲α-4賈第素誘餌蛋白質(zhì)粒構(gòu)建
蛋白質(zhì)粒 酵母雙雜交藍氏賈第鞭毛蟲是一種原始的單細胞真核生物，常引起賈第蟲病[1]。賈第蟲病通過糞口途徑傳播，患者通過飲用含有賈第蟲包囊的水感染，賈第蟲病具有傳染性強，發(fā)病率高的特點，在醫(yī)療衛(wèi)生條件較差的國家和地區(qū)常呈爆發(fā)性流行。鞭毛、腹吸盤等與賈第蟲感染過程密切相關，主要由細胞骨架構(gòu)成。而賈第素是賈第蟲特有的骨架蛋白[2,3]，在致病過程中起著重要的作用，可分成α、β、γ、δ四大類[4～6]，其中最大的一族是α賈第素。目前，大部分賈第素的定位已經(jīng)清楚，但
華北理工大學學報(醫(yī)學版) 2017年6期2017-12-05
- 禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生癥病毒蛋白酶PR酵母雙雜交誘餌載體的構(gòu)建及鑒定
蛋白酶PR酵母雙雜交誘餌載體的構(gòu)建及鑒定姜莉莉1，2， 蔣培紅1， 溫海燕1， 樊兆斌1，2(1.菏澤學院藥物科學與技術系 ， 山東菏澤274015 ； 2.錦州醫(yī)科大學畜牧獸醫(yī)學院 ， 遼寧錦州121001)為研究禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生癥病毒(Reticuloendotheliosisvirus, REV)蛋白酶PR與宿主細胞的相互作用，將REV PR基因克隆入酵母雙雜交誘餌載體pGBKT7，構(gòu)建誘餌載體pGBK-PR，經(jīng)菌落PCR 、酶切鑒定及測序驗證正確
中國獸醫(yī)雜志 2017年5期2017-06-21
- 擬南芥開花抑制因子TFL1與GRFs蛋白的相互作用
7重組獲得酵母雙雜交試驗載體 TFL1-BD、GRF4-AD和 GRF7-AD。將 TFL1-BD載體分別與GRF4-AD或GRF7-AD載體共同轉(zhuǎn)化酵母感受態(tài)細胞，于雙缺（-Leu/-Trp）培養(yǎng)基上30℃培養(yǎng)2—3 d直至長出酵母克隆，選取合適大小的酵母菌落轉(zhuǎn)移到雙缺（-Leu/-Trp）和四缺（-Leu/-Trp/-His/-Ade）缺陷培養(yǎng)基上，通過觀察酵母菌落的生長情況判斷TFL1與GRFs之間的互作關系。利用LR重組的方法將上述3個入門載體分別
中國農(nóng)業(yè)科學 2017年10期2017-06-15
- 西瓜食酸菌TA基因酵母雙雜交誘餌載體的構(gòu)建及其自激活作用的檢測
菌TA基因酵母雙雜交誘餌載體的構(gòu)建及其自激活作用的檢測胡金鳳1，黃成文2，劉君1(1.新疆農(nóng)業(yè)大學林學與園藝學院，烏魯木齊 830052；2. 新疆農(nóng)業(yè)大學農(nóng)學院，烏魯木齊 830052)【目的】構(gòu)建西瓜食酸菌TA基因的酵母雙雜交誘餌載體，為探究TA基因編碼產(chǎn)物參與西瓜食酸菌致病的機制奠定基礎?！痉椒ā客ㄟ^PCR擴增TA基因，并定向克隆到載體pGBKT7，獲得可用于酵母雙雜交的誘餌載體pGBKT7-TA，經(jīng)酶切鑒定和測序驗證為正確后將pGBKT7-TA轉(zhuǎn)化
新疆農(nóng)業(yè)科學 2017年2期2017-04-13
- 用酵母雙雜交篩選與HIV Tat相互作用的宿主因子*
030?用酵母雙雜交篩選與HIV Tat相互作用的宿主因子*路艷芳1，劉為勇1，喬龍2，汪峰1，侯紅艷1，孫自鏞1△華中科技大學同濟醫(yī)學院附屬同濟醫(yī)院1檢驗科2腫瘤生物醫(yī)學中心，武漢430030目的通過酵母雙雜交試驗篩選與HIV Tat蛋白相互作用的宿主因子。方法對構(gòu)建的pGBKT7-tat進行自激活和半乳糖苷試驗。運用酵母雙雜交實驗以HIV Tat作為誘餌，與人均一化基因庫進行初篩。對篩選出來的陽性克隆進行測序分析。結(jié)果構(gòu)建的pGBKT7-tat無自激活
