付雪蓮，臧密密，苗艷，孫志敏，李格琳

作者單位：滄州市人民醫(yī)院產(chǎn)科，河北 滄州 061000

子癇前期（preeclampsia，PE）是女性妊娠期特有的一種疾病，多發(fā)生于妊娠中晚期，可表現(xiàn)為蛋白尿、高血壓，嚴(yán)重影響母嬰結(jié)局［1-2］。既往研究顯示，胎盤螺旋動脈重鑄不足是誘發(fā)PE 的主要因素［3］。因此，尋找與胎盤螺旋動脈重鑄有關(guān)的指標(biāo)，對及時干預(yù)，改善病人生存結(jié)局尤其重要。研究發(fā)現(xiàn)，在胎盤發(fā)育進程中，長鏈非編碼RNA（long non-coding RNA，lncRNA）對螺旋動脈重鑄、滋養(yǎng)層細(xì)胞分化、血管形成起重要調(diào)控作用［4-5］。lncRNA 腫瘤易感候選基因11（lncRNA cancer susceptibility candidate 11，lncRNA CASC11）屬于lncRNA 的一員，其可調(diào)控上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化、細(xì)胞侵襲、遷移，與動脈粥樣硬化、癌癥進程相關(guān)［6-7］；信號轉(zhuǎn)導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄活化因子3（signal transducer and activator of transcription 3，STAT3）是一種轉(zhuǎn)錄因子，其可通過影響滋養(yǎng)層細(xì)胞增殖分化進而參與PE 發(fā)生發(fā)展［8］；且Han 等［9］研究發(fā)現(xiàn)，STAT3 可激活lncRNA CASC11 進而影響肝細(xì)胞癌發(fā)展過程。但STAT3、lncRNA CASC11與PE 病人胎盤螺旋動脈重鑄的關(guān)系尚不明確。基于此，本研究通過測定STAT3 mRNA、lncRNA CASC11 在PE中的水平，分析二者與胎盤螺旋動脈重鑄的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料選取2019 年1 月至2022 年4 月于滄州市人民醫(yī)院行剖宮產(chǎn)分娩的PE 病人68 例為PE 組，孕婦年齡范圍為21～35 歲，分娩孕周范圍為36～41 周。并納入同期該院行剖宮產(chǎn)分娩的健康孕婦68 例為健康組，孕婦年齡范圍為21～35 歲，分娩孕周范圍為36～41周；孕婦因胎位異常、狹窄骨盆行剖宮產(chǎn)手術(shù)，自然受孕、單胎，妊娠順利，無蛋白尿，血壓＜140/90 mmHg，無糖尿病、心臟病或其他妊娠相關(guān)疾病。另收集健康組、PE 組孕婦分娩前1 d 舒張壓、收縮壓、孕前身體質(zhì)量指數(shù)等資料。本研究經(jīng)滄州市人民醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)（批號k2020-075）。PE 病人診斷標(biāo)準(zhǔn)：（1）符合《婦產(chǎn)科學(xué)》（第8版）［10］中PE 的判定標(biāo)準(zhǔn)；（2）自然受孕且單胎妊娠；（3）臨床資料完整，自愿參與本研究。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）有糖尿病、高血壓、心臟病病史者；（2）有腎臟病、甲狀腺功能亢進等病史者；（3）合并其他妊娠疾病者；（4）合并膽囊炎、凝血功能異常、嚴(yán)重肝損傷、腫瘤者；（5）有先天性遺傳性疾病者；（6）有胎盤早剝、胎兒畸形等其他產(chǎn)科并發(fā)癥者。

1.2 方法

1.2.1 樣本收集所有胎盤娩出15 min 內(nèi)，于胎盤母體面中央位置剪取5 塊胎盤組織（1 cm×1 cm×1 cm 大小，避開鈣化、出血區(qū)域），生理鹽水漂洗3 次，其中一塊胎盤組織立即置于液氮罐中保存1 夜，轉(zhuǎn)移至-80 ℃冰箱；另外4 塊胎盤組織利用戊二醛脫水，-4 ℃冰箱中保存。

1.2.2 胎盤螺旋動脈管壁厚度、管腔面積檢測從-4 ℃冰箱取出同一胎盤的4塊組織（0.5 cm×0.5 cm×0.2 cm），梯度脫水，染色，利用掃描電子顯微鏡（青島浩正科儀智能技術(shù)有限公司，EmCrafts）隨機掃描螺旋動脈，每塊組織各取10條，檢測其管壁厚度、管腔面積。

