雙雜交
- 利用酵母雙雜交系統(tǒng)篩選水稻中與OsCRK5互作蛋白
織特異性。酵母雙雜交系統(tǒng)于1989年首次開(kāi)發(fā)，距今已有30年多的時(shí)間，但它依然是鑒定和驗(yàn)證蛋白質(zhì)互作的最常見(jiàn)和最直接的方法［24］。該系統(tǒng)最大的優(yōu)點(diǎn)是待測(cè)蛋白在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中能夠保持天然構(gòu)象，從而提高了檢測(cè)的準(zhǔn)確性和靈敏度［25］。這項(xiàng)技術(shù)的基本原理是，兩種待測(cè)蛋白分別與DNA結(jié)合域或轉(zhuǎn)錄激活域融合表達(dá)，當(dāng)兩個(gè)融合蛋白之間發(fā)生相互作用時(shí)，轉(zhuǎn)錄激活因子能夠激活報(bào)告基因的表達(dá)，使酵母可以在缺陷型培養(yǎng)基上繼續(xù)生長(zhǎng)。通過(guò)酵母菌斑的生長(zhǎng)狀態(tài)可以判斷兩種待測(cè)蛋白是否存在相
生物技術(shù)通報(bào) 2023年9期2023-10-25
- 非生物脅迫誘導(dǎo)的棉花酵母雙雜交文庫(kù)構(gòu)建及GhJAZ1互作蛋白篩選
尚不清楚。酵母雙雜交技術(shù)是一種研究蛋白之間相互作用的有力工具［23］。通過(guò)構(gòu)建酵母雙雜交cDNA 文庫(kù)，利用酵母雙雜交技術(shù)篩選鑒定與目的蛋白（誘餌）相互作用的蛋白質(zhì)，對(duì)于深入研究目的蛋白的作用機(jī)理、理解蛋白參與的信號(hào)傳導(dǎo)途徑和調(diào)控網(wǎng)絡(luò)具有重要的理論指導(dǎo)意義。目前，利用酵母雙雜交cDNA 文庫(kù)篩選鑒定蛋白質(zhì)相互作用關(guān)系已經(jīng)在小麥［24］、棉花［25］、苦瓜［26］等多種農(nóng)作物得到了廣泛應(yīng)用。鑒于此，本研究以陸地棉標(biāo)準(zhǔn)系TM-1 為材料，構(gòu)建棉花非生物脅迫誘導(dǎo)
核農(nóng)學(xué)報(bào) 2023年11期2023-10-23
- 梨酵母雙雜交cDNA文庫(kù)的構(gòu)建與鑒定
息[1]。酵母雙雜交技術(shù)是研究蛋白互作的有效分子生物學(xué)方法,在檢測(cè)蛋白之間互作和篩選未知互作蛋白方面得到了廣泛的應(yīng)用[2-3]。例如,前人構(gòu)建了海島棉纖維均一化酵母cDNA文庫(kù),篩選到了4個(gè)可以與GbTCP5互作的蛋白[4]。郭振華等構(gòu)建了桃酵母雙雜交cDNA文庫(kù),篩選出了26個(gè)與生長(zhǎng)素響應(yīng)因子PpARF4互作的蛋白[5]。程寅勝等利用碭山酥梨cDNA文庫(kù)篩選獲得了13個(gè)與梨糖轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)蛋白PbTMT4潛在互作的蛋白[6]。這些研究促進(jìn)了相關(guān)基因功能機(jī)制的解
中國(guó)南方果樹(shù) 2023年3期2023-06-15
- 梨幼果FWL1膜系統(tǒng)酵母雙雜交三框cDNA文庫(kù)構(gòu)建及互作蛋白的篩選
1 膜系統(tǒng)酵母雙雜交三框cDNA 文庫(kù)，對(duì)研究FWL1基因調(diào)節(jié)果實(shí)大小機(jī)理有重要意義?！厩叭搜芯窟M(jìn)展】目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了多個(gè)與果實(shí)大小性狀關(guān)聯(lián)的基因，以不同方式影響植物生長(zhǎng)發(fā)育，調(diào)控果實(shí)大小。目前，從番茄中分離的fw2.2 是目前已知調(diào)節(jié)果實(shí)大小最關(guān)鍵的基因。細(xì)胞分裂時(shí)期，在小果野生種表達(dá)量較高，在大果栽培品種中表達(dá)量較低，影響細(xì)胞數(shù)目，負(fù)調(diào)控果實(shí)大小，占整個(gè)果實(shí)大小變異的30%。fw2.2為細(xì)胞膜蛋白，不能直接行使其功能，通過(guò)酵母雙雜交表明，與酪蛋白激酶II
新疆農(nóng)業(yè)科學(xué) 2022年8期2022-12-21
- 致病疫霉誘導(dǎo)的馬鈴薯酵母雙雜交文庫(kù)構(gòu)建及無(wú)毒蛋白PiAVR3b寄主靶標(biāo)篩選
3-8]。酵母雙雜交(yeast two-hybrid)技術(shù)是一種直接于酵母細(xì)胞內(nèi)檢測(cè)蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用且靈敏度很高的分子生物學(xué)方法。其原理是利用真核生物轉(zhuǎn)錄因子(GAL4等)的DNA結(jié)合功能域(DNA binding domain, DNA-BD)和轉(zhuǎn)錄激活結(jié)構(gòu)域(activation domain, DNA-AD),將待研究的病原菌效應(yīng)蛋白和寄主靶標(biāo)蛋白分別與BD和AD結(jié)構(gòu)域連接并共轉(zhuǎn)化進(jìn)入酵母菌中,若效應(yīng)蛋白和寄主靶標(biāo)蛋白存在互作,則轉(zhuǎn)錄因子的B
植物保護(hù) 2022年4期2022-08-08
- 羔羊睪丸細(xì)胞酵母雙雜交cDNA文庫(kù)構(gòu)建及鑒定
NA文庫(kù)、酵母雙雜交cDNA文庫(kù)、差示cDNA文庫(kù)、限制性cDNA文庫(kù)等.近年來(lái)，隨著生物技術(shù)的不斷發(fā)展，構(gòu)建cDNA文庫(kù)的方法在逐漸改進(jìn)，主要有Cap-trapper、Cap-jumping、Oligo-capping及SMART法等[12].其中，SMART法較其他方法便捷，其無(wú)需分離、純化mRNA，且得到的cDNA為全長(zhǎng)cDNA.基于此，本研究采用SMART技術(shù)合成ds cDNA，通過(guò)同源重組的方法將cDNA克隆至編碼轉(zhuǎn)錄激活結(jié)構(gòu)域(activati
- 冬瓜均一化酵母雙雜交cDNA文庫(kù)的構(gòu)建及鑒定
用［1］。酵母雙雜交技術(shù)是研究蛋白質(zhì)互作的重要分子生物學(xué)技術(shù)，也是研究生物大分子互作和調(diào)控的重要方法。構(gòu)建高質(zhì)量cDNA文庫(kù)是運(yùn)用酵母雙雜交技術(shù)的前提，其中均一化cDNA文庫(kù)可增加克隆低豐度mRNA的機(jī)會(huì)，克服基因轉(zhuǎn)錄水平的巨大差距給文庫(kù)篩選和分析帶來(lái)的障礙［2］。此外，構(gòu)建冬瓜酵母雙雜交cDNA文庫(kù)為探究冬瓜基因功能奠定重要的材料基礎(chǔ)。【前人研究進(jìn)展】構(gòu)建均一化cDNA文庫(kù)對(duì)新基因發(fā)掘并研究其調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)具有重要作用，而運(yùn)用SMART技術(shù)結(jié)合DSN均一化處理
