傳代
- 胎鼠神經(jīng)干細胞原代培養(yǎng)及傳代條件優(yōu)化
示：NSCs 在傳代培養(yǎng)后的活性受培養(yǎng)基成分、生長因子濃度、消化時長和吹打力度等方面的影響，但傳代的細胞密度和傳代時神經(jīng)球大小對NSCs 活性影響及其作用效果尚未完全闡明。本研究在原代培養(yǎng)NSCs 的基礎(chǔ)上，探討傳代的細胞密度和神經(jīng)球大小對神經(jīng)干細胞活性的影響，為優(yōu)化NSCs 的體外培養(yǎng)條件提供實驗依據(jù)。1 材料與方法1.1 實驗動物、主要試劑和儀器孕12~14 d SPF級SD 大鼠，無特定病原體動物，由北京維通利華實驗動物技術(shù)有限公司提供，實驗動物生產(chǎn)
吉林大學(xué)學(xué)報（醫(yī)學(xué)版） 2023年6期2024-01-05
- 富集纖維素降解菌群過程中微生物群落多樣性分析
用。本研究以連續(xù)傳代的纖維素降解復(fù)合菌系為研究對象，利用16S rRNA 及ITS基因擴增子高通量測序方法，分析不同傳代復(fù)合菌系降解纖維素過程中各微生物分類單元的群落組成及其相對豐度變化，探究復(fù)合菌系群落結(jié)構(gòu)的動態(tài)變化規(guī)律。1 材料與方法1.1 材料接種物：取自四川省金堂縣農(nóng)村合作社新鮮屠宰的山羊瘤胃內(nèi)溶物，4℃保存于無菌的血清瓶中。配制赫奇遜無機鹽培養(yǎng)基(g·L-1)：KH2PO41.0，NaCl 0.1，MgSO4·7H2O 0.3，NaNO32.5，
中國沼氣 2023年1期2023-03-27
- 狂犬病病毒aG株在人用狂犬病疫苗中應(yīng)用的研究進展
毒，隨后通過兔腦傳代，馴化為一種固定毒：1~10代的潛伏期不穩(wěn)定，波動在10～26 d；30代后的潛伏期穩(wěn)定在6 d。將該毒株命名為“北京株”，適應(yīng)31代后用于制備狂犬病疫苗，該株病毒毒力略強于法國、德國、意大利、波蘭、印度等國家的毒株，具有免疫原性好、遺傳穩(wěn)定的特點，用其生產(chǎn)的狂犬病疫苗有效性良好［3］。20世紀60~70年代，研究者將狂犬病病毒北京株通過豚鼠腦傳代與原代地鼠腎細胞交替傳代的方法適應(yīng)于原代地腎細胞培養(yǎng)，用于狂犬病疫苗生產(chǎn)。該毒株免疫原性好
中國生物制品學(xué)雜志 2022年3期2022-11-15
- 豬繁殖與呼吸綜合征病毒傳代與免疫原性變化的關(guān)聯(lián)研究
JX143經(jīng)細胞傳代的三個代次病毒（JXM105、JXM125和JXM135）為研究對象，通過3株傳代毒株對其親本毒株JX143免疫保護效力評價和全基因組序列分析，解析病毒體外傳代與毒株免疫原性間的關(guān)聯(lián)。本研究首先用4周齡仔豬的免疫接種試驗和攻毒保護試驗初步評價了3株傳代毒株的安全性和免疫效力，為PRRSV傳代致弱毒株的科學(xué)評價提供參考。隨后在對這3個毒株進行全長基因組測序的基礎(chǔ)上，結(jié)合動物試驗結(jié)果，探討了JX143毒株在細胞傳代過程中獲得的基因突變與病毒
中國動物傳染病學(xué)報 2022年4期2022-09-23
- 嗜酸乳桿菌和雙歧桿菌遺傳性對其益生特性及貨架期菌數(shù)的影響
]。這是因為連續(xù)傳代和轉(zhuǎn)管次數(shù)可導(dǎo)致基因重排或缺失，影響其益生特性[20-23]。本研究中菌株是經(jīng)文獻報道，具有優(yōu)良益生特性[24]。通過評價益生性狀遺傳性及貨架期存活率，篩選益生特性最佳菌株，旨在為益生菌產(chǎn)品產(chǎn)業(yè)化提供依據(jù)。1 材料與方法1.1 材料與試劑嗜酸乳桿菌Z-43，乳雙歧桿菌Z-1，Z-36，Z-38，Z-39，長雙歧桿菌Z-5，短雙歧桿菌Z-47，由青島根源生物技術(shù)集團公司食品菌株資源庫提供；鼠李糖乳桿菌LGG購于新西蘭恒天然公司。MRS肉湯
中國乳品工業(yè) 2022年4期2022-05-19
- 無血清全懸浮PK15細胞培養(yǎng)豬圓環(huán)病毒2型的研究
、低血清懸浮優(yōu)化傳代、無血清懸浮傳代培養(yǎng)，累計傳代23次后，該株細胞可在無血清全懸浮培養(yǎng)條件下，初始密度為0.5×106/mL時，經(jīng)72 h密度可增殖到4.0×106/mL左右，形態(tài)良好，倍增時間穩(wěn)定，且細胞活率達到95%以上，命名為PK15-S[5]。1.2.2 PK15-S細胞對PCV2敏感性實驗 參考平面PK15細胞接毒工藝，將馴化后的PK15-S細胞按0.04 MOI接毒，接毒密度為0.5×106/mL，同時加入2% D-G(V/V)，48 h、7
中國獸藥雜志 2022年1期2022-02-21
- 酵母在傳代過程中生長性能、碳流向及抗氧化特性的研究
問題，需要不斷地傳代保藏，在傳代保藏過程中會發(fā)生衰老，嚴重影響發(fā)酵產(chǎn)物的品質(zhì)[5]。酵母的衰老主要分為兩種：(1)隨著酵母不斷傳代、分裂次數(shù)的增多，活力逐漸降低，稱為復(fù)制性衰老；(2)單個酵母產(chǎn)生有限的子細胞的時序性衰老[6-7]。引起酵母細胞衰老的原因主要有：(1)酵母細胞端粒理論[8-9]，酵母細胞在每次分裂過程中細胞端?？s短3～4 bp，直到細胞的平均端粒長度200 bp耗盡，酵母的DNA發(fā)生損傷造成衰老。(2)酵母內(nèi)源性氧化脅迫[10]，酵母在代謝
- 骨髓間充質(zhì)干細胞生物學(xué)特性的影響因素：供體年齡和體外擴增