1.2.3 實時熒光定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（qRT-PCR）檢測胎盤組織中STAT3 mRNA、lncRNA CASC11 表達水平將-80 ℃冰箱中的胎盤組織取出，利用TRIzol Reagent（Invitrogen 公司，15596-026）提取胎盤組織總RNA；使用RevertAid First Strand cDNA Synthesis Kit（OMEGA 公司，TQ2501-01）制備互補DNA（cDNA）；最終，采用SYBR Green Realtime PCR Master Mix（北京華越洋生物科技有限公司，CAL412）及qRT-PCR 儀（IT-IS 公司，MyGo Pro）擴增cDNA、確定循環(huán)閾值（Ct）。擴增參數(shù)：98.8 ℃預(yù)變性7 min；97.2 ℃變性30 s，70.5 ℃退火15 s，64.5 ℃延伸15 s，循環(huán)40 次。甘油醛-3-磷酸脫氫酶（GAPDH）作為STAT3、lncRNA CASC11 的內(nèi)參基因（其引物序列見表1）。利用2-ΔΔCt法計算STAT3、lncRNA CASC11相對表達量。

表1 qRT-PCR檢測胎盤組織中STAT3、lncRNA CASC11、GAPDH引物序列

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法SPSS 22.0 軟件分析數(shù)據(jù)。計量數(shù)據(jù)經(jīng)Kolmogorov-Smimov 檢驗，均符合正態(tài)分布，行兩獨立樣本t檢驗，以描述；采用Pearson 相關(guān)性分析檢驗兩變量間的相關(guān)性。P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 健康組與PE 組一般資料比較與健康組相比，PE 組病人舒張壓、收縮壓升高（P＜0.05），年齡、分娩孕周、身體質(zhì)量指數(shù)差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。詳見表2。

表2 健康組與子癇前期（PE）組一般資料比較/

表2 健康組與子癇前期（PE）組一般資料比較/

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2.2 健康組與PE 組胎盤組織STAT3 mRNA、lncRNA CASC11 表達水平比較與健康組相比，PE組病人胎盤組織中STAT3 mRNA（0.40±0.14 比1.04±0.35）、lncRNA CASC11（0.46±0.15 比1.01±0.34）表達水平降低（t=14.00、12.21，均P＜0.001）。

2.3 PE 病人胎盤組織中STAT3 mRNA 表達水平與lncRNA CASC11 的相關(guān)性Pearson 法分析顯示，PE 病人胎盤組織中STAT3 mRNA 表達水平與lncRNA CASC11呈正相關(guān)（r=0.57，P＜0.05）。

2.4 健康組與PE 組胎盤螺旋動脈管壁厚度、管腔面積比較與健康組相比，PE組病人胎盤螺旋動脈管壁厚度增加［（119.04±8.03）μm 比（101.78±6.95）μm，t=13.40，P＜0.001］，管腔面積減小［（140.62±17.59）μm比（193.30±24.16）μm，t=14.54，P＜0.001］。

2.5 PE 病人胎盤組織中STAT3 mRNA、lncRNA CASC11 表達水平與胎盤螺旋動脈管壁厚度、管腔面積的相關(guān)性Pearson 法分析顯示，PE 病人胎盤組織STAT3 mRNA、lncRNA CASC11 表達水平與胎盤螺旋動脈管壁厚度呈負(fù)相關(guān)（P＜0.05），與管腔面積呈正相關(guān)（P＜0.05）。詳見表3。

表3 PE病人胎盤組織STAT3 mRNA、lncRNA CASC11表達水平與胎盤螺旋動脈管壁厚度、管腔面積的相關(guān)性

3 討論

PE 是一種發(fā)生于妊娠中后期的多器官功能障礙性疾病，是造成孕產(chǎn)婦、胎兒死亡的重要因素［11-12］。研究表明，滋養(yǎng)細(xì)胞增殖、侵襲能力降低、滋養(yǎng)細(xì)胞過度凋亡，可造成胎盤螺旋動脈重鑄不足，導(dǎo)致胎盤再灌注損傷及母胎循環(huán)障礙，引發(fā)PE［3，8］。因此，探究與PE發(fā)病、胎盤螺旋動脈重鑄不足的相關(guān)因素，對臨床防治PE，改善母嬰結(jié)局有積極意義。