華中科技大學學報（醫(yī)學版） 2016年4期2016-09-20
- PK—15細胞酵母雙雜交三框cDNA文庫構(gòu)建及鑒定
-15細胞酵母雙雜交三框cDNA文庫，為深入研究豬偽狂犬病病毒（PRV）與宿主細胞間的相互作用機制打下基礎?！痉椒ā刻崛K-15細胞總RNA，采用SMART和LD-PCR合成全長的雙鏈cDNA（ds cDNA），并對其進行均一化和Sfi I酶切處理。處理后的ds cDNA分別連接3種閱讀框pGADT7-Sfi I載體，將連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化至大腸桿菌BH5α構(gòu)建三框cDNA初級文庫，取三框cDNA初級文庫進行混合擴增，通過滴度測定和PCR鑒定其庫容量和基因重組率
南方農(nóng)業(yè)學報 2016年5期2016-05-30
- 雷竹和擬南芥SOC1多聚體差異性分析
對象，通過酵母雙雜交實驗，重點分析SOC1在形成多聚體模式方面的差異性。結(jié)果表明：擬南芥SOC1能形成同源二聚體，并且可通過結(jié)構(gòu)域是I和K區(qū)形成同源多聚體；而雷竹SOC1不能形成多聚體，但可以通過K結(jié)構(gòu)域形成同源二聚體。因此，I結(jié)構(gòu)域可能是引起擬南芥和雷竹SOC1多聚體狀態(tài)不同的一個原因，這個結(jié)構(gòu)域是否對開花定時起決定作用還有待進一步轉(zhuǎn)基因功能驗證。圖5表2參29關鍵詞：植物學；MADS-box；SOC1；雷竹；擬南芥；酵母雙雜交；多聚體狀態(tài)；I和K結(jié)構(gòu)域
浙江農(nóng)林大學學報 2016年2期2016-04-27
- 柔嫩艾美耳球蟲子孢子酵母雙雜交cDNA文庫的構(gòu)建
球蟲子孢子酵母雙雜交cDNA文庫的構(gòu)建徐帥兵1，黃 兵1,3，趙其平1，董 輝1，朱順海1，崔曉霞1，謝雨翔1，唐 敏1,2，楊志遠1,2，韓紅玉1（1. 中國農(nóng)業(yè)科學院上海獸醫(yī)研究所 農(nóng)業(yè)部動物寄生蟲學重點開放實驗室，上海 200241；2. 上海師范大學 生命與環(huán)境科學學院，上海 200234；3. 江蘇省動物重要疫病與人獸共患病防控協(xié)同創(chuàng)新中心，揚州 225009）為了篩選柔嫩艾美耳球蟲子孢子入侵相關的蛋白，利用酵母雙雜交體系構(gòu)建了柔嫩艾美耳球蟲子孢
中國動物傳染病學報 2016年6期2016-03-03
- 豬脂肪組織酵母雙雜交文庫的構(gòu)建及質(zhì)量鑒定
豬脂肪組織酵母雙雜交文庫的構(gòu)建及質(zhì)量鑒定陳俊峰1，王 璟1，張家慶1，高 翔2，白獻曉1，任巧玲1，高彬文1，馬 強1，郭紅霞1，邢寶松1*(1．河南省農(nóng)業(yè)科學院 畜牧獸醫(yī)研究所，河南 鄭州 450002； 2．鄭州市獸藥飼料監(jiān)察所，河南 鄭州 450052)為了研究豬脂肪細胞分化的蛋白質(zhì)之間的相互作用，采用LR重組反應的方法，構(gòu)建豬脂肪組織酵母雙雜交文庫。結(jié)果顯示，酵母雙雜交文庫的庫容量為5.28×106CFU。隨機挑取的24個克隆均帶有插入片段，重組率
河南農(nóng)業(yè)科學 2016年10期2016-02-06
- 酵母雙雜交系統(tǒng)及其應用研究進展