研究表明，在早期傳代中，hBMSC的細胞增殖率約為48 h。在第10 代（10 passages，P10）后，細胞的增殖效率穩(wěn)步下降。至少在P10之前hBMSC 保留了其高水平的端粒酶活性和長端粒長度。hBMSCs 在P15 顯示出擴大、扁平的細胞形態(tài)，此后他們停止進行細胞分裂，但仍保持存活。在P20， hBMSCs 經(jīng)歷了周期阻滯，端粒酶活性顯著降低。大鼠的BMMSCs 成纖維細胞樣形態(tài)維持了7 ～ 10 代。漸漸地，衰老細胞的增殖速度明顯減緩，凋亡率增
實用器官移植電子雜志 2021年6期2021-11-30
- 塞尼卡病毒A在BHK-21細胞中培養(yǎng)條件探索
酶-EDTA消化傳代（比例為1:3），隨機將細胞分成2組，一組同步接種1% SVA；另一組待細胞生長約90%時，棄去營養(yǎng)液，異步接種1% SVA，加入MEM維持液（含2%新生牛血清）；設(shè)健康細胞作對照。接毒后細胞放37℃、5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。培養(yǎng)12 h后每3 h觀察一次，18 h后每3 h、每組隨機收獲2瓶，直至30 h，收獲后反復(fù)凍融2次，測定TCID50。2.2 不同細胞濃度培養(yǎng)同時收獲對比試驗 將長滿致密單層的BHK-21細胞消化后，按1:2
福建畜牧獸醫(yī) 2021年5期2021-10-03
- 豬圓環(huán)病毒2型培養(yǎng)工藝比較研究
毒+氨糖組：細胞傳代接毒基本同C組，在培養(yǎng)至48 h棄營養(yǎng)液后，加入含3 mmol/L D-氨基葡萄糖、30 mL/L無豬圓環(huán)病毒污染的新生牛血清的細胞維持液繼續(xù)培養(yǎng)36 h～48 h，凍融收獲細胞及培養(yǎng)液。④帶毒傳代組：將擴大培養(yǎng)的細胞，加入0.2 g/L EDTA、0.5 g/L胰酶消化液，37℃作用5 min～8 min，消化分散均勻。用含80 mL/L無豬圓環(huán)病毒污染的新生牛血清的MEM細胞生長液制備成每毫升約2×105個細胞的細胞懸液。按細胞生長
動物醫(yī)學(xué)進展 2021年4期2021-04-06
- 非洲豬瘟病毒細胞傳代致弱株研究進展
可以在細胞上繁殖傳代[1-3]。早期研究就已發(fā)現(xiàn)，分離強毒株在細胞上連續(xù)傳代后再次接種豬不再出現(xiàn)典型的臨床癥狀，而且這些豬可以經(jīng)受住同源強毒株的攻擊[3]。但后期的一些研究卻發(fā)現(xiàn)，某些毒株在傳代細胞系連續(xù)傳代后雖然毒力減弱，卻不能提供同源保護[4]。同時，不同ASFV在不同細胞上的適應(yīng)性傳代結(jié)果并不相同。面對上述進展，國內(nèi)尚無專業(yè)材料進行論述，因此本文將對國際上ASFV細胞傳代致弱毒株相關(guān)研究進行整理，分析其傳代致弱規(guī)律，從而為我國ASFV細胞適應(yīng)株研究及
中國動物檢疫 2021年6期2021-03-28
- DMEM 和F- 12K 對肝癌細胞系HepG- 2 的影響
1.2.1 細胞傳代待細胞生長至培養(yǎng)皿的80%-90%時進行傳代。棄上清，用1mlPBS 清洗兩次，棄PBS，加1ml 胰酶后放置在培養(yǎng)箱中37℃消化1min，鏡下觀察細胞形態(tài)變圓后棄胰酶，加2ml 培養(yǎng)液用移液槍沖刷并收集細胞。將上述的2ml 混有細胞的培養(yǎng)液向兩個空皿中各加入1ml，再將培養(yǎng)液補足至7ml，輕微振蕩后置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。1.2.2 細胞換液棄上清，用1mlPBS 清洗兩次，棄PBS，將培養(yǎng)液補足至7ml，輕微振蕩后置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。圖11
科學(xué)技術(shù)創(chuàng)新 2021年7期2021-03-23
- 母系肥胖通過miR-27a-3p增加子代肝細胞癌的發(fā)病率
代脂肪肝病變發(fā)生傳代性累積，但目前領(lǐng)域內(nèi)尚不清楚母系肥胖是否會影響子代HCC的發(fā)生發(fā)展。因此，本研究設(shè)計有關(guān)實驗旨在研究這其中的聯(lián)系及其潛在機制。在實驗團隊前期建立的小鼠高脂飲食誘導(dǎo)的三代肥胖模型中，用二乙基亞硝胺誘發(fā)HCC，并進行轉(zhuǎn)錄組測序以確定子代中基因和microRNA的變化。利用細胞系和裸鼠模型評估了miR-27a-3p-Acsl1/Aldh2軸在HCC中的作用，并利用孕鼠及其后代研究了該調(diào)控軸對代間的影響。在高脂飲食刺激下，母系肥胖導(dǎo)致子代更易患
臨床肝膽病雜志 2020年10期2020-12-13
- 兩株自篩酵母衰退性對葡萄酒發(fā)酵原酒品質(zhì)的影響
的，而是經(jīng)過連續(xù)傳代逐漸變化的[4]，除了連續(xù)傳代以外，不適宜的培養(yǎng)和保藏條件也是加速菌種衰退的一個重要原因[5]。因此，菌種保藏的基本手段是采用低溫、干燥、冷凍或隔氧等方法來中止菌種繁殖，降低代謝強度，使之處于休眠狀態(tài)[6-7]。適合葡萄酒自篩酵母的保存方法有很多，如斜面低溫保藏法、液體石蠟保藏法、液體甘油保藏法等[8-9]。工廠由于設(shè)備和技術(shù)等條件的限制，最常用的菌種保藏方法是斜面低溫保藏法，此法的優(yōu)點是操作簡單，不需特殊設(shè)備，能隨時檢查所保藏的菌株是