廣東農(nóng)業(yè)科學(xué) 2021年8期2021-10-05
- 酵母雙雜交技術(shù)研究進(jìn)展
東 泰安）酵母雙雜交系統(tǒng)是研究活細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)之間相互作用的一種強(qiáng)大且常用的分子生物學(xué)技術(shù)。該技術(shù)不僅能夠檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)定的蛋白互作，而且可以檢測(cè)微弱的或者瞬時(shí)的蛋白相互作用。實(shí)驗(yàn)方法具有成本低，易操作，設(shè)計(jì)簡(jiǎn)單等一系列優(yōu)點(diǎn)，在生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中的應(yīng)用十分廣泛。酵母雙雜交技術(shù)在眾多生物學(xué)相關(guān)領(lǐng)域應(yīng)用廣泛且前景廣闊。本文對(duì)酵母雙雜交技術(shù)的基本原理、應(yīng)用、發(fā)展前景等方面進(jìn)行綜述。蛋白質(zhì)在生命活動(dòng)的的許多過(guò)程發(fā)揮著不可或缺的作用，如細(xì)胞間的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，胞內(nèi)物質(zhì)的代謝
山東畜牧獸醫(yī) 2021年6期2021-01-11
- 植物類(lèi)鈣調(diào)素CML37 的轉(zhuǎn)錄激活活性分析
]。在通過(guò)酵母雙雜交實(shí)驗(yàn)來(lái)研究CML37 與IQM4 的相互作用時(shí)，觀察到轉(zhuǎn)化了pGBKT7- CML37 和pGADT7 質(zhì)粒的酵母菌在四缺培養(yǎng)基(SD- Ade/His/Leu /Trp)上正常生長(zhǎng)并激活了報(bào)告基因LacZ 的表達(dá)。同時(shí)，酵母單雜交實(shí)驗(yàn)也證實(shí)了擬南芥類(lèi)鈣調(diào)素CML37 具有轉(zhuǎn)錄激活活性。1 材料與方法1.1 材料擬南芥為Columbia 生態(tài)型；大腸桿菌為E.coli DH5α；酵母雙雜交系統(tǒng)為Clontech公司的Matchmaker
科技視界 2020年26期2020-09-24
- 綿羊卵巢組織細(xì)胞酵母雙雜交cDNA文庫(kù)的構(gòu)建及鑒定
尚不清楚。酵母雙雜交技術(shù)是一種研究蛋白互作的方法，其主要是在建立宿主細(xì)胞酵母cDNA文庫(kù)的基礎(chǔ)上，構(gòu)建包含特定基因的誘餌質(zhì)粒，使其與文庫(kù)雜交后，在選擇性培養(yǎng)基上，篩選宿主細(xì)胞蛋白，能夠與目的基因編碼的蛋白發(fā)生相互作用。該技術(shù)不但可以檢測(cè)已知蛋白質(zhì)之間的相互作用，而且可以篩選與已知蛋白相互作用的未知蛋白[8]。酵母雙雜交技術(shù)已經(jīng)被廣泛用于蛋白與宿主細(xì)胞的互作機(jī)制、蛋白質(zhì)組學(xué)、細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)等眾多生物學(xué)領(lǐng)域的研究[9-10]。利用酵母雙雜交技術(shù)發(fā)現(xiàn)，在人內(nèi)皮細(xì)胞
畜牧與獸醫(yī) 2020年8期2020-08-14
- 干旱脅迫下“Micro-Tom”番茄酵母雙雜交cDNA文庫(kù)構(gòu)建和鑒定
理論意義。酵母雙雜交系統(tǒng)是檢測(cè)蛋白質(zhì)間是否存在相互作用的一種技術(shù)方法[7]。該技術(shù)首次由Fields等提出，可直接驗(yàn)證已知蛋白相互作用情況，也可篩選文庫(kù)中與誘餌蛋白質(zhì)存在相互作用的新蛋白，確定新蛋白質(zhì)功能[8]。隨酵母雙雜交技術(shù)發(fā)展，該技術(shù)已應(yīng)用于多種蔬菜作物。李穎波等在鹽脅迫下構(gòu)建大麥酵母雙雜交cDNA文庫(kù)[9]。雷海英等構(gòu)建玉米酵母雙雜交cDNA文庫(kù)[10]。鄒禹等構(gòu)建高鹽脅迫下水稻酵母雙雜交cDNA文庫(kù)[11]。許向陽(yáng)等構(gòu)建Cf-19介導(dǎo)的抗番茄葉霉
- 轉(zhuǎn)錄因子ZmMYB153 與TPL/TPRs 蛋白的互作研究
等人通過(guò)酵母雙雜交和雙分子熒光互補(bǔ)試驗(yàn)，證實(shí)了EAR 基序在MYB44 與TPRs蛋白互作中具有重要作用，EAR 基序突變能阻斷AtMYB44 與TPRs 蛋白之間的互作［12-13］。目前，玉米中R2R3-MYB型轉(zhuǎn)錄因子的相關(guān)研究尚未見(jiàn)報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)室前期通過(guò)對(duì)玉米R(shí)2R3-MYB 基因家族進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)ZmMYB153 與MYB44 序列一致性最高，為63.54%（NCBI-blastp），且同樣含有EAR 基序。但是，ZmMYB153 與TPL/T
- 去乙酰轉(zhuǎn)移酶ZmHDA101 與TPL/TPRs 蛋白的互作研究
本研究利用酵母雙雜交（Yeast two-hybrid, Y2H）技術(shù)，對(duì)ZmHDA101 與TPL/TPRs 之間的互作關(guān)系進(jìn)行深入研究，為闡明ZmHDA101 在玉米生長(zhǎng)發(fā)育和抵抗生物/非生物脅迫中的功能及其調(diào)控機(jī)制奠定基礎(chǔ)。1 材料和方法1.1 試驗(yàn)材料酵母雙雜交載體PGADT7（AD）、PGBKT7（BD），酵母轉(zhuǎn)化菌株AH109、玉米自交系B73和擬南芥野生型Col-0 等，均由河北農(nóng)業(yè)大學(xué)真菌毒素與植物分子病理學(xué)實(shí)驗(yàn)室提供和保存。1.2 ZmH
- 野生大豆陽(yáng)離子質(zhì)子轉(zhuǎn)運(yùn)體CHX19.3 與14-3-3 蛋白的相互作用研究
3，并利用酵母雙雜交技術(shù)篩選CHX19.3 互作蛋白，發(fā)現(xiàn)其互作蛋白中有1 個(gè)14-3-3 蛋白。研究克隆了10 個(gè)野生大豆14-3-3 家族基因，并進(jìn)一步驗(yàn)證GsCHX19.3與14-3-3 家族蛋白的相互作用，為深入了解其蛋白互作機(jī)制，揭示CHXs 調(diào)控耐鹽堿性的分子機(jī)制提供依據(jù)。1 材料與方法1.1 試驗(yàn)材料野生大豆G07256 由東北農(nóng)業(yè)大學(xué)植物基因工程研究室提供。酵母菌（Saccharomyces cerevisiae）NMY51 菌株、大腸桿菌
黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)學(xué)報(bào) 2020年1期2020-03-04
- 酵母雙雜交技術(shù)構(gòu)建稀有鮈鯽不同雌激素受體亞型的重組熒光酵母
實(shí)驗(yàn)室對(duì)傳統(tǒng)的雙雜交宿主酵母Y187的基因進(jìn)行了改良，在其基因組上插入了可以被GAL4調(diào)控的報(bào)告基因熒光素酶(luciferase, Luc)的片段，已構(gòu)建成Y187-Luc酵母。本研究利用酵母雙雜交技術(shù)在Y187-Luc中構(gòu)建不同稀有鮈鯽ER亞型的重組熒光雙雜交酵母，用于檢測(cè)環(huán)境雌激素和環(huán)境水體的雌激素活性，同時(shí)也可以研究稀有鮈鯽不同ER亞型的LBD與配體之間的相互作用。1 材料與方法(Materials and methods)1.1 實(shí)驗(yàn)儀器恒溫振蕩
生態(tài)毒理學(xué)報(bào) 2019年5期2020-01-08
- 鹽脅迫下大麥酵母雙雜交文庫(kù)的構(gòu)建與鑒定
參考價(jià)值。酵母雙雜交是利用酵母遺傳學(xué)分析蛋白質(zhì)之間相互作用的方法，已廣泛用于蛋白質(zhì)組學(xué)、細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和功能基因組學(xué)等領(lǐng)域［8］。酵母雙雜交不但可以檢測(cè)已知蛋白之間的相互作用，而且可以發(fā)現(xiàn)已知蛋白的互作蛋白，并且可以發(fā)現(xiàn)蛋白的新功能。近年來(lái)，研究者已在小麥、水稻、大麥、玉米等許多重要農(nóng)作物中構(gòu)建了不同組織、器官的酵母雙雜交cDNA文庫(kù)［9-11］，為相關(guān)作物的蛋白質(zhì)組學(xué)研究奠定了基礎(chǔ)。本實(shí)驗(yàn)室前期獲得了與鹽脅迫相關(guān)的E3泛素連接酶基因，擬采用酵母雙雜交技術(shù)篩
上海農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào) 2019年6期2020-01-02
- 利用酵母雙雜交技術(shù)篩選卵菌效應(yīng)因子互作蛋白概述
修國(guó)?利用酵母雙雜交技術(shù)篩選卵菌效應(yīng)因子互作蛋白概述盛慧,陳姍姍,艾聰聰,馮銳,張修國(guó)*山東農(nóng)業(yè)大學(xué)植物保護(hù)學(xué)院;山東省蔬菜病蟲(chóng)生物學(xué)省級(jí)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室, 山東 泰安 271018蛋白質(zhì)是生命活動(dòng)的執(zhí)行者，其通過(guò)與DNA、RNA、蛋白質(zhì)、脂類(lèi)以及多糖等物質(zhì)結(jié)合形成復(fù)合體以參與信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、防衛(wèi)反應(yīng)等復(fù)雜的生命活動(dòng)，因此研究蛋白質(zhì)之間相互作用可為揭示生命現(xiàn)象本質(zhì)提供依據(jù)。酵母雙雜交（Yeast two hybrid, Y2H）系統(tǒng)是篩選互作蛋白最常用的方法，它具快速
山東農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版） 2019年3期2019-06-28
- 鯽腦組織細(xì)胞系酵母雙雜交cDNA文庫(kù)的構(gòu)建及初步應(yīng)用
方法主要有酵母雙雜交技術(shù)、免疫共沉淀技術(shù)、pull down技術(shù)、串聯(lián)親和層析技術(shù)等[16]。酵母雙雜交技術(shù)作為一種高效研究蛋白質(zhì)間相互作用的方法，不僅可以檢測(cè)已知蛋白質(zhì)之間的相互作用，而且可以篩選與已知蛋白相互作用的未知蛋白，被廣泛用于研究病原與宿主細(xì)胞的互作機(jī)制[17，18]。已有研究表明，CyHV-2 ORF25編碼蛋白與GiCB細(xì)胞孵育后能夠吸附于GiCB細(xì)胞表面[19]，因此探尋CyHV-2 ORF25的相互作用蛋白，將有助于深入了解病毒與宿主間
淡水漁業(yè) 2019年1期2019-01-22
- 酵母雙雜交文庫(kù)篩選HBX相互作用蛋白*
們已經(jīng)利用酵母雙雜交系統(tǒng)篩選HBX相互作用蛋白，如HBX與蛋白酶體α亞基、DNA結(jié)合蛋白UVDDB、電壓依賴(lài)的離子通道HVDAC3等的相互作用均是通過(guò)酵母雙雜交文庫(kù)篩選發(fā)現(xiàn)的[11-15]。但是由于早期技術(shù)手段的限制，并不能有效篩選HBX相互作用蛋白。為篩選鑒定新的HBX相互作用蛋白，我們以HBX為誘餌蛋白，將其與GAL4 DBD融合表達(dá)。同時(shí)，將新一代人肝臟均一化cDNA文庫(kù)克隆至AD區(qū)表達(dá)載體pGADT7中，通過(guò)酵母雙雜交篩選得到多個(gè)潛在的HBX相互作
交通醫(yī)學(xué) 2018年5期2018-12-04
- 乙型肝炎病毒X蛋白與線粒體延長(zhǎng)因子G1相互作用
oTrap酵母雙雜交試劑盒（批號(hào)：217438）購(gòu)自 Stratagene公司；TaqDNA Polymerase High Fidelity（批號(hào)：11304-011）、pcDNA3.1／myc-His（-）A 載體（批號(hào)：V855-20）、Anti-myc（批號(hào)：46-0603）和 Lipofectamine 2000（批號(hào)：11668-019）均購(gòu)自Invitrogen公司；限制性?xún)?nèi)切酶 Xba I（批號(hào)：1093 A）、Hin dIII（批號(hào)：10
中華實(shí)驗(yàn)和臨床病毒學(xué)雜志 2018年4期2018-10-15
- 利用膜蛋白酵母雙雜交系統(tǒng)構(gòu)建人尿道上皮細(xì)胞cDNA文庫(kù)
早提出來(lái)的酵母雙雜交系統(tǒng)(Yeast two-hybrid system)是用來(lái)檢測(cè)細(xì)胞核內(nèi)的蛋白之間的相互作用。而瑞士Dual systems Biotech AG公司開(kāi)發(fā)了一種新的基于分離的泛素介導(dǎo)的膜蛋白酵母雙雜交系統(tǒng)(DUAL membrane starter kit)，該系統(tǒng)可以簡(jiǎn)便、快速、特異地用于檢測(cè)膜蛋白之間的相互作用[1-3]。生殖支原體、沙眼衣原體等泌尿生殖道感染病原體主要通過(guò)與宿主細(xì)胞膜上相應(yīng)的受體蛋白相互作用而感染或侵入宿主細(xì)胞[4
