李秀成

（張家口市橋東區(qū)農(nóng)業(yè)委員會，河北張家口 075000）

豬瘟活疫苗的田間免疫效果試驗

李秀成

（張家口市橋東區(qū)農(nóng)業(yè)委員會，河北張家口 075000）

豬 瘟（Classical Swine Fever， CSF）是由黃病毒科瘟病毒屬的豬瘟病毒（Classical Swine Fever Virus， CSFV）引起的一種烈性傳染病，因其致死率高、危害嚴(yán)重，而受到各養(yǎng)豬國家的高度重視。目前該病主要通過疫苗來預(yù)防控制，因此，豬瘟疫苗質(zhì)量的好壞直接影響到豬場的生產(chǎn)。當(dāng)前，豬瘟疫苗主要有牛睪丸細(xì)胞苗、兔脾淋組織疫苗和ST傳代細(xì)胞苗。牛睪丸細(xì)胞苗由于使用原代細(xì)胞培養(yǎng)，批間差異較大；病毒培養(yǎng)液中病毒含量不高；再加上牛病毒性腹瀉病毒（BVDV）的污染，對疫苗的穩(wěn)定性和純凈性影響極大。兔脾淋組織疫苗是利用兔子組織來制作疫苗，由于兔的飼養(yǎng)量有限和兔對豬瘟病毒的敏感性也在下降，這些對兔脾淋組織疫苗的質(zhì)量和穩(wěn)定性都有較大的影響。ST傳代細(xì)胞疫苗，采用國際認(rèn)證的同源傳代ST細(xì)胞培養(yǎng)，批間差異極小，穩(wěn)定性好，病毒培養(yǎng)液中病毒含量高，而且避免了其他病毒污染的威脅，相對目前其他兩種豬瘟疫苗來說是一種新型優(yōu)質(zhì)的疫苗。本試驗主要對豬瘟活疫苗（傳代細(xì)胞源）的免疫效果進(jìn)行跟蹤調(diào)查，通過對所收集數(shù)據(jù)的對比分析，評估豬瘟活疫苗（傳代細(xì)胞源）的免疫效果。現(xiàn)將試驗情況報告如下。

1 試驗用疫苗與用量

1.1 豬瘟活疫苗（傳代細(xì)胞源）

由廣東永順生物制藥有限公司生產(chǎn)。

1.2 用法與用量

按照各試驗場制定的免疫程序，每頭豬接種豬瘟活疫苗（傳代細(xì)胞源）1頭份。

2 抗體檢測方法

采用IDEXX-ELISA試劑盒進(jìn)行檢測。

2.1 操作方法

按試劑盒的使用說明進(jìn)行。

2.2 判定標(biāo)準(zhǔn)

豬瘟抗體檢測試驗（阻斷ELISA）成立條件：陰性對照的平均OD450值應(yīng)大于0.50，陽性對照的阻斷率應(yīng)大于50%，試驗方成立有效。樣品阻斷率=（陰性對照平均 OD450值-樣品 OD450）/陰性對照平均OD450×100%

被檢樣品的阻斷率大于或等于40%，該樣品為豬瘟抗體陽性；樣品阻斷率小于或等于30%，該樣品為陰性（無豬瘟抗體存在）；樣品阻斷率在30～40%，該樣品為可疑。

3 試驗方法與結(jié)果

3.1 豬瘟活疫苗（傳代細(xì)胞源）與豬瘟活疫苗（細(xì)胞源）免疫效果的比較試驗

在河北省張家口市選擇一個飼養(yǎng)管理水平良好的種豬場，進(jìn)行不同疫苗免疫效果比較試驗，隨機(jī)選取150頭種豬，分成三組，每組50頭，用豬瘟活疫苗（傳代細(xì)胞源）1頭份/頭和國內(nèi)兩個廠家生產(chǎn)的豬瘟活疫苗（細(xì)胞源）5頭份/頭，各免疫一組，分別在免疫前和免疫后30天抽取部分免疫豬的血樣，分離血清，用美國IDEXX公司的豬瘟抗體檢測試劑盒檢測其抗體，結(jié)果見表1、圖1。結(jié)果顯示，在免疫豬瘟疫苗前，3組豬的抗體平均值和離散度都相差不大，免疫后30天兩個豬瘟活疫苗（細(xì)胞源）組的抗體水平與免疫前比較變化不大，而免疫豬瘟活疫苗（傳代細(xì)胞源）組在免疫后30天的抗體合格率則有明顯的提高 （從74%上升到85%），抗體平均值也有一定的提高（阻斷率從0.5上升到0.6），抗體水平較均一 （抗體離散度從37%下降到31%，減少了6%）。