釀酒科技 2020年9期2020-11-02
- 異育銀鯽(Carassius auratus gibelio)脊髓組織 細胞系的建立及對CyHV-2 的敏感性*
胞系中進行連續(xù)的傳代(馬杰等， 2016)， 比如胖頭鯉細胞(fathead minnow cells， FHM) (Junget al， 1995)、鯉魚上皮瘤細胞(epithelioma papulosum cyprini， EPC)、草魚卵巢細胞(grass carp ovary， CO)、草 魚 腎 細 胞(grass carp kidney， CIK)均對CyHV-2 不敏感， 僅錦鯉鰭細胞(koi fin， KF-1)能產(chǎn)生細胞病變效應(yīng)(CPE
海洋與湖沼 2020年5期2020-10-14
- 大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞分離方法的改良與比較*
的分離效率較低，傳代時間較久。2019年9—11月，本研究對胰蛋白酶消化合并細胞刮刮取法的分離培養(yǎng)方法進行探索，改進了傳統(tǒng)的分離方法，以期在較短的時間內(nèi)獲得更多數(shù)量的BMSCs，為BMSCs進一步研究和應(yīng)用提供參考。1 材料與方法1.1 一般材料1.1.1 實驗動物 清潔級雄性SD大鼠9只，體重(200±15)g，由昆明醫(yī)科大學(xué)動物部提供；取材過程符合動物倫理學(xué)標準。1.1.2 主要試劑及儀器 胎牛血清(FBS)、培養(yǎng)基、磷酸鹽緩沖液(PBS)、青鏈霉素、
廣東醫(yī)學(xué) 2020年14期2020-08-17
- 液體發(fā)酵高產(chǎn)納豆激酶菌株的復(fù)合誘變選育
的突變株，經(jīng)8次傳代后5株菌液體發(fā)酵產(chǎn)NK活性分別達到了1 846.15、1 956.48、2 184.32、1 865.38和2 095.23U/mL，是復(fù)合誘變出發(fā)菌株的1.62、1.81、1.98、1.61、1.62倍，為液體發(fā)酵生產(chǎn)NK的工業(yè)化奠定了良好的基礎(chǔ).1 材料與方法1.1 試驗材料1.1.1 菌種 本實驗所用NK 生產(chǎn)菌株，為實驗室保藏的菌株和市售豆豉、黃豆醬和豆腐乳中篩選的產(chǎn)NK菌株.1.1.2 主要試劑 牛纖維蛋白原、凝血酶和標準尿激
河南科學(xué) 2020年5期2020-07-04
- 復(fù)方金連菊制劑對PRRSV、TGEV 體外作用的研究
arc-145 傳代細胞，PK-15 傳代細胞，TGEV 均為廣西壯族自治區(qū)獸醫(yī)研究所病毒研究室提供。1.1.3 主要試劑DMEM培養(yǎng)基、1640培養(yǎng)基、小牛血清、胰蛋白酶（0.25%）、NaHCO3、雙抗（青霉素80 萬單位、鏈霉素80 單位）1.2 方法（1） PRRSV、TGEV 病毒毒力測定（TCID50）。按殷震[6]方法、馮曉巍[3]方法將Marc-145 傳代細胞進行消化傳代，細胞數(shù)調(diào)整至2×105個/ml，加到96 孔細胞培養(yǎng)板中，100u
中國畜禽種業(yè) 2020年6期2020-07-02
- PK15細胞的無血清全懸浮馴化研究
大、放大倍數(shù)大、傳代方便等優(yōu)勢，但是對攪拌和氣體的剪切力非常敏感，對反應(yīng)器的結(jié)構(gòu)有較高的要求。無血清培養(yǎng)是通過用已知的人源或者動物源的蛋白或生長因子、激素來代替動物血清的一種培養(yǎng)方式，可減少后期純化工作的難度，提高產(chǎn)品質(zhì)量[7]。本研究對一株貼壁的PK15進行了無血清的全懸浮馴化，以期為大規(guī)模培養(yǎng)豬圓環(huán)2型病毒提供理論依據(jù)。1 材料與方法1.1 材料1.1.1 細胞和毒株 PK15細胞(豬圓環(huán)病毒1型陰性、豬肺炎支原體陰性)由大北農(nóng)動物醫(yī)學(xué)研究中心保存。1
中國獸藥雜志 2019年9期2019-10-14
- UL46基因移碼突變對PRV毒力的影響
ro細胞上40℃傳代培養(yǎng)120代后，獲得了1株高度適應(yīng)Vero細胞的毒株（JS-2012-F120株），該毒株病毒滴度明顯提高，對豬和小鼠的毒力減弱[2]。測序結(jié)果顯示，在傳代過程中病毒基因組有多處基因缺失和突變[3]。gE是PRV主要的毒力基因，高溫傳代弱毒株（JS-2012-F120株）的gE至US2基因區(qū)域2307個堿基缺失被認為是PRV毒力減弱的主要因素[2]。另外，UL46基因在1796位有29個堿基插入導(dǎo)致基因移碼突變，使3'端130個氨基酸突
中國動物傳染病學(xué)報 2019年4期2019-09-06
- 人胰腺癌細胞系PANC-1細胞培養(yǎng)方法的改良
ANC-1細胞的傳代1）準備器械和試劑，常規(guī)消毒；2）鏡下觀察細胞生長狀態(tài)和匯合度，一般于匯合度80%左右進行傳代；3）常規(guī)洗滌、胰酶消化細胞；4）利用消化的間隙，在新培養(yǎng)皿中加入培養(yǎng)液，作好標記；5）鏡下觀察細胞脫落和離散；6）將原培養(yǎng)皿內(nèi)細胞懸液，平均分配于新培養(yǎng)皿中；震蕩混勻后放37℃，5%CO2培養(yǎng)箱孵育。3.結(jié)果從2016年8月-2017年9月，本課題組共復(fù)蘇PANC-1細胞11次，傳代19次，見圖。圖 傳統(tǒng)方法和改良方法對比圖細胞傳統(tǒng)復(fù)蘇到傳代