中南醫(yī)學(xué)科學(xué)雜志 2018年5期2018-10-13
- 加工番茄PVYN：O HC-Pro、STV RdRp酵母雙雜交誘餌載體的構(gòu)建及自激活驗(yàn)證
尚不了解。酵母雙雜交系統(tǒng)是植物病毒學(xué)研究中的重要手段，主要應(yīng)用于病毒蛋白與寄主編碼蛋白相互作用的研究，可以通過(guò)酵母雙雜交系統(tǒng)篩選與PVYHC-Pro和STVRdRp基因相關(guān)的加工番茄內(nèi)源基因。由于酵母雙雜交系統(tǒng)可能出現(xiàn)假陽(yáng)性現(xiàn)象，所以需要進(jìn)行誘餌載體自激活試驗(yàn)，本研究利用以Sos恢復(fù)系統(tǒng)(一種不依賴(lài)轉(zhuǎn)錄激活機(jī)制的酵母雙雜交系統(tǒng))為原理的胞質(zhì)酵母雙雜交系統(tǒng)，構(gòu)建PVYHC-Pro和STVRdRp基因的誘餌載體，并在酵母中進(jìn)行自激活檢測(cè)及毒性分析，為從加工番茄
江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué) 2018年17期2018-10-13
- 新孢子蟲(chóng)NcGRA7基因酵母雙雜交誘餌載體的構(gòu)建與鑒定
新的細(xì)胞。酵母雙雜交技術(shù)主要是基于對(duì)酵母菌轉(zhuǎn)錄因子GAL4性質(zhì)的研究設(shè)計(jì)而成，1989年由Fields等提出并初步建立[2]。該技術(shù)靈敏度非常高，目前在很多蛋白間關(guān)系鑒定試驗(yàn)中已經(jīng)廣泛應(yīng)用[3]。Liu Q等[4]以TgGRA15為誘餌，將TgGRA15克隆到pGBKT7載體中并在Y2HGold酵母菌株中表達(dá)，篩選酵母雙雜交cDNA文庫(kù)，首次揭示了與TgGRA15相互作用的新的宿主細(xì)胞蛋白。新孢子蟲(chóng)致密顆粒蛋白(dense granules protein
- 擬南芥抗病相關(guān)基因T1N6_22互作蛋白的酵母雙雜交鑒定
作用；利用酵母雙雜交技術(shù)，以T1N6_22蛋白為誘餌篩選擬南芥的酵母cDNA文庫(kù)，獲得了T1N6_22蛋白的候選互作蛋白[19]。但是，T1N6_22蛋白的互作蛋白及其調(diào)控?cái)M南芥抗病的分子機(jī)制尚未明確。本研究利用酵母雙雜交技術(shù)，對(duì)擬南芥抗病相關(guān)基因T1N6_22的互作蛋白進(jìn)行鑒定，旨在為進(jìn)一步明確T1N6_22基因調(diào)控?cái)M南芥抗病的分子機(jī)制奠定基礎(chǔ)。1 材料和方法1.1 供試材料酵母雙雜交載體PGADT7(AD)和PGBKT7(BD)、酵母菌株AH109、擬
華北農(nóng)學(xué)報(bào) 2018年2期2018-05-09
- 紅麻酮脂酰輔酶A合成酶（KCS）酵母雙雜交誘餌載體構(gòu)建及自激活檢測(cè)
0205）酵母雙雜交技術(shù)于1989年由Fields等最先應(yīng)用，是一種有效的真核活細(xì)胞內(nèi)研究蛋白質(zhì)相互作用的技術(shù)平臺(tái)，其試驗(yàn)過(guò)程中省去了蛋白質(zhì)表達(dá)純化及抗體制備的繁瑣步驟，因其簡(jiǎn)便、快捷、高通量篩選，能夠反映在正常生理狀態(tài)下蛋白質(zhì)的活性特征等優(yōu)點(diǎn)被廣泛應(yīng)用于蛋白質(zhì)相互作用方面的研究［1］。紅麻（Hibiscus cannabinus）為錦葵科木槿一年生草本韌皮纖維作物，富含大量?jī)?yōu)質(zhì)天然纖維素，是目前世界上麻紡工業(yè)重要的原料［2］。β－酮脂酰－CoA合成酶（K
中國(guó)麻業(yè)科學(xué) 2018年2期2018-04-27
- 豬hnRNPK蛋白與酪氨酸蛋白激酶c-Src的互作分析
基因，利用酵母雙雜交和GST-Pull down技術(shù)從體內(nèi)外研究它們的互作關(guān)系，為進(jìn)一步揭示hnRNPK和c-Src在豬中的分子功能提供了研究基礎(chǔ)。1 材料與方法1.1 試驗(yàn)材料組織樣品：淮南豬6月齡背最長(zhǎng)肌組織，樣品放入RNase Free的1.5 mL離心管中后迅速投于液氮中，而后轉(zhuǎn)入-80 ℃保存?zhèn)溆?。菌株：E.coliDH5α、E.coliBL21和酵母AH109菌株由本實(shí)驗(yàn)室保存。載體：酵母雙雜交載體(pGBKT7 BD 和pGADT7 AD)、
畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào) 2018年2期2018-03-13
- 白背飛虱酵母雙雜交cDNA文庫(kù)的構(gòu)建
)白背飛虱酵母雙雜交cDNA文庫(kù)的構(gòu)建薛 進(jìn)1，2，李 靜2，羊 健2，唐 彥1，3，梁 瑤1，陳劍平2，*，張恒木2，*(1.植物病蟲(chóng)害生物學(xué)與防控湖南省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 湖南農(nóng)業(yè)大學(xué) 植物保護(hù)學(xué)院 病毒研究所，湖南 長(zhǎng)沙 410128； 2.浙江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院 病毒學(xué)與生物技術(shù)研究所，浙江 杭州310021； 3.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué) 東方科技學(xué)院，湖南 長(zhǎng)沙 410128)白背飛虱(SogatellafurciferaHorvth)作為一種遷飛性害蟲(chóng)，不僅自身危害水
浙江農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào) 2017年12期2018-01-05
- 藍(lán)氏賈第鞭毛蟲(chóng)α-4賈第素誘餌蛋白質(zhì)粒構(gòu)建
蛋白質(zhì)粒 酵母雙雜交藍(lán)氏賈第鞭毛蟲(chóng)是一種原始的單細(xì)胞真核生物，常引起賈第蟲(chóng)病[1]。賈第蟲(chóng)病通過(guò)糞口途徑傳播，患者通過(guò)飲用含有賈第蟲(chóng)包囊的水感染，賈第蟲(chóng)病具有傳染性強(qiáng)，發(fā)病率高的特點(diǎn)，在醫(yī)療衛(wèi)生條件較差的國(guó)家和地區(qū)常呈爆發(fā)性流行。鞭毛、腹吸盤(pán)等與賈第蟲(chóng)感染過(guò)程密切相關(guān)，主要由細(xì)胞骨架構(gòu)成。而賈第素是賈第蟲(chóng)特有的骨架蛋白[2,3]，在致病過(guò)程中起著重要的作用，可分成α、β、γ、δ四大類(lèi)[4～6]，其中最大的一族是α賈第素。目前，大部分賈第素的定位已經(jīng)清楚，但