0021)酵母雙雜交系統(tǒng)及其應用研究進展崔紅軍， 魏玉清(北方民族大學生物科學與工程學院，寧夏銀川 750021)酵母雙雜交系統(tǒng)作為一種有效研究蛋白質(zhì)相互作用的分子生物學方法，具有真實、高效、敏感、廣泛的特點，被廣泛應用于諸如蛋白質(zhì)組學、基因組學等領域。主要對酵母雙雜交技術的原理、特點及應用現(xiàn)狀進行了綜述。酵母雙雜交系統(tǒng)；蛋白質(zhì)相互作用；應用蛋白質(zhì)是細胞中的實際功能分子，具有負責細胞生物化學活性的功能，隨著生物化學和分子生物學研究技術和手段的不斷深入，蛋白
安徽農(nóng)業(yè)科學 2015年13期2015-12-18
- LSPA1早期基因gp22細菌雙雜交誘餌載體與篩選文庫的建立
因gp22細菌雙雜交誘餌載體與篩選文庫的建立馮夢蝶1毛普加1洪愉2許澤仰1趙繼華2楊洪文2宋武戰(zhàn)2黃芬1井申榮1曾韋錕1，3（1.昆明理工大學醫(yī)學院，昆明 650500；2.成都軍區(qū)昆明總醫(yī)院核醫(yī)學科，昆明 650032；3.昆明學院 醫(yī)學院臨床檢驗教研室，昆明 650214）構(gòu)建細菌雙雜交系統(tǒng)中的誘餌載體pKT25-gp22和甲型副傷寒沙門氏菌基因文庫以便后續(xù)的篩選實驗。PCR擴增獲得gp22基因，插入pKT25構(gòu)成誘餌質(zhì)粒pKT25-gp22。提取甲型
生物技術通報 2015年7期2015-10-27
- 大黃魚Wap65-2基因成熟肽區(qū)酵母雙雜交誘餌載體的構(gòu)建及鑒定
因成熟肽區(qū)酵母雙雜交誘餌載體的構(gòu)建及鑒定裘天休1，2李長紅2陳炯2（1.寧波大學科技學院，寧波315211；2.寧波大學海洋學院生物化學與分子生物學實驗室，寧波315211）用大黃魚Wap65-2基因成熟肽區(qū)構(gòu)建酵母雙雜交誘餌質(zhì)粒，并對誘餌質(zhì)粒進行自激活活性及毒性檢測。從大黃魚（Larimichthys crocea）肝組織cDNA中擴增Wap65-2基因成熟肽片段（LcWap65-2m），將其克隆至pGBKT7載體中，獲得誘餌載體pGBKT7-LcWap
生物技術通報 2015年8期2015-10-25
- 杜氏鹽藻環(huán)盒子1相互作用蛋白的酵母雙雜交法篩選*
作用蛋白的酵母雙雜交法篩選*許 堯1),張楠楠2)，張彥婷1)，李慶華1)，楊 露1)，朱相展1)，薛樂勛1)#，關方霞1,2)#1)鄭州大學生命科學學院 鄭州 450001 2)鄭州大學第一附屬醫(yī)院 鄭州 450052#通信作者：薛樂勛，男，1944年2月生，教授，研究方向：腫瘤標志物與基因工程，E-mail:xuelx@zzu.edu.cn;關方霞，女，1969年2月生，博士，教授，研究方向：生物醫(yī)學前沿技術與應用，E-mail:guanfangxia
鄭州大學學報（醫(yī)學版） 2015年3期2015-04-18
- 酵母雙雜交技術應用進展
00384酵母雙雜交技術應用進展王 婷， 葛懷娜， 郭 宏?天津農(nóng)學院動物科學與動物醫(yī)學學院，天津300384酵母雙雜交技術是鑒定蛋白互作最有效和最廣泛的分子生物學技術。該技術能直接作用于活細胞，檢測細胞內(nèi)蛋白質(zhì)互作，具有成本低、易操作、可達到全基因組水平、能進行品種間的互作鑒定等諸多優(yōu)點。較之傳統(tǒng)的檢測方法有明顯優(yōu)勢，已在越來越多的領域得到應用。對酵母雙雜交的技術原理以及應用進行了綜述，介紹了該技術在發(fā)現(xiàn)新蛋白質(zhì)、探究蛋白質(zhì)功能、建立基因組蛋白連鎖圖、研
生物技術進展 2015年5期2015-04-09
- 雙峰駝天然重鏈抗體可變區(qū)酵母雙雜交文庫的構(gòu)建與鑒定