醫(yī)藥前沿 2019年11期2019-05-23
- 菌種超低溫保存法與人工傳代法的比較
[1-2]。人工傳代法的操作雖簡單，但費時、費工、效率低，且反復(fù)傳代會增加菌種污染的機會。因而尋求一種簡單易行、較長期有效的菌種保存方法一直是實驗室研究的熱點和所期望的目標。本文對超低溫法（-80 ℃）與人工傳代法保存菌種的效果，結(jié)合文獻資料進行了比較觀察，其中超低溫法（-80 ℃）采用兩種方法保存，菌種保存液法及瓷珠菌種保存管法，現(xiàn)將結(jié)果報告如下。1 材料與方法1.1 保存菌的菌種名錄本研究共使用的15種菌種，分別購自廣東省微生物研究所菌種保藏中心及美國
現(xiàn)代食品 2018年21期2019-01-14
- 有關(guān)擬南芥高溫記憶的表觀遺傳機制研究取得重要進展
維持植物對高溫的傳代記憶的新機制。通過生物化學(xué)、分子生物學(xué)和遺傳學(xué)相結(jié)合的方法，該研究鑒定出一個F-box泛素連接酶SGIP1（SGS3-INTERACTING PROTEIN1） 參與降解SGS3蛋白。高溫對SGIP1的上調(diào)表達同樣具有傳代記憶。對傳代記憶機制的深入研究結(jié)果表明，高溫能激活熱激轉(zhuǎn)錄因子HEAT SHOCK TRANSCRIPTION FACTOR A2 (HSFA2)。HSFA2一方面能直接結(jié)合SGIP1啟動子上的熱激轉(zhuǎn)錄元件從而激活SG
蔬菜 2019年3期2019-01-04
- 牦牛病毒性腹瀉病診斷與病毒分離鑒定
驗室保存的牦牛腎傳代細胞，牛病毒性腹瀉病毒陽性血清、陰性血清、牛病毒性腹瀉間接免疫熒光檢測試劑盒3種物品均購自于中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所。1.2 臨床診斷結(jié)合大通縣某養(yǎng)殖場的實際發(fā)病情況，對該養(yǎng)殖場發(fā)病牛的臨床癥狀進行認真仔細地觀察，結(jié)合養(yǎng)殖場該病的流行情況和患病牛的臨床表現(xiàn)，對該病做出初步診斷。1.3 試驗方法1.3.1 樣品采集采集養(yǎng)殖場某患病牛的鼻腔粘液和糞便，作為臨床實驗室診斷病料，低溫保存帶回實驗室。1.3.2 病毒分離培養(yǎng)與細胞病變觀察將從患病養(yǎng)殖場
畜牧獸醫(yī)科學(xué) 2018年13期2018-11-19
- 兩株lager啤酒酵母在傳代及自溶過程中生理性能差異的比較
種操作過程被稱為傳代(serial re-pitching)[1, 3]。在傳代過程中，酵母細胞在發(fā)酵結(jié)束時被收集并用于新一代的接種，而酵母細胞用于連續(xù)發(fā)酵的次數(shù)，叫做“代數(shù)”。啤酒釀造工業(yè)中，活躍的、年輕的和生理穩(wěn)定的酵母細胞是生產(chǎn)高質(zhì)量啤酒必不可少的，一些啤酒廠也盡量避免出現(xiàn)傳代次數(shù)過多的問題[4]。啤酒酵母根據(jù)發(fā)酵結(jié)束后酵母細胞在發(fā)酵液中活動的狀態(tài)可分為兩類，分別為上面啤酒酵母和下面啤酒酵母。上面啤酒酵母(Saccharomycescerevisia
食品與發(fā)酵工業(yè) 2018年10期2018-11-14
- 非實驗期Jurkat細胞培養(yǎng)方法探討
是每隔1天行換液傳代[1]或者凍存。最近，細胞自噬引起關(guān)注。自噬是一種保守的細胞防御機制，在一定條件下細胞自噬能夠維持細胞的存活[2]。引起細胞自噬的因素很多，包括血清、葡萄糖、溫度和二氧化碳等。本文將探討室溫中維持Jurkat細胞非實驗期的培養(yǎng)，并從細胞自噬方面尋求依據(jù)。1 材料與方法1.1材料 白血病T淋巴細胞株Jurkat細胞為培養(yǎng)細胞，小牛血清購于杭州四季青生物工程材料有限公司；RPMI1640培養(yǎng)基 （含青霉素100U/mL，鏈霉素100μg/m
浙江實用醫(yī)學(xué) 2017年6期2018-01-30
- 中國乙型腦炎病毒株的毒力變異和減毒活疫苗的研究
同鼠齡以不同途徑傳代的毒力變異研究，結(jié)果顯示在鼠腦傳代過程中，皮下毒力隨著傳代次數(shù)的遞增而下降，降低的速度又與傳代用小鼠的鼠齡密切關(guān)系。即鼠齡越大，腦內(nèi)傳代后皮下毒力下降越快，下降幅度越大。如將A2株在7日齡、3周、5周和1年齡小鼠的腦內(nèi)傳代時，經(jīng)7日乳鼠腦內(nèi)傳代的病毒到145代時，才可見毒力明顯下降，在3周小鼠腦內(nèi)傳代的病毒，到113代后，皮下毒力已下降到4.5lg LD50，在5周鼠腦內(nèi)傳代時到113代后皮下毒力已下降至1.0～1.3lg LD50，而
中華實驗和臨床病毒學(xué)雜志 2018年5期2018-01-17
- IBDV超強毒株NJ09株在DF—1細胞上的增殖工藝
105個/mL）傳代培養(yǎng)，細胞生長36～48 h后按體積分數(shù)0.1%～0.2%接種IBDV NJ09株毒種，接毒后 36～48 h收毒；同時篩選出適宜IBDV NJ09株病毒增殖的MD611培養(yǎng)基及小牛血清，既可以滿足高滴度抗原增殖的生長需要，又降低了疫苗生產(chǎn)成本，形成了適用于規(guī)?；a(chǎn)的抗原接種、收獲、處理工藝技術(shù)指標，按上述工藝所增殖的IBDV NJ09株抗原病毒含量穩(wěn)定在108.0 TCID50/mL以上，可滿足含IBDV組分的系列滅活疫苗生產(chǎn)需要，
江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué) 2017年17期2017-11-15