- 禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生癥病毒蛋白酶PR酵母雙雜交誘餌載體的構(gòu)建及鑒定
蛋白酶PR酵母雙雜交誘餌載體的構(gòu)建及鑒定姜莉莉1，2， 蔣培紅1， 溫海燕1， 樊兆斌1，2(1.菏澤學(xué)院藥物科學(xué)與技術(shù)系 ， 山東菏澤274015 ； 2.錦州醫(yī)科大學(xué)畜牧獸醫(yī)學(xué)院 ， 遼寧錦州121001)為研究禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生癥病毒(Reticuloendotheliosisvirus, REV)蛋白酶PR與宿主細(xì)胞的相互作用，將REV PR基因克隆入酵母雙雜交誘餌載體pGBKT7，構(gòu)建誘餌載體pGBK-PR，經(jīng)菌落PCR 、酶切鑒定及測(cè)序驗(yàn)證正確
中國(guó)獸醫(yī)雜志 2017年5期2017-06-21
- 擬南芥開(kāi)花抑制因子TFL1與GRFs蛋白的相互作用
7重組獲得酵母雙雜交試驗(yàn)載體 TFL1-BD、GRF4-AD和 GRF7-AD。將 TFL1-BD載體分別與GRF4-AD或GRF7-AD載體共同轉(zhuǎn)化酵母感受態(tài)細(xì)胞，于雙缺（-Leu/-Trp）培養(yǎng)基上30℃培養(yǎng)2—3 d直至長(zhǎng)出酵母克隆，選取合適大小的酵母菌落轉(zhuǎn)移到雙缺（-Leu/-Trp）和四缺（-Leu/-Trp/-His/-Ade）缺陷培養(yǎng)基上，通過(guò)觀察酵母菌落的生長(zhǎng)情況判斷TFL1與GRFs之間的互作關(guān)系。利用LR重組的方法將上述3個(gè)入門(mén)載體分別
中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué) 2017年10期2017-06-15
- 西瓜食酸菌TA基因酵母雙雜交誘餌載體的構(gòu)建及其自激活作用的檢測(cè)
菌TA基因酵母雙雜交誘餌載體的構(gòu)建及其自激活作用的檢測(cè)胡金鳳1，黃成文2，劉君1(1.新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)林學(xué)與園藝學(xué)院，烏魯木齊 830052；2. 新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)院，烏魯木齊 830052)【目的】構(gòu)建西瓜食酸菌TA基因的酵母雙雜交誘餌載體，為探究TA基因編碼產(chǎn)物參與西瓜食酸菌致病的機(jī)制奠定基礎(chǔ)?！痉椒ā客ㄟ^(guò)PCR擴(kuò)增TA基因，并定向克隆到載體pGBKT7，獲得可用于酵母雙雜交的誘餌載體pGBKT7-TA，經(jīng)酶切鑒定和測(cè)序驗(yàn)證為正確后將pGBKT7-TA轉(zhuǎn)化
新疆農(nóng)業(yè)科學(xué) 2017年2期2017-04-13
- 用酵母雙雜交篩選與HIV Tat相互作用的宿主因子*
030?用酵母雙雜交篩選與HIV Tat相互作用的宿主因子*路艷芳1，劉為勇1，喬龍2，汪峰1，侯紅艷1，孫自鏞1△華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬同濟(jì)醫(yī)院1檢驗(yàn)科2腫瘤生物醫(yī)學(xué)中心，武漢430030目的通過(guò)酵母雙雜交試驗(yàn)篩選與HIV Tat蛋白相互作用的宿主因子。方法對(duì)構(gòu)建的pGBKT7-tat進(jìn)行自激活和半乳糖苷試驗(yàn)。運(yùn)用酵母雙雜交實(shí)驗(yàn)以HIV Tat作為誘餌，與人均一化基因庫(kù)進(jìn)行初篩。對(duì)篩選出來(lái)的陽(yáng)性克隆進(jìn)行測(cè)序分析。結(jié)果構(gòu)建的pGBKT7-tat無(wú)自激活
- PK—15細(xì)胞酵母雙雜交三框cDNA文庫(kù)構(gòu)建及鑒定
-15細(xì)胞酵母雙雜交三框cDNA文庫(kù)，為深入研究豬偽狂犬病病毒（PRV）與宿主細(xì)胞間的相互作用機(jī)制打下基礎(chǔ)?！痉椒ā刻崛K-15細(xì)胞總RNA，采用SMART和LD-PCR合成全長(zhǎng)的雙鏈cDNA（ds cDNA），并對(duì)其進(jìn)行均一化和Sfi I酶切處理。處理后的ds cDNA分別連接3種閱讀框pGADT7-Sfi I載體，將連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化至大腸桿菌BH5α構(gòu)建三框cDNA初級(jí)文庫(kù)，取三框cDNA初級(jí)文庫(kù)進(jìn)行混合擴(kuò)增，通過(guò)滴度測(cè)定和PCR鑒定其庫(kù)容量和基因重組率
南方農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào) 2016年5期2016-05-30
- 雷竹和擬南芥SOC1多聚體差異性分析
對(duì)象，通過(guò)酵母雙雜交實(shí)驗(yàn)，重點(diǎn)分析SOC1在形成多聚體模式方面的差異性。結(jié)果表明：擬南芥SOC1能形成同源二聚體，并且可通過(guò)結(jié)構(gòu)域是I和K區(qū)形成同源多聚體；而雷竹SOC1不能形成多聚體，但可以通過(guò)K結(jié)構(gòu)域形成同源二聚體。因此，I結(jié)構(gòu)域可能是引起擬南芥和雷竹SOC1多聚體狀態(tài)不同的一個(gè)原因，這個(gè)結(jié)構(gòu)域是否對(duì)開(kāi)花定時(shí)起決定作用還有待進(jìn)一步轉(zhuǎn)基因功能驗(yàn)證。圖5表2參29關(guān)鍵詞：植物學(xué)；MADS-box；SOC1；雷竹；擬南芥；酵母雙雜交；多聚體狀態(tài)；I和K結(jié)構(gòu)域
浙江農(nóng)林大學(xué)學(xué)報(bào) 2016年2期2016-04-27
- 柔嫩艾美耳球蟲(chóng)子孢子酵母雙雜交cDNA文庫(kù)的構(gòu)建
球蟲(chóng)子孢子酵母雙雜交cDNA文庫(kù)的構(gòu)建徐帥兵1，黃 兵1,3，趙其平1，董 輝1，朱順海1，崔曉霞1，謝雨翔1，唐 敏1,2，楊志遠(yuǎn)1,2，韓紅玉1（1. 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院上海獸醫(yī)研究所 農(nóng)業(yè)部動(dòng)物寄生蟲(chóng)學(xué)重點(diǎn)開(kāi)放實(shí)驗(yàn)室，上海 200241；2. 上海師范大學(xué) 生命與環(huán)境科學(xué)學(xué)院，上海 200234；3. 江蘇省動(dòng)物重要疫病與人獸共患病防控協(xié)同創(chuàng)新中心，揚(yáng)州 225009）為了篩選柔嫩艾美耳球蟲(chóng)子孢子入侵相關(guān)的蛋白，利用酵母雙雜交體系構(gòu)建了柔嫩艾美耳球蟲(chóng)子孢