抗體可變區(qū)酵母雙雜交文庫的構(gòu)建與鑒定胡湘云，高小龍，付向晶，劉丹丹，范文濤，王燕平，杜恩岐，王興龍，黨如意，楊增岐*(西北農(nóng)林科技大學動物醫(yī)學院，楊凌 712100)構(gòu)建雙峰駝天然重鏈抗體可變區(qū)(VHH)酵母雙雜交文庫，并對文庫質(zhì)量進行鑒定。采集未經(jīng)免疫的6月齡雌性雙峰駝外周血、骨髓、脾和淋巴結(jié)，并從外周血中分離淋巴細胞。抽提總RNA，反轉(zhuǎn)錄為cDNA，用2對引物經(jīng)過2輪PCR擴增得到400 bp左右的雙峰駝VHH片段。根據(jù)Clontech公司Mate &
畜牧獸醫(yī)學報 2015年6期2015-03-23
- 杜氏鹽藻過氧化物酶1酵母雙雜交誘餌質(zhì)粒的構(gòu)建*
rdx1)酵母雙雜交誘餌質(zhì)粒pGBKT7-Prdx1，并分別轉(zhuǎn)化酵母菌株Y187和AH109，檢測其對酵母菌株有無毒性和自激活作用，為篩選DsPrdx1相互作用蛋白、研究其在鞭毛中的功能打下基礎。1 材料與方法1.1 材料 杜氏鹽藻藻株為UTEX-LB-1644，購自美國得克薩斯州大學，大腸桿菌DH5α和杜氏鹽藻cDNA酵母文庫由作者所在的實驗室保存，酵母菌株Y187和 AH109、載體 pGBKT7購自 Clontech公司，載體pGEM-T購自Prom
鄭州大學學報（醫(yī)學版） 2014年4期2014-10-08
- 酵母雙雜交及其衍生系統(tǒng)
酵母雙雜交及其衍生系統(tǒng)黃欣媛1范紅波2 （1.湖北工程學院特色果蔬質(zhì)量安全控制湖北省重點實驗室，孝感 432000；2.湖北職業(yè)技術學院，孝感 432000）酵母雙雜交系統(tǒng)是一種研究蛋白質(zhì)相互作用的分子生物學方法，過去20多年里，大量衍生系統(tǒng)的出現(xiàn)使得這套雙雜交技術體系更加完善和高效，成為研究蛋白質(zhì)-配體相互作用的重要技術手段，廣泛應用于功能基因組學、蛋白質(zhì)組學、病理學等研究領域。對酵母雙雜交及其衍生系統(tǒng)的基本原理和應用進展進行綜述。酵母雙雜交系統(tǒng) 蛋白質(zhì)
生物技術通報 2014年1期2014-04-08
- IQ基序突變對AtIQM1的鈣調(diào)素結(jié)合活性的影響
S，并通過酵母雙雜交分析突變蛋白iqm1的CaM結(jié)合活性。結(jié)果顯示，用重組質(zhì)粒pGADT7-IQM1CDS、pGADT7-IQM1Del113-114、pGADT7-IQM1L113S或pGBKT7-CaM5分別轉(zhuǎn)化酵母AH109，未出現(xiàn)自激活現(xiàn)象；用pGADT7-IQM1CDS和 pGBKT7-CaM5共轉(zhuǎn)化酵母能在選擇性培養(yǎng)基（SD/-Ade/-His/-Leu/-Trp/X-α-Gal）上形成藍色菌落；而用pGADT7-IQM1Del113-114和
生物技術通報 2014年12期2014-03-22
- 真菌蛋白激發(fā)子PevD1互作蛋白的酵母雙雜交篩選及融合蛋白的原核表達
互作蛋白的酵母雙雜交篩選及融合蛋白的原核表達唐小麗 伍文憲 韓磊 楊秀芬（中國農(nóng)業(yè)科學院植物保護研究所 植物病蟲害生物學國家重點實驗室，北京 100081）PevD1是大麗輪枝菌（Verticillium dahliae）發(fā)酵液中分離純化的一種新蛋白激發(fā)子，能激發(fā)煙草和棉花的免疫防御反應，提高抗病性。旨在深入研究PevD1的作用機理，利用酵母雙雜交系統(tǒng)，以PevD1為誘餌蛋白，篩選擬南芥中PevD1的互作蛋白，經(jīng)復篩、回轉(zhuǎn)驗證得到3個候選互作蛋白基因R1，
生物技術通報 2014年10期2014-03-21
- 弓形蟲酵母雙雜交c DNA文庫構(gòu)建及與AMA1羧基端相互作用蛋白的篩選