- 豬瘟疫苗（傳代細胞源）生產(chǎn)工藝研究
69）豬瘟疫苗（傳代細胞源）生產(chǎn)工藝研究禮 穎，王春雪（哈藥集團生物疫苗有限公司，哈爾濱 150069）豬瘟是一種傳染性疾病，是目前危害我國養(yǎng)豬業(yè)發(fā)展的主要疫病之一。由豬瘟病毒引起，因其流行廣、發(fā)病率及死亡率高，豬瘟的防控工作也變得越來越艱巨。接種疫苗是控制豬瘟的主要途徑，試驗通過對豬瘟傳代細胞源的工藝優(yōu)化研究，以獲得較好的生產(chǎn)工藝技術(shù)參數(shù)，從而確保提高產(chǎn)品效價和穩(wěn)定性。ST細胞；消化；接毒，效價豬瘟由豬瘟病毒（CSFV）引起，流行廣，發(fā)病率及死亡率較高，
飼料博覽 2017年7期2017-08-29
- 傳代次數(shù)對人膠質(zhì)瘤U87細胞系生物學(xué)特性的影響
0515基礎(chǔ)研究傳代次數(shù)對人膠質(zhì)瘤U87細胞系生物學(xué)特性的影響王濟舟，曾 宇，宋 燁，漆松濤南方醫(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院，廣東 廣州 510515目的探索不同傳代次數(shù)對人膠質(zhì)瘤U87細胞系生物學(xué)特性的影響及其分子機制。方法以兩種不同傳代次數(shù)的U87（I）、U87（II）為研究對象，使用MTT細胞增殖實驗、Transwell小室遷移實驗及Boyden小室侵襲實驗分別檢測U87細胞的增殖、遷移和侵襲能力；使用Western Blot技術(shù)檢測U87（Ⅰ）及U87（Ⅱ）的
分子影像學(xué)雜志 2017年2期2017-07-03
- 豬瘟活疫苗(傳代細胞源)免疫產(chǎn)生期和免疫持續(xù)期試驗
3)豬瘟活疫苗(傳代細胞源)免疫產(chǎn)生期和免疫持續(xù)期試驗任向陽1，2, 吳文福1, 岑小清1，游啟有1, 劉秋燕1，賴月輝1，黃秋雪1(1.廣東永順生物制藥股份有限公司，廣東廣州511356 ； 2.廣州出入境檢驗檢疫局，廣東廣州510623)將三批豬瘟活疫苗(傳代細胞源)以單劑量分別接種仔豬進行免疫產(chǎn)生期試驗。在免疫同時以及免后1、2、3、4、5日連同對照組分別攻擊豬瘟強毒，攻毒后觀察16天，結(jié)果表明，豬瘟活疫苗(傳代細胞源)免后4日即可產(chǎn)生堅強的免疫保護
中國獸醫(yī)雜志 2017年4期2017-06-29
- 防治食用菌種老化“六步”
2.嚴格控制菌種傳代次數(shù)，減少機械損傷，保證菌種活力。3.在適當(dāng)?shù)臏囟缺４婢N：低溫型菌種如蘑菇、香菇等，在4℃有利于保存菌絲體活力；高溫型菌種如草菇，在16℃有利于保存菌絲體活力。4.避免在單一培養(yǎng)基中多次傳代；菌種不宜過長時間使用，超齡菌種會出現(xiàn)老化，而老化與退化是有機相連的，生活力弱的菌種容易出現(xiàn)退化。5.菌種要定期進行復(fù)壯，在適溫、合適酸堿度、充足氧量、無雜菌培養(yǎng)等條件下進行。6.每年進行孢子分離，以有性繁殖來發(fā)現(xiàn)優(yōu)良菌株，以組織分離來鞏固優(yōu)良菌株
農(nóng)家之友 2017年3期2017-03-27
- 微生物實驗室菌種復(fù)蘇傳代保存流程分析
實驗室菌種復(fù)蘇、傳代、保存體系是一件非常重要的事情，從而促進我國微生物實驗精確度提升，增強相關(guān)工程管理質(zhì)量的規(guī)范程度，為我國醫(yī)藥行業(yè)發(fā)展及生產(chǎn)質(zhì)量提高創(chuàng)造良好的條件。關(guān)鍵詞：菌種復(fù)蘇；傳代；保存微生物實驗是我國建筑醫(yī)藥研發(fā)及生產(chǎn)的重要環(huán)節(jié)，是確保我國醫(yī)藥研發(fā)行業(yè)發(fā)展的關(guān)鍵基礎(chǔ)。根據(jù)藥典中的標準，微生物實驗室對于新引進的培養(yǎng)基需要通過靈敏度測試后才能投入使用；另外，在對無菌實驗成果進行檢查時需要使用金黃色葡萄球菌作為對比參照，而在對日常灌裝環(huán)境質(zhì)量檢測時需要
科學(xué)與財富 2016年32期2017-03-04
- 豬藍耳病活疫苗生產(chǎn)工藝探索
細胞擴大培養(yǎng)時的傳代比例、培養(yǎng)液血清濃度、毒種繁殖時的接毒量、培養(yǎng)液體積、病毒原液收獲時間、半成品原液保存溫度及保存時間等幾方面參數(shù)對原液的病毒效價的影響，展開對比試驗，最終確定最佳參數(shù)，為高致病性豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗（HuN4-F112株）的大批量生產(chǎn)提供參考，不但要保障疫苗產(chǎn)品的質(zhì)量，更要大大降低疫苗的生產(chǎn)成本和生產(chǎn)人員的勞動強度。一、試驗方案（一）確定Marc-145細胞傳代比率試驗。將長滿單層的Marc-145細胞棄去營養(yǎng)液，用分散液分散后按1
獸醫(yī)導(dǎo)刊 2016年21期2016-11-24
- AKT-mTOR信號通路在大鼠椎間盤軟骨終板細胞自然退變中的意義
胞，建立體外自然傳代退變模型。隨機分為空白對照組(自然傳代第2代細胞)，自然退變組(自然傳代第5代細胞)、AKT-mTOR信號通路抑制組(含LY294002抑制劑培養(yǎng)基傳代至第5代)，AKT-mTOR信號通路激動組(含IGF-1激動劑培養(yǎng)基傳代至第5代)。倒置顯微鏡下觀察各組細胞形態(tài)；甲苯胺藍染色檢測細胞蛋白聚糖變化；RT-PCR檢測細胞中Ⅱ型膠原、蛋白多糖、SOX9以及AKT-mTOR信號通路中關(guān)鍵基因mTOR的表達情況；Western印跡檢測AKT、p