STAT3 被細(xì)胞外信號激活后進到細(xì)胞核內(nèi)，其可通過與靶基因結(jié)合，進而調(diào)節(jié)血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖，參與細(xì)胞有絲分裂、侵襲，影響胚胎發(fā)育及血管生成，與高血壓、PE 等病理發(fā)展有關(guān)［13-14］。研究發(fā)現(xiàn)，STAT3 在PE 中呈低表達，其可能通過影響氧化應(yīng)激損傷，抑制滋養(yǎng)細(xì)胞遷移、侵襲，促進滋養(yǎng)細(xì)胞凋亡進而影響PE 發(fā)生發(fā)展［15-16］；另外，張曉麗、趙曉勇［17］通過比較PE 產(chǎn)婦與正常產(chǎn)婦胎盤組織STAT3 mRNA 水平，發(fā)現(xiàn)與正常產(chǎn)婦相比，PE 產(chǎn)婦胎盤組織STAT3 mRNA 水平較低，STAT3可能是治療PE 的潛在靶點。qRT-PCR 具有用樣少、靈敏度高、可重復(fù)檢測的優(yōu)點，能用于各種組織基因水平檢測。本研究利用qRT-PCR 法測定胎盤組織中STAT3 mRNA 的表達水平，結(jié)果顯示，PE 病人胎盤組織中STAT3 mRNA表達水平降低，與張曉麗、趙曉勇［17］研究結(jié)果相似，提示STAT3 mRNA 表達水平較低可能與PE發(fā)生發(fā)展相關(guān)，推測STAT3可能通過與靶基因結(jié)合，進而影響滋養(yǎng)細(xì)胞凋亡、侵襲及胎盤血管新生，從而在PE 中發(fā)揮抑制作用。lncRNA 是一類可穩(wěn)定存在于胎盤組織中的非編碼RNA 分子，其可通過影響滋養(yǎng)細(xì)胞遷移、侵襲，進而在PE 中起調(diào)控作用，lncRNA 具有診斷PE、評估PE 妊娠結(jié)局的潛在價值［5，18］。研究發(fā)現(xiàn)，lncRNA LINC00922 在PE 中呈高表達，其可通過影響胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞增殖、侵襲能力，進而在PE 中發(fā)揮促進作用，lncRNA LINC00922 可能是PE 的診治靶點［19］；另外，lncRNA T 細(xì)胞白血病/淋巴瘤6 在PE 中表達上調(diào)，其可輔助評估PE 病人妊娠結(jié)局［20］。以上研究證實，PE 發(fā)生發(fā)展可能與lncRNA 表達失調(diào)密切相關(guān)。lncRNA CASC11 是lncRNA 的一員，位于8q24.21 染色體區(qū)域，目前，關(guān)于其研究多涉及前列腺癌［21］、神經(jīng)母細(xì)胞瘤［22］等多種癌癥，其與PE 的關(guān)系尚不可知。另外，Han等［9］研究發(fā)現(xiàn)，STAT3作為一種轉(zhuǎn)錄因子，其可通過影響lncRNA CASC11 表達，從而影響肝細(xì)胞癌病理變化。故本研究探究了lncRNA CASC11 在PE 中的表達情況，結(jié)果顯示，PE 病人胎盤組織中l(wèi)ncRNA CASC11 表達水平較低，提示lncRNA CASC11 可能參與PE 發(fā)病過程，分析可能原因，lncRNA CASC11 作為lncRNA 的一員，其可能通過影響滋養(yǎng)細(xì)胞增殖、遷移、侵襲，進而促進PE 發(fā)生發(fā)展。

此外，本研究通過Pearson 相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，PE病人胎盤組織中STAT3 mRNA 表達水平與lncRNA CASC11呈正相關(guān)，提示STAT3 mRNA可能與lncRNA CASC11共同影響PE病理過程。胎盤螺旋動脈重鑄不足，可使螺旋動脈管壁較厚、管腔狹窄。本研究中，PE病人胎盤螺旋動脈管壁較厚，管腔面積較小，且PE 病人胎盤組織STAT3 mRNA、lncRNA CASC11表達水平與胎盤螺旋動脈管壁厚度呈負(fù)相關(guān)，與管腔面積呈正相關(guān)，提示PE病人存在胎盤螺旋動脈重鑄不足現(xiàn)象，且STAT3 mRNA、lncRNA CASC11 與PE 病人胎盤螺旋動脈重鑄顯著相關(guān)，推測低表達STAT3 mRNA、lncRNA CASC11 可能通過影響滋養(yǎng)細(xì)胞氧化損傷，促進滋養(yǎng)細(xì)胞凋亡，抑制滋養(yǎng)細(xì)胞侵襲，進而影響胎盤螺旋動脈重鑄，影響PE 病變過程。

綜上所述，PE 病人胎盤組織中STAT3 mRNA、lncRNA CASC11 均表達下調(diào)，二者均與胎盤螺旋動脈重鑄密切相關(guān)，STAT3 mRNA、lncRNA CASC11 可能為臨床診治PE提供新靶標(biāo)。但由于時間限制，缺少PE 病人的隨訪資料，后期將分析STAT3 mRNA、lncRNA CASC11表達水平與PE妊娠結(jié)局的關(guān)系。