中國(guó)動(dòng)物傳染病學(xué)報(bào) 2016年6期2016-03-03
- 豬脂肪組織酵母雙雜交文庫(kù)的構(gòu)建及質(zhì)量鑒定
豬脂肪組織酵母雙雜交文庫(kù)的構(gòu)建及質(zhì)量鑒定陳俊峰1，王 璟1，張家慶1，高 翔2，白獻(xiàn)曉1，任巧玲1，高彬文1，馬 強(qiáng)1，郭紅霞1，邢寶松1*(1．河南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院 畜牧獸醫(yī)研究所，河南 鄭州 450002； 2．鄭州市獸藥飼料監(jiān)察所，河南 鄭州 450052)為了研究豬脂肪細(xì)胞分化的蛋白質(zhì)之間的相互作用，采用LR重組反應(yīng)的方法，構(gòu)建豬脂肪組織酵母雙雜交文庫(kù)。結(jié)果顯示，酵母雙雜交文庫(kù)的庫(kù)容量為5.28×106CFU。隨機(jī)挑取的24個(gè)克隆均帶有插入片段，重組率
河南農(nóng)業(yè)科學(xué) 2016年10期2016-02-06
- 酵母雙雜交系統(tǒng)及其應(yīng)用研究進(jìn)展
0021)酵母雙雜交系統(tǒng)及其應(yīng)用研究進(jìn)展崔紅軍， 魏玉清(北方民族大學(xué)生物科學(xué)與工程學(xué)院，寧夏銀川 750021)酵母雙雜交系統(tǒng)作為一種有效研究蛋白質(zhì)相互作用的分子生物學(xué)方法，具有真實(shí)、高效、敏感、廣泛的特點(diǎn)，被廣泛應(yīng)用于諸如蛋白質(zhì)組學(xué)、基因組學(xué)等領(lǐng)域。主要對(duì)酵母雙雜交技術(shù)的原理、特點(diǎn)及應(yīng)用現(xiàn)狀進(jìn)行了綜述。酵母雙雜交系統(tǒng)；蛋白質(zhì)相互作用；應(yīng)用蛋白質(zhì)是細(xì)胞中的實(shí)際功能分子，具有負(fù)責(zé)細(xì)胞生物化學(xué)活性的功能，隨著生物化學(xué)和分子生物學(xué)研究技術(shù)和手段的不斷深入，蛋白
安徽農(nóng)業(yè)科學(xué) 2015年13期2015-12-18
- LSPA1早期基因gp22細(xì)菌雙雜交誘餌載體與篩選文庫(kù)的建立
因gp22細(xì)菌雙雜交誘餌載體與篩選文庫(kù)的建立馮夢(mèng)蝶1毛普加1洪愉2許澤仰1趙繼華2楊洪文2宋武戰(zhàn)2黃芬1井申榮1曾韋錕1，3（1.昆明理工大學(xué)醫(yī)學(xué)院，昆明 650500；2.成都軍區(qū)昆明總醫(yī)院核醫(yī)學(xué)科，昆明 650032；3.昆明學(xué)院 醫(yī)學(xué)院臨床檢驗(yàn)教研室，昆明 650214）構(gòu)建細(xì)菌雙雜交系統(tǒng)中的誘餌載體pKT25-gp22和甲型副傷寒沙門(mén)氏菌基因文庫(kù)以便后續(xù)的篩選實(shí)驗(yàn)。PCR擴(kuò)增獲得gp22基因，插入pKT25構(gòu)成誘餌質(zhì)粒pKT25-gp22。提取甲型
生物技術(shù)通報(bào) 2015年7期2015-10-27
- 大黃魚(yú)Wap65-2基因成熟肽區(qū)酵母雙雜交誘餌載體的構(gòu)建及鑒定
因成熟肽區(qū)酵母雙雜交誘餌載體的構(gòu)建及鑒定裘天休1，2李長(zhǎng)紅2陳炯2（1.寧波大學(xué)科技學(xué)院，寧波315211；2.寧波大學(xué)海洋學(xué)院生物化學(xué)與分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室，寧波315211）用大黃魚(yú)Wap65-2基因成熟肽區(qū)構(gòu)建酵母雙雜交誘餌質(zhì)粒，并對(duì)誘餌質(zhì)粒進(jìn)行自激活活性及毒性檢測(cè)。從大黃魚(yú)（Larimichthys crocea）肝組織cDNA中擴(kuò)增Wap65-2基因成熟肽片段（LcWap65-2m），將其克隆至pGBKT7載體中，獲得誘餌載體pGBKT7-LcWap
生物技術(shù)通報(bào) 2015年8期2015-10-25
- 杜氏鹽藻環(huán)盒子1相互作用蛋白的酵母雙雜交法篩選*
作用蛋白的酵母雙雜交法篩選*許 堯1),張楠楠2)，張彥婷1)，李慶華1)，楊 露1)，朱相展1)，薛樂(lè)勛1)#，關(guān)方霞1,2)#1)鄭州大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院 鄭州 450001 2)鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院 鄭州 450052#通信作者：薛樂(lè)勛，男，1944年2月生，教授，研究方向：腫瘤標(biāo)志物與基因工程，E-mail:xuelx@zzu.edu.cn;關(guān)方霞，女，1969年2月生，博士，教授，研究方向：生物醫(yī)學(xué)前沿技術(shù)與應(yīng)用，E-mail:guanfangxia
- 酵母雙雜交技術(shù)應(yīng)用進(jìn)展
00384酵母雙雜交技術(shù)應(yīng)用進(jìn)展王 婷， 葛懷娜， 郭 宏?天津農(nóng)學(xué)院動(dòng)物科學(xué)與動(dòng)物醫(yī)學(xué)學(xué)院，天津300384酵母雙雜交技術(shù)是鑒定蛋白互作最有效和最廣泛的分子生物學(xué)技術(shù)。該技術(shù)能直接作用于活細(xì)胞，檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)互作，具有成本低、易操作、可達(dá)到全基因組水平、能進(jìn)行品種間的互作鑒定等諸多優(yōu)點(diǎn)。較之傳統(tǒng)的檢測(cè)方法有明顯優(yōu)勢(shì)，已在越來(lái)越多的領(lǐng)域得到應(yīng)用。對(duì)酵母雙雜交的技術(shù)原理以及應(yīng)用進(jìn)行了綜述，介紹了該技術(shù)在發(fā)現(xiàn)新蛋白質(zhì)、探究蛋白質(zhì)功能、建立基因組蛋白連鎖圖、研
生物技術(shù)進(jìn)展 2015年5期2015-04-09
- 雙峰駝天然重鏈抗體可變區(qū)酵母雙雜交文庫(kù)的構(gòu)建與鑒定
抗體可變區(qū)酵母雙雜交文庫(kù)的構(gòu)建與鑒定胡湘云，高小龍，付向晶，劉丹丹，范文濤，王燕平，杜恩岐，王興龍，黨如意，楊增岐*(西北農(nóng)林科技大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，楊凌 712100)構(gòu)建雙峰駝天然重鏈抗體可變區(qū)(VHH)酵母雙雜交文庫(kù)，并對(duì)文庫(kù)質(zhì)量進(jìn)行鑒定。采集未經(jīng)免疫的6月齡雌性雙峰駝外周血、骨髓、脾和淋巴結(jié)，并從外周血中分離淋巴細(xì)胞。抽提總RNA，反轉(zhuǎn)錄為cDNA，用2對(duì)引物經(jīng)過(guò)2輪PCR擴(kuò)增得到400 bp左右的雙峰駝VHH片段。根據(jù)Clontech公司Mate &
畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào) 2015年6期2015-03-23
- 杜氏鹽藻過(guò)氧化物酶1酵母雙雜交誘餌質(zhì)粒的構(gòu)建*
rdx1)酵母雙雜交誘餌質(zhì)粒pGBKT7-Prdx1，并分別轉(zhuǎn)化酵母菌株Y187和AH109，檢測(cè)其對(duì)酵母菌株有無(wú)毒性和自激活作用，為篩選DsPrdx1相互作用蛋白、研究其在鞭毛中的功能打下基礎(chǔ)。1 材料與方法1.1 材料 杜氏鹽藻藻株為UTEX-LB-1644，購(gòu)自美國(guó)得克薩斯州大學(xué)，大腸桿菌DH5α和杜氏鹽藻cDNA酵母文庫(kù)由作者所在的實(shí)驗(yàn)室保存，酵母菌株Y187和 AH109、載體 pGBKT7購(gòu)自 Clontech公司，載體pGEM-T購(gòu)自Prom
- 酵母雙雜交及其衍生系統(tǒng)
酵母雙雜交及其衍生系統(tǒng)黃欣媛1范紅波2 （1.湖北工程學(xué)院特色果蔬質(zhì)量安全控制湖北省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，孝感 432000；2.湖北職業(yè)技術(shù)學(xué)院，孝感 432000）酵母雙雜交系統(tǒng)是一種研究蛋白質(zhì)相互作用的分子生物學(xué)方法，過(guò)去20多年里，大量衍生系統(tǒng)的出現(xiàn)使得這套雙雜交技術(shù)體系更加完善和高效，成為研究蛋白質(zhì)-配體相互作用的重要技術(shù)手段，廣泛應(yīng)用于功能基因組學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)、病理學(xué)等研究領(lǐng)域。對(duì)酵母雙雜交及其衍生系統(tǒng)的基本原理和應(yīng)用進(jìn)展進(jìn)行綜述。酵母雙雜交系統(tǒng) 蛋白質(zhì)
生物技術(shù)通報(bào) 2014年1期2014-04-08
- IQ基序突變對(duì)AtIQM1的鈣調(diào)素結(jié)合活性的影響
S，并通過(guò)酵母雙雜交分析突變蛋白iqm1的CaM結(jié)合活性。結(jié)果顯示，用重組質(zhì)粒pGADT7-IQM1CDS、pGADT7-IQM1Del113-114、pGADT7-IQM1L113S或pGBKT7-CaM5分別轉(zhuǎn)化酵母AH109，未出現(xiàn)自激活現(xiàn)象；用pGADT7-IQM1CDS和 pGBKT7-CaM5共轉(zhuǎn)化酵母能在選擇性培養(yǎng)基（SD/-Ade/-His/-Leu/-Trp/X-α-Gal）上形成藍(lán)色菌落；而用pGADT7-IQM1Del113-114和
生物技術(shù)通報(bào) 2014年12期2014-03-22
- 真菌蛋白激發(fā)子PevD1互作蛋白的酵母雙雜交篩選及融合蛋白的原核表達(dá)
互作蛋白的酵母雙雜交篩選及融合蛋白的原核表達(dá)唐小麗 伍文憲 韓磊 楊秀芬（中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所 植物病蟲(chóng)害生物學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京 100081）PevD1是大麗輪枝菌（Verticillium dahliae）發(fā)酵液中分離純化的一種新蛋白激發(fā)子，能激發(fā)煙草和棉花的免疫防御反應(yīng)，提高抗病性。旨在深入研究PevD1的作用機(jī)理，利用酵母雙雜交系統(tǒng)，以PevD1為誘餌蛋白，篩選擬南芥中PevD1的互作蛋白，經(jīng)復(fù)篩、回轉(zhuǎn)驗(yàn)證得到3個(gè)候選互作蛋白基因R1，
生物技術(shù)通報(bào) 2014年10期2014-03-21
- 弓形蟲(chóng)酵母雙雜交c DNA文庫(kù)構(gòu)建及與AMA1羧基端相互作用蛋白的篩選
新的線索。酵母雙雜交系統(tǒng)是一種簡(jiǎn)便有效、準(zhǔn)確快捷的研究蛋白間相互作用的方法，廖亞金等利用該方法篩選出17 個(gè)與CSFV E2 相互作用的蛋白[11]。本實(shí)驗(yàn)構(gòu)建了弓形蟲(chóng)酵母雙雜交文庫(kù)，通過(guò)酵母雙雜交技術(shù)共篩選得到13 個(gè)與AMA1c 相互作用的蛋白，為進(jìn)一步對(duì)AMA1c 的功能研究奠定了基礎(chǔ)。1 材料和方法1.1 菌株及主要試劑 弓形蟲(chóng)RH 株為日本北海道帶廣畜產(chǎn)大學(xué)原蟲(chóng)病研究中心玄學(xué)南教授惠贈(zèng)；大腸桿菌DH5α 由本研究室保存；Make Your Own
中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào) 2014年3期2014-03-08
- 與杜氏鹽藻驅(qū)動(dòng)蛋白Ⅱ動(dòng)力亞基C端相互作用的新蛋白的酵母雙雜交篩選*
誘餌，采用酵母雙雜交的方法從杜氏鹽藻的cDNA酵母文庫(kù)中篩選與之相互作用的新蛋白。1 材料與方法1.1實(shí)驗(yàn)材料及試劑杜氏鹽藻購(gòu)自美國(guó)德州大學(xué)，杜氏鹽藻cDNA酵母文庫(kù)為鄭州大學(xué)生物工程系細(xì)胞生物學(xué)研究室構(gòu)建，EcoRⅠ、BamHⅠ、Hind Ⅲ 等DNA限制性?xún)?nèi)切酶、pMD19-T載體、DNA連接試劑盒均購(gòu)自寶生物工程(大連)有限公司，質(zhì)粒提取試劑盒、凝膠回收試劑盒購(gòu)自AXYGEN公司，酵母雙雜交所用載體pGBKT7、菌株Y187和AH109均購(gòu)自Clon
- 酵母雙雜交系統(tǒng)在痘病毒與宿主相互作用中的研究進(jìn)展
本文綜述了酵母雙雜交系統(tǒng)在痘病毒蛋白之間及病毒－宿主相互作用的研究現(xiàn)狀。1 酵母雙雜交系統(tǒng)1．1 酵母雙雜交系統(tǒng)原理 1986年，巴斯德實(shí)驗(yàn)室［3］發(fā)現(xiàn)一種酵母細(xì)胞轉(zhuǎn)錄活化因子Gal4模塊，Gal4結(jié)合一個(gè)特殊的DNA序列：上游激活區(qū) （upstream activation domain，UAS），在半乳糖存在時(shí)會(huì)激活轉(zhuǎn)錄。Gal4模塊分為兩個(gè)不同功能區(qū)：N－末端區(qū)域可以結(jié)合UAS，為DNA結(jié)合區(qū)（Binding domain，BD）；C－末端區(qū)域在半乳