中國老年學(xué)雜志 2016年15期2016-10-26
- 豬瘟傳代細胞活疫苗、口蹄疫和高致病性豬藍耳病聯(lián)合免疫效果試驗研究
獸醫(yī)科學(xué)院）豬瘟傳代細胞活疫苗、口蹄疫和高致病性豬藍耳病聯(lián)合免疫效果試驗研究周建國1，張應(yīng)國1，楊余山1，段博芳1，李志明2，夏九仙2，楊品3，元正菊4（1.云南省動物疫病預(yù)防控制中心，云南昆明 650201；2昆明市西山區(qū)動物疫病預(yù)防控制中心；3.昆明市富民縣動物疫病預(yù)防控制中心；4.云南省畜牧獸醫(yī)科學(xué)院）為評估豬瘟傳代細胞活疫苗在豬瘟、高致病性豬藍耳病和口蹄疫三種疫苗同步兩點免疫新技術(shù)（即“321”免疫新技術(shù)）應(yīng)用中的免疫效果，特進行本試驗。1 材料與
中獸醫(yī)學(xué)雜志 2016年4期2016-09-20
- 針對代次較多的3T3-L1細胞誘導(dǎo)分化法的改良
; 誘導(dǎo)分化; 傳代次數(shù)小鼠前脂肪細胞3T3-L1在特定的誘導(dǎo)條件下，可以分化為成熟的脂肪細胞，因此，3T3-L1常被作為研究與脂肪相關(guān)疾病(肥胖、糖尿病等)的模型細胞，而誘導(dǎo)3T3-L1細胞分化為成熟脂肪細胞是開展上述研究的前提。本實驗室的3T3-L1已被傳代10次左右，用經(jīng)典方法誘導(dǎo)時也遇到了細胞卷邊和收縮嚴重的問題。結(jié)合上述報道的內(nèi)容，我們適當(dāng)改良了經(jīng)典誘導(dǎo)方法，該方法適用于多次傳代的3T3-L1的誘導(dǎo)。1 材料與方法1.1材料小鼠前脂肪細胞3T3-
實驗科學(xué)與技術(shù) 2016年4期2016-09-18
- 改良組織塊法培養(yǎng)C57BL/6小鼠胰腺星狀細胞
原代PSCs，并傳代。采用油紅O染色觀察細胞內(nèi)脂滴變化，采用細胞免疫法及蛋白質(zhì)印跡法檢測細胞α-SMA、Desmin表達。結(jié)果貼壁4 d的原代PSCs多呈橢圓形或星形，胞質(zhì)內(nèi)大量脂滴，表達α-SMA及Desmin蛋白的細胞少；傳代后細胞變大、偽足豐富，脂滴減少或消失，原代、傳代PSCs的α-SMA蛋白相對表達量分別為0.653±0.071、2.290±0.055，傳代細胞的表達顯著高于原代細胞(P組織培養(yǎng)技術(shù)；胰腺星形細胞；細胞分離；體外研究胰腺的進行性纖
中華胰腺病雜志 2016年1期2016-09-08
- 改良Frey氏液體培養(yǎng)基質(zhì)控菌株菌種代次與生長曲線研究
質(zhì)控；菌種代次；傳代支原體污染是生物制品常見的污染源，給科研、疫苗生產(chǎn)及生物制品產(chǎn)業(yè)帶來許多麻煩，《美國藥典》、《歐洲藥典》及《中國獸藥典》二〇一〇年版三部中均有使用培養(yǎng)法進行生物制品支原體檢查的專題論述[1-3]，《中國獸藥典》二〇一〇年版三部規(guī)定滑液支原體、豬鼻支原體分別為支原體檢驗用培養(yǎng)基支原體改良Frey氏培養(yǎng)基、支原體培養(yǎng)基質(zhì)控菌株[3]。通過測定不同培養(yǎng)時段的CCU，繪制出的MS生長曲線表明：其遲緩期為培養(yǎng)后6 h內(nèi)，對數(shù)期為6～36 h，穩(wěn)定
中國獸藥雜志 2016年1期2016-02-07
- 大腸桿菌對環(huán)丙沙星和恩諾沙星的敏感性恢復(fù)
復(fù)的差異以及細菌傳代、營養(yǎng)因素和耐藥菌比例對敏感性恢復(fù)的影響。1 材料與方法1.1 菌株、藥品和培養(yǎng)基菌株：耐藥大腸桿菌D600、野生型大腸桿菌D549（敏感菌株），由貴州大學(xué)動物科學(xué)學(xué)院基礎(chǔ)獸醫(yī)實驗室提供；質(zhì)控菌株為大腸埃希氏菌標準菌株ATCC25922，購自中國獸藥監(jiān)察所。藥品：環(huán)丙沙星、恩諾沙星標準品，購于上海盛思生化科技有限公司。培養(yǎng)基：LB肉湯、米勒－海頓肉湯（MHB），購于上海博微生物科技有限公司。1.2 藥物的最小抑菌濃度（MIC）測定參照美
貴州農(nóng)業(yè)科學(xué) 2015年6期2015-07-01
- 小鼠和奶牛乳腺上皮細胞的分離及培養(yǎng)特性比較
種細胞的體外培養(yǎng)傳代和凍存復(fù)蘇試驗，對比了MMECs和BMECs的分離、培養(yǎng)方法、生長特性、細胞傳代和復(fù)蘇性狀，為選擇及建立合適的MMECs和BMECs體外模型，以及開展乳腺相關(guān)功能研究提供參考。1 材料與方法1.1 材料1.1.1 實驗動物 妊娠后期SPF 昆明鼠購自湖北省疾病控制中心，泌乳中期荷斯坦奶牛乳腺組織采自湖北省某獸醫(yī)站。1.1.2 主要試劑及耗材 膠原酶（Collagenase）Ⅰ和Ⅱ為Solarbio公司產(chǎn)品；2.5g／L 胰蛋白酶－0.2
動物醫(yī)學(xué)進展 2015年12期2015-06-11
- 支原體培養(yǎng)基質(zhì)控菌株菌種代次與生長曲線研究
了不同代次與不同傳代方式豬鼻支原體生長情況。結(jié)果顯示：3%與10%濃度傳代，0～48 h內(nèi)，活菌濃度持續(xù)上升，菌液pH值持續(xù)下降，3%濃度傳代的支原體生長較均勻，更利于菌種生長；1～5代支原體活菌濃度無顯著差異；通過0.3 mL菌液加9.7 mL培養(yǎng)基傳代，20組菌液平均濃度為(24.4±5.7)×108CFU/mL，通過0.9 mL菌液加29.1 mL培養(yǎng)基傳代，菌液平均濃度為(7.2±2.1)×108CFU/mL，兩種濃度差異極顯著，前種傳代方式更有利