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3.2 四個豬場免疫豬瘟活疫苗（傳代細(xì)胞源）試驗

在四個不同豬場免疫豬瘟活疫苗（傳代細(xì)胞源）后豬瘟抗體離散度和豬瘟抗體平均值分布情況，見圖2。

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3.3 豬瘟活疫苗（傳代細(xì)胞源）對仔豬（60天和90天各免一次）的免疫效果試驗

在河北省張家口市某原種豬場，按照該場原先免疫程序，其仔豬采用60天齡和90天齡各免疫豬瘟細(xì)胞活疫苗（傳代細(xì)胞源）1頭份/頭的免疫程序，為探討其豬瘟抗體水平的變化，分別在第一次注苗前（60天齡）、第二次注苗前 （90天齡）和第二次注苗后30天（120天齡）各抽取20頭豬只的血樣，分離血清，用美國IDEXX公司的豬瘟抗體檢測試劑盒檢測其抗體。結(jié)果見表2和圖3。

從表2中的結(jié)果可以看出，仔豬在首免后30天的抗體合格率從30%提高到45%，二免后30天抗體水平則有大幅度提高，抗體合格率達(dá)到了100%，而且90%可達(dá)到較理想的保護(hù)滴度。

圖3結(jié)果顯示，免疫豬瘟細(xì)胞活疫苗（傳代細(xì)胞源）后的豬瘟抗體水平呈逐漸上升的趨勢，而抗體離散度則隨著免疫次數(shù)和時間的增加而下降。

3.4 豬瘟活疫苗（傳代細(xì)胞源）對仔豬（20天和60天各免一次）的免疫效果試驗

在河北省張家口市選擇一個飼養(yǎng)管理水平良好的種豬場，隨機(jī)選取20頭肉豬，用豬瘟活疫苗（傳代細(xì)胞源）1頭份/頭，按照該場原先免疫程序（20天齡一免，60天齡二免）進(jìn)行免疫，分別在一免前、二免前和二免后25天抽取免疫豬的血樣，分離血清，用美國IDEXX公司的豬瘟抗體檢測試劑盒檢測其抗體，結(jié)果如表3和圖4。結(jié)果顯示，該試驗豬群，一免前仔豬豬瘟抗體陽性率為65%，其中阻斷率大于等于51的為55%，離散度高，母源抗體水平為偏高。第一次免疫后40天豬瘟抗體陽性率為75%，其中阻斷率大于等于51的為65%，離散度變小，豬群一免后抗體合格率呈上升趨勢。二免后，豬瘟抗體陽性率為95%，其中阻斷率大于等于51的為85%，同時抗體離散度也大大縮小。

3.5 不同免疫程序的豬瘟ST疫苗對豬的免疫效果比較試驗

選擇5頭經(jīng)CSFV與PRV凈化的健康母豬同天所產(chǎn)仔豬24頭進(jìn)行試驗，每窩仔豬隨機(jī)等分為2組，所有豬出生后在耳部作標(biāo)記。其中A組的免疫程序為20天一免，60天二免，免疫13頭；B組的免疫程序為35天一免，70天二免，免疫11頭，免疫劑量為1.0頭份/頭。A組于 20天齡 （一免前）、35天齡、60天齡（二免前）、70天齡、90天齡、110天齡各采一次血。B組于35天齡 （一免前）、50天齡、70天齡（二免前）、90天齡、110天齡各采一次血。分離血清，用美國IDEXX公司的豬瘟抗體檢測試劑盒檢測其抗體，結(jié)果如表4、圖5、6所示。