新的線索。酵母雙雜交系統(tǒng)是一種簡便有效、準確快捷的研究蛋白間相互作用的方法，廖亞金等利用該方法篩選出17 個與CSFV E2 相互作用的蛋白[11]。本實驗構(gòu)建了弓形蟲酵母雙雜交文庫，通過酵母雙雜交技術共篩選得到13 個與AMA1c 相互作用的蛋白，為進一步對AMA1c 的功能研究奠定了基礎。1 材料和方法1.1 菌株及主要試劑 弓形蟲RH 株為日本北海道帶廣畜產(chǎn)大學原蟲病研究中心玄學南教授惠贈；大腸桿菌DH5α 由本研究室保存；Make Your Own
中國預防獸醫(yī)學報 2014年3期2014-03-08
- 與杜氏鹽藻驅(qū)動蛋白Ⅱ動力亞基C端相互作用的新蛋白的酵母雙雜交篩選*
誘餌，采用酵母雙雜交的方法從杜氏鹽藻的cDNA酵母文庫中篩選與之相互作用的新蛋白。1 材料與方法1.1實驗材料及試劑杜氏鹽藻購自美國德州大學，杜氏鹽藻cDNA酵母文庫為鄭州大學生物工程系細胞生物學研究室構(gòu)建，EcoRⅠ、BamHⅠ、Hind Ⅲ 等DNA限制性內(nèi)切酶、pMD19-T載體、DNA連接試劑盒均購自寶生物工程(大連)有限公司，質(zhì)粒提取試劑盒、凝膠回收試劑盒購自AXYGEN公司，酵母雙雜交所用載體pGBKT7、菌株Y187和AH109均購自Clon
鄭州大學學報（醫(yī)學版） 2013年1期2013-11-20
- 酵母雙雜交系統(tǒng)在痘病毒與宿主相互作用中的研究進展
本文綜述了酵母雙雜交系統(tǒng)在痘病毒蛋白之間及病毒－宿主相互作用的研究現(xiàn)狀。1 酵母雙雜交系統(tǒng)1．1 酵母雙雜交系統(tǒng)原理 1986年，巴斯德實驗室［3］發(fā)現(xiàn)一種酵母細胞轉(zhuǎn)錄活化因子Gal4模塊，Gal4結(jié)合一個特殊的DNA序列：上游激活區(qū) （upstream activation domain，UAS），在半乳糖存在時會激活轉(zhuǎn)錄。Gal4模塊分為兩個不同功能區(qū)：N－末端區(qū)域可以結(jié)合UAS，為DNA結(jié)合區(qū)（Binding domain，BD）；C－末端區(qū)域在半乳
中國人獸共患病學報 2013年9期2013-09-26
- 利用雙雜交系統(tǒng)篩選并鑒定與GPR30相互作用的蛋白
·論 著·利用雙雜交系統(tǒng)篩選并鑒定與GPR30相互作用的蛋白張 蕾1，常 宏2*，徐 東1（1.首都醫(yī)科大學宣武醫(yī)院心臟中心，北京100053；2.河北醫(yī)科大學基礎課教學部生物化學教研室，河北石家莊050091）目的篩選并鑒定與GPR30相互作用的蛋白，為GPR30蛋白亞細胞定位和功能研究提供線索。方法應用酵母雙雜交技術，構(gòu)建誘餌表達載體Pgbk/GPR30，與人卵巢互補DNA（complementary DNA，cDNA）文庫共轉(zhuǎn)化酵母菌AH109，篩選
河北醫(yī)科大學學報 2013年4期2013-04-07
- 杜氏鹽藻S腺苷高半胱氨酸水解酶酵母雙雜交誘餌載體的構(gòu)建及自激活和毒性檢測*
氨酸水解酶酵母雙雜交誘餌載體的構(gòu)建及自激活和毒性檢測*柴丹丹1)，李慶華1)，閻赟夢1)，毛麗紅1)，李 靚1)，朱立強2)，薛樂勛1)#1)鄭州大學生物工程系細胞生物學研究室鄭州 450001 2)鄭州大學第二附屬醫(yī)院檢驗科鄭州 450014#通訊作者，男，1944年2月生，教授，博士研究生導師，研究方向:腫瘤標志物與基因工程，E-mail:xuelx@zzu.edu.cnS腺苷高半胱氨酸水解酶;酵母雙雜交;誘餌載體;自激活;杜氏鹽藻目的:構(gòu)建杜氏鹽藻S
鄭州大學學報（醫(yī)學版） 2012年1期2012-12-07
- 應用酵母雙雜交技術篩選與RANK蛋白新基序IVVY相互作用的蛋白*