中國獸藥雜志 2015年8期2015-03-13
- 雞傳染性法氏囊病病毒弱毒株在雞體連續(xù)傳代后毒力增強的分子機理研究
SPF雞體內(nèi)連續(xù)傳代，發(fā)現(xiàn)弱毒株在雞體內(nèi)傳代后囊體比大幅度下降，表明IBDV弱毒株在SPF雞體內(nèi)連續(xù)傳代后毒力返強。為進一步研究弱毒株及其雞體傳代毒毒力變化與基因的關(guān)系，本試驗測定了基礎(chǔ)弱毒株及其雞體傳代毒的基因組編碼區(qū)序列，并對其進行比較分析，以期從分子水平上為該病毒毒力相關(guān)位點的研究提供依據(jù)。1 材料與方法1.1 毒株、菌株和載體 IBDV弱毒株A、弱毒株B由本實驗室保存；大腸桿菌JM109感受態(tài)細胞、pGEM－T載體均購于promega公司。21日齡
中國獸藥雜志 2014年5期2014-05-29
- 1型鴨甲肝病毒LY0801株VP1基因在鴨胚傳代中的變異規(guī)律研究
VP1基因在鴨胚傳代中的變異規(guī)律研究馬明杰，郭翠平，焦玉祥，呂佳泓，孫 振，張瑞華，陳君豪，謝之景，姜世金（山東農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院 山東省動物生物工程與疾病防治重點實驗室，泰安 271018）為了解1型鴨甲肝病毒（Duck hepatitis A virus type 1）VP1基因在鴨胚傳代中的變異規(guī)律，本研究將LY0801株DHAV-1在鴨胚體內(nèi)傳代至30代，分別對1～5、10、15、20、25、30代病毒進行VP1基因的克隆測序。各代次病毒分別以10
中國動物傳染病學(xué)報 2014年5期2014-04-13
- 金黃色葡萄菌球菌毒力基因在傳代過程中的穩(wěn)定性
菌球菌毒力基因在傳代過程中的穩(wěn)定性孫美英，何劍斌?（沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)畜牧獸醫(yī)學(xué)院，遼寧 沈陽 110866）為了解分離自奶牛乳房炎的金黃黃葡萄球菌（Staphylococcus aureus）毒力基因在傳代過程中的穩(wěn)定性，對傳代前后金黃色葡萄球菌的毒力和毒力基因進行測定和檢測。本研究采用急性毒性試驗的方法測定8株金黃色葡萄球菌原代、第5代、第10代、第15代、第20代及第25代的菌株對小鼠的半數(shù)致死量，通過聚合酶鏈式反應(yīng)（PCR）檢測原代、第5代、第10代、1
現(xiàn)代畜牧獸醫(yī) 2014年2期2014-03-07
- HP-PRRSV原始株在抗體壓下傳代突變株抗原性及致病力變化研究
原始株在抗體壓下傳代突變株抗原性及致病力變化研究范書金 （山東省聊城市動物醫(yī)院 252000） 肖延光 趙愛民 魏雅茹 王素紅（山東省聊城市畜牧站）為了比較高致病性藍耳病山東分離株SD0612原始株及其在抗體選擇壓下突變株在回歸豬體后的抗體動態(tài)變化，試驗中，將15頭健康豬分為5組，分別為SD0612原毒感染組、有抗體條件下第1次傳40代突變株F40感染組及有抗體條件下再次傳40代突變株e40感染組、無抗體條件下再次傳40代突變株a40感染組及陰性對照組，分
山東畜牧獸醫(yī) 2013年1期2013-11-26
- 流式細胞儀在檢測系膜細胞衰老特征中的應(yīng)用
約7 d后第1次傳代，傳代的細胞24 h全部貼壁，生長迅速，形態(tài)為梭形或不規(guī)則星形，3～4 d已匯合成片，純度極高，經(jīng)鑒定結(jié)蛋白(Desmin)陽性、抗Ⅷ因子抗體陰性，傳代，用于實驗的為第3、5、10 代。1.2.2 衰老相關(guān)β-半乳糖苷酶活性(SA-β-gal)染色 種于六孔板中的各組細胞，待細胞生長至80%匯合，用PBS液清洗3次，于室溫固定細胞5 min，PBS液清洗3次后，加上新配制的含1 mg/ml X-gal的 SA-β-gal染液，置 37℃
中國老年學(xué)雜志 2013年19期2013-09-12
- 羊睪丸原代細胞傳代試驗
）羊睪丸原代細胞傳代試驗張玉紅，何玉仙，井蓮娜，王玉紅（新疆天康畜牧生物技術(shù)股份有限公司，新疆 烏魯木齊830011）生產(chǎn)山羊痘活疫苗時，羊睪丸采集工作量大，易污染，費時費事，是否有辦法減少人員外出采集羊睪丸次數(shù)，值得摸索，本實驗將長成單層的羊睪丸細胞進行傳代，長成致密單層后進行接毒，收獲毒液，并對毒液及疫苗成品進行病毒含量測定，結(jié)果表明，羊睪丸細胞完全可以傳一代，細胞形態(tài)良好，毒液、疫苗成品毒價均達到規(guī)程要求，羊睪丸原代細胞傳代可以大大提高睪丸組織利用率
草食家畜 2013年3期2013-06-05
- 豬瘟活疫苗（傳代細胞源）豬瘟病的克星
出了豬瘟活疫苗（傳代細胞源），即一般所稱的“豬瘟傳代細胞苗”，簡稱豬瘟ST苗。豬瘟傳代細胞苗是一種優(yōu)質(zhì)高效的新型疫苗，它具有高度不易污染外源病毒而特別安全、高效、無應(yīng)激、價格合理等特點。研究人員預(yù)測豬瘟傳代苗將在未來豬瘟的預(yù)防控制方面起重要作用。近年來，我國不少地方豬瘟疫情呈現(xiàn)上升的趨勢。豬群豬瘟帶毒或隱性感染十分普遍，豬瘟流行呈現(xiàn)典型豬瘟和非典型豬瘟共存、混合感染或繼發(fā)感染頻繁出現(xiàn)的特點，母豬繁殖障礙和新生仔豬先天性感染等疫病嚴重威脅我國的養(yǎng)豬生產(chǎn)安全。