中國(guó)人獸共患病學(xué)報(bào) 2013年9期2013-09-26
- 利用雙雜交系統(tǒng)篩選并鑒定與GPR30相互作用的蛋白
·論 著·利用雙雜交系統(tǒng)篩選并鑒定與GPR30相互作用的蛋白張 蕾1，常 宏2*，徐 東1（1.首都醫(yī)科大學(xué)宣武醫(yī)院心臟中心，北京100053；2.河北醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)課教學(xué)部生物化學(xué)教研室，河北石家莊050091）目的篩選并鑒定與GPR30相互作用的蛋白，為GPR30蛋白亞細(xì)胞定位和功能研究提供線索。方法應(yīng)用酵母雙雜交技術(shù)，構(gòu)建誘餌表達(dá)載體Pgbk/GPR30，與人卵巢互補(bǔ)DNA（complementary DNA，cDNA）文庫(kù)共轉(zhuǎn)化酵母菌AH109，篩選
河北醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào) 2013年4期2013-04-07
- 杜氏鹽藻S腺苷高半胱氨酸水解酶酵母雙雜交誘餌載體的構(gòu)建及自激活和毒性檢測(cè)*
氨酸水解酶酵母雙雜交誘餌載體的構(gòu)建及自激活和毒性檢測(cè)*柴丹丹1)，李慶華1)，閻赟夢(mèng)1)，毛麗紅1)，李 靚1)，朱立強(qiáng)2)，薛樂(lè)勛1)#1)鄭州大學(xué)生物工程系細(xì)胞生物學(xué)研究室鄭州 450001 2)鄭州大學(xué)第二附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科鄭州 450014#通訊作者，男，1944年2月生，教授，博士研究生導(dǎo)師，研究方向:腫瘤標(biāo)志物與基因工程，E-mail:xuelx@zzu.edu.cnS腺苷高半胱氨酸水解酶;酵母雙雜交;誘餌載體;自激活;杜氏鹽藻目的:構(gòu)建杜氏鹽藻S
- 應(yīng)用酵母雙雜交技術(shù)篩選與RANK蛋白新基序IVVY相互作用的蛋白*
.cn應(yīng)用酵母雙雜交技術(shù)篩選與RANK蛋白新基序IVVY相互作用的蛋白*王順清1△， 鐘雯婷1， 鄧 暉2， 毛 平1， 許艷麗1(廣州醫(yī)學(xué)院附屬市一人民醫(yī)院1血液科，2輸血科， 廣東 廣州 510180)目的應(yīng)用酵母雙雜交技術(shù)篩選小鼠巨噬細(xì)胞中與核因子κB受體激活因子(RANK)蛋白上新基序IVVY相互作用的蛋白，以探尋RANKL/RANK系統(tǒng)中介導(dǎo)破骨細(xì)胞形成的RANK下游新信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白。方法應(yīng)用GAL4酵母雙雜交系統(tǒng)3，構(gòu)建僅包含編碼新基序535IV
中國(guó)病理生理雜志 2012年4期2012-11-06
- 甘藍(lán)SCR、THL與SRK交替相互作用的酵母雙雜交檢測(cè)
eSRK2酵母雙雜交表達(dá)載體和class-Ⅰ型SRKJ激酶域，THL1酵母雙雜交表達(dá)載體，通過(guò)其毒性和自激活檢測(cè)來(lái)確定自交不親和性表型所依賴(lài)的3個(gè)起始信號(hào)傳導(dǎo)元件之間識(shí)別程度的差異，進(jìn)而通過(guò)激活酵母雙雜交的報(bào)告基因所表達(dá)的多少來(lái)確定其相互作用程度。并通過(guò)生物信息學(xué)分析確定其Ⅰ型和Ⅱ型歸屬，以期能確定class-Ⅱ型內(nèi)部的eSRK-SCR的互作及其與class-Ⅰ型之間THL、SCR與SRK存在的相互作用及其作用程度，為深入研究甘藍(lán)自交不親和性信號(hào)傳導(dǎo)分子過(guò)
中國(guó)蔬菜 2012年24期2012-08-08
- 酵母雙雜交系統(tǒng)檢測(cè) SK2與 RyR2蛋白的相互作用＊
du.cn酵母雙雜交系統(tǒng)檢測(cè) SK2與 RyR2蛋白的相互作用＊馬 晶1),趙國(guó)強(qiáng)1),朱 含2),袁建黨2),章 茜2)#,安玉會(huì)3)1)鄭州大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院微生物學(xué)與免疫學(xué)教研室鄭州 450001 2)鄭州大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院生理學(xué)教研室鄭州 450001 3)鄭州大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院生物化學(xué)與分子生物學(xué)教研室鄭州 450001#通訊作者,女,1957年 10月生,博士,教授,研究方向:心律失常的分子機(jī)制,E-mail:qianzhang@zzu.edu.cn小電導(dǎo)
- 杜氏鹽藻寡糖基轉(zhuǎn)移酶亞基stt3a酵母雙雜交誘餌載體的構(gòu)建及自激活和毒性檢測(cè)*
stt3a酵母雙雜交誘餌載體的構(gòu)建及自激活和毒性檢測(cè)*侯永杰1)，李 杰1)，李慶華1)，王建人2)，薛樂(lè)勛1)#1)鄭州大學(xué)生物工程系細(xì)胞生物學(xué)研究室鄭州 450001 2)河南中醫(yī)學(xué)院生理教研室鄭州 450008#通訊作者，男，1944年2月生，教授，博士研究生導(dǎo)師，研究方向:腫瘤標(biāo)志物與基因工程，E-mail:xuelx@zzu.edu.cn杜氏鹽藻;stt3a;酵母雙雜交;鞭毛再生目的:觀察杜氏鹽藻寡糖基轉(zhuǎn)移酶亞基stt3a的酵母雙雜交誘餌載體表達(dá)
- 利用噬菌體展示技術(shù)研究功能基因組和蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用——與酵母雙雜交方法比較
作用——與酵母雙雜交方法比較張佳娣，石屹峰近年來(lái)基因組測(cè)序工作已揭示了數(shù)以萬(wàn)計(jì)的新基因，但是這些基因序列的價(jià)值只有當(dāng)這些數(shù)據(jù)被翻譯成蛋白質(zhì)功能的時(shí)候才能被了解。而蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)之間相互作用構(gòu)成了細(xì)胞生化反應(yīng)網(wǎng)絡(luò)的一個(gè)主要組成部分，不僅可以從分子水平揭示蛋白質(zhì)的功能，而且為我們更好地理解生命過(guò)程、疾病機(jī)制和新藥開(kāi)發(fā)等提供了一個(gè)很好的基礎(chǔ)。當(dāng)前隨著人類(lèi)基因組和眾多生物物種全基因組測(cè)序的完成，功能基因組學(xué)（functional genomics）成為研究的主流，
中國(guó)醫(yī)藥生物技術(shù) 2010年3期2010-04-06