.cn應用酵母雙雜交技術篩選與RANK蛋白新基序IVVY相互作用的蛋白*王順清1△， 鐘雯婷1， 鄧 暉2， 毛 平1， 許艷麗1(廣州醫(yī)學院附屬市一人民醫(yī)院1血液科，2輸血科， 廣東 廣州 510180)目的應用酵母雙雜交技術篩選小鼠巨噬細胞中與核因子κB受體激活因子(RANK)蛋白上新基序IVVY相互作用的蛋白，以探尋RANKL/RANK系統(tǒng)中介導破骨細胞形成的RANK下游新信號轉(zhuǎn)導蛋白。方法應用GAL4酵母雙雜交系統(tǒng)3，構(gòu)建僅包含編碼新基序535IV
中國病理生理雜志 2012年4期2012-11-06
- 甘藍SCR、THL與SRK交替相互作用的酵母雙雜交檢測
eSRK2酵母雙雜交表達載體和class-Ⅰ型SRKJ激酶域，THL1酵母雙雜交表達載體，通過其毒性和自激活檢測來確定自交不親和性表型所依賴的3個起始信號傳導元件之間識別程度的差異，進而通過激活酵母雙雜交的報告基因所表達的多少來確定其相互作用程度。并通過生物信息學分析確定其Ⅰ型和Ⅱ型歸屬，以期能確定class-Ⅱ型內(nèi)部的eSRK-SCR的互作及其與class-Ⅰ型之間THL、SCR與SRK存在的相互作用及其作用程度，為深入研究甘藍自交不親和性信號傳導分子過
中國蔬菜 2012年24期2012-08-08
- 酵母雙雜交系統(tǒng)檢測 SK2與 RyR2蛋白的相互作用＊
du.cn酵母雙雜交系統(tǒng)檢測 SK2與 RyR2蛋白的相互作用＊馬 晶1),趙國強1),朱 含2),袁建黨2),章 茜2)#,安玉會3)1)鄭州大學基礎醫(yī)學院微生物學與免疫學教研室鄭州 450001 2)鄭州大學基礎醫(yī)學院生理學教研室鄭州 450001 3)鄭州大學基礎醫(yī)學院生物化學與分子生物學教研室鄭州 450001#通訊作者,女,1957年 10月生,博士,教授,研究方向:心律失常的分子機制,E-mail:qianzhang@zzu.edu.cn小電導
鄭州大學學報（醫(yī)學版） 2011年1期2011-12-07
- 杜氏鹽藻寡糖基轉(zhuǎn)移酶亞基stt3a酵母雙雜交誘餌載體的構(gòu)建及自激活和毒性檢測*
stt3a酵母雙雜交誘餌載體的構(gòu)建及自激活和毒性檢測*侯永杰1)，李 杰1)，李慶華1)，王建人2)，薛樂勛1)#1)鄭州大學生物工程系細胞生物學研究室鄭州 450001 2)河南中醫(yī)學院生理教研室鄭州 450008#通訊作者，男，1944年2月生，教授，博士研究生導師，研究方向:腫瘤標志物與基因工程，E-mail:xuelx@zzu.edu.cn杜氏鹽藻;stt3a;酵母雙雜交;鞭毛再生目的:觀察杜氏鹽藻寡糖基轉(zhuǎn)移酶亞基stt3a的酵母雙雜交誘餌載體表達
鄭州大學學報（醫(yī)學版） 2011年6期2011-12-07
- 利用噬菌體展示技術研究功能基因組和蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用——與酵母雙雜交方法比較
作用——與酵母雙雜交方法比較張佳娣，石屹峰近年來基因組測序工作已揭示了數(shù)以萬計的新基因，但是這些基因序列的價值只有當這些數(shù)據(jù)被翻譯成蛋白質(zhì)功能的時候才能被了解。而蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)之間相互作用構(gòu)成了細胞生化反應網(wǎng)絡的一個主要組成部分，不僅可以從分子水平揭示蛋白質(zhì)的功能，而且為我們更好地理解生命過程、疾病機制和新藥開發(fā)等提供了一個很好的基礎。當前隨著人類基因組和眾多生物物種全基因組測序的完成，功能基因組學（functional genomics）成為研究的主流，
中國醫(yī)藥生物技術 2010年3期2010-04-06