四川畜牧獸醫(yī) 2013年9期2013-04-08
- 腦癱患者骨髓間充質(zhì)干細胞體外培養(yǎng)特性分析
。1.3 原代及傳代細胞生長形態(tài)特征及細胞增長速率計算 原代細胞一般在分離后6～9 d傳代1次，P1以后于細胞生長達到覆蓋培養(yǎng)皿的60% ～80%后予1∶2或1∶3傳代。從第2代以后，每次傳代時行hMSCs鑒定:棄去上清，用PBS清洗2次，滴加0.05%的Trypsin-EDTA胰酶消化，顯微鏡下觀察細胞觸角收縮，細胞變成圓形后，添加培養(yǎng)基終止消化，制成(1～3)×106/mL的細胞懸液分裝于不同培養(yǎng)皿中，3～4 d根據(jù)培養(yǎng)基顏色換液。流式細胞儀檢測示CD
山東醫(yī)藥 2012年23期2012-08-05
- 保藏過程中乳酸菌發(fā)酵菌種的選擇
菌種在保藏期間的傳代實驗，通過對實驗數(shù)據(jù)的分析比較可得出，在沒有特殊要求的情況下，乳酸菌菌種的保藏最好是使用保加利亞乳桿菌和嗜熱鏈球菌的混合菌種，這樣可以大大降低乳酸菌菌種在保藏期內(nèi)的特性變化。保加利亞乳桿菌，嗜熱鏈球菌，傳代培養(yǎng)導(dǎo)致菌種活性退化的原因是多方面的，而且活性退化是絕對的，不可避免的。為了保持菌種優(yōu)良性狀的穩(wěn)定性，應(yīng)盡量減少或降低退化速度[1]，但是在實際的生產(chǎn)過程中，菌種的傳代是不可避免的。Tamine、馬鋼等認為嗜熱鏈球菌與保加利亞乳桿菌單
食品工業(yè)科技 2011年10期2011-10-25
- RT-SHIV感染中國恒河猴及體內(nèi)傳代
中國恒河猴及體內(nèi)傳代姚 南1，王 衛(wèi)1，叢 喆1，陳 霆1，金 光1，陶 真1，陳志偉2，魏 強1(1.中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)學(xué)實驗動物研究所，衛(wèi)生部人類疾病比較醫(yī)學(xué)重點實驗室，國家中醫(yī)藥管理局人類疾病動物模型三級實驗室，北京 100021;2.香港大學(xué)李嘉誠醫(yī)學(xué)院艾滋病研究所，香港 999077)目的 了解RT-SHIV感染中國恒河猴的感染特點，研究 RT-SHIV在中國恒河猴中傳代特點;建立RT-SHIV中國恒河猴動物模型，為評價HIV-1藥物有效性提供動物
中國比較醫(yī)學(xué)雜志 2011年4期2011-10-19
- SLE患者骨髓間充質(zhì)干細胞生物學(xué)特性的研究
0%融合時，則可傳代。用0.5%胰酶/乙二胺四乙酸(EDTA)(Gibco，美國)消化貼壁細胞，收集細胞并懸浮于完全培養(yǎng)液中，按104/cm2的密度接種于新的培養(yǎng)瓶中，置37℃、5%CO2飽和濕度細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，每3～4天更換1次培養(yǎng)液，約1周待細胞生長密度達90%左右時，進行再次傳代。1.3 MTT法檢測MSC的生長情況 MTT比色法檢測SLE患者第2代MSC的生長情況，作傳代細胞培養(yǎng)的生長曲線分析。1.4 流式細胞術(shù)檢測MSC表面分子的表達 細胞培養(yǎng)
中國實用醫(yī)藥 2011年29期2011-08-13
- 豬瘟活疫苗的田間免疫效果試驗
淋組織疫苗和ST傳代細胞苗。牛睪丸細胞苗由于使用原代細胞培養(yǎng)，批間差異較大；病毒培養(yǎng)液中病毒含量不高；再加上牛病毒性腹瀉病毒（BVDV）的污染，對疫苗的穩(wěn)定性和純凈性影響極大。兔脾淋組織疫苗是利用兔子組織來制作疫苗，由于兔的飼養(yǎng)量有限和兔對豬瘟病毒的敏感性也在下降，這些對兔脾淋組織疫苗的質(zhì)量和穩(wěn)定性都有較大的影響。ST傳代細胞疫苗，采用國際認證的同源傳代ST細胞培養(yǎng)，批間差異極小，穩(wěn)定性好，病毒培養(yǎng)液中病毒含量高，而且避免了其他病毒污染的威脅，相對目前其他
中國豬業(yè) 2010年11期2010-09-12
- 人脂肪組織來源干細胞生物學(xué)特性研究
積比1∶1）消化傳代.1.2 細胞形態(tài)學(xué)觀察使用倒置顯微鏡（IX70－131，OLYMPUS）觀察細胞生長，并對傳代貼壁生長在培養(yǎng)瓶中的脂肪干細胞的生長、純化情況及增殖進行連續(xù)觀察、攝像.1.3 細胞增殖動力學(xué)分析將第4代ADSC以不同密度6.25×104、1.25×105、2.50×105、5.00×105、1.00×106和2.00×106cells/m L種于96孔板內(nèi)，獲得細胞密度與光密度值的標準曲線.以5.00×103cells/m L的密度接種
大連理工大學(xué)學(xué)報 2010年5期2010-06-05
- 山羊原始生殖細胞分離與培養(yǎng)的影響因素
GCs進行培養(yǎng)和傳代，從而得到ESCs，將其在不同的條件下培養(yǎng)，初步分析了各種不同條件對培養(yǎng)效果的影響。1 材料與方法1.1 材料試劑：高糖DMEM、非必需氨基酸（non-essential amino acid）：Gibco 公司；LIF、SCF：Sigam 公司；胎牛血清（FBS）：杭州四季青公司；L-谷氨酰胺（L-glutamine）、胰蛋白酶（trypsinase）、牛血清白蛋白（BSA）、膠原酶（collagenase）：上海生工生物工程有限公司
中國草食動物科學(xué) 2010年5期2010-06-04