從表4中的結(jié)果可以看出，該場仔豬的豬瘟母源抗體維持時間不長，20天齡時合格率僅有27%，到35天齡合格率為0，在這種低母源抗體的情況下，采用兩種免疫程序的均可達(dá)到比較理想免疫效果，到110天齡豬瘟的抗體合格率都可達(dá)到100%。比較兩種免疫程序，在相同天齡下檢測，A組的合格率高于B組。

從圖5可以看出，在存在一定的母源抗體的豬群中免疫時，首次免疫后15天豬瘟的抗體水平會出現(xiàn)一定程度的下降，而且離散度也加大，但隨著免疫時間的延長和二次免疫，抗體水平逐漸升高，離散度也逐漸縮小。

從圖6可以看出，在母源抗體水平低（抗體合格率為 0）的情況下免疫，首免后15天的豬瘟抗體水平變化不大，在首免后35天，平均抗體水平達(dá)到了合格的標(biāo)準(zhǔn)；二次免疫后，抗體水平上升較快，離散度也逐漸縮小。

4 討論

從不同疫苗免疫效果比較試驗結(jié)果（見表1、圖1）可見，豬群免疫豬瘟活疫苗（傳代細(xì)胞源）后抗體平均值有所上升，同時抗體離散度下降，使整個豬群抗體能保持在一個比較均一的水平，很好的保護(hù)豬群免受豬瘟強(qiáng)毒的侵害。

從河北不同地區(qū)的四個種豬群免疫豬瘟活疫苗（傳代細(xì)胞源）后的抗體平均值和抗體離散度（見圖2）可見，免疫豬瘟細(xì)胞活疫苗（傳代細(xì)胞源）后豬瘟抗體平均值保持在阻斷率60%～80%，且抗體離散度較低。根據(jù)美國IDEXX公司的數(shù)據(jù)顯示，豬瘟抗體的阻斷率在60%～80%是最理想的滴度，說明豬瘟活疫苗（傳代細(xì)胞源）對種豬群有很好的免疫效果。

從仔豬免疫豬瘟活疫苗（傳代細(xì)胞源） （60天和90天各免一次）后的抗體平均值和抗體離散度（見表2、圖3）可見，仔豬在首免后40天的抗體合格率從30%提高到45%，二免后30天抗體水平則有大幅度提高，抗體合格率達(dá)到了100%，而且90%可達(dá)到較理想的保護(hù)滴度。而抗體離散度則隨著免疫次數(shù)和時間的增加而下降。

從仔豬免疫豬瘟活疫苗（傳代細(xì)胞源） （20天和60天各免一次）后的抗體平均值和抗體離散度（見表3、圖4）可見，在母源抗體較高（豬瘟抗體陽性率為65%）的情況下，一免后豬瘟抗體合格率呈上升趨勢，一免后40天豬瘟抗體陽性率為75%，其中阻斷率大于等于51的為65%，離散度變小；二免后豬瘟抗體平均值大幅度上升，豬瘟抗體陽性率為95%，其中阻斷率大于等于51的為85%，同時抗體離散度也有大幅度的縮小，是否提示豬瘟活疫苗（傳代細(xì)胞源）可突破較高母源抗體的干擾，使免疫豬達(dá)到理想的免疫效果。

比較20天和60天各免一次和35天和70天各免一次兩種免疫程序（結(jié)果見表4和圖5、6），在這種低母源抗體的情況下，采用兩種免疫程序均可達(dá)到比較理想免疫效果，到110天齡豬瘟的抗體合格率都可達(dá)到100%。

以上試驗結(jié)果顯示豬群在首次免疫豬瘟活疫苗 （傳代細(xì)胞源）后15～30天，豬瘟抗體水平提升并不顯著，但二次免疫后豬瘟抗體水平大幅度提高，離散度顯著降低，取得了理想的免疫效果。種豬和仔豬使用豬瘟活疫苗（傳代細(xì)胞源）后，能突破高豬瘟抗體干擾，在免后30天豬瘟抗體水平處于理想狀態(tài)。