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        嬰幼兒食品中克羅諾桿菌屬的分離鑒定及耐藥性分析

        2023-09-05 04:21:22翟平平占忠旭范宏偉劉中華朱應(yīng)飛
        現(xiàn)代食品 2023年13期
        關(guān)鍵詞:克羅諾阪崎桿菌屬

        ◎ 翟平平,占忠旭,范宏偉,章 潔,劉中華,朱應(yīng)飛

        (1.江西省檢驗檢測認證總院食品檢驗檢測研究院,江西 南昌 330000;2.武漢輕工大學 生命科學與技術(shù)學院,湖北 武漢 430023)

        克羅諾桿菌屬(Cronobacterspp.)由革蘭氏陰性食源性病原體組成,廣泛存在于嬰幼兒奶粉、米粉以及肉類、飲用水、蔬菜中,嬰幼兒是該菌感染的高危人群,致死率最高可達80%[1]。2017 年報道了某醫(yī)院檢出因克羅諾桿菌感染導致嬰幼兒腹瀉的病例[2],2018 年廣東省廣州市婦女兒童醫(yī)療中心報道3 例新生兒因克羅諾桿菌感染導致化膿性腦膜炎的病例[3],2022 年知名品牌雅培奶粉曝出因克羅諾桿菌污染導致3 名嬰幼兒感染的病例[4]。雖然大多數(shù)克羅諾桿菌分離株對常用抗菌劑敏感,但食品樣品中的一些分離株已報告有耐藥性[5]。在農(nóng)業(yè)中不適當和不合理使用抗菌劑增加了菌株的耐藥性,特別是多重耐藥[6],這已成為一個公共衛(wèi)生問題,耐藥菌的出現(xiàn)可能導致常規(guī)抗生素治療失敗,從而造成更大的死亡風險。

        為了解嬰幼兒食品中克羅諾桿菌屬的耐藥狀況,本實驗室對嬰幼兒食品樣品中克羅諾桿菌屬進行分離鑒定,并測定其耐藥性,為應(yīng)對嬰幼兒克羅諾桿菌屬感染疾病的發(fā)生提供有效的治療參考。

        1 材料與方法

        1.1 材料與設(shè)備

        實驗材料:嬰幼兒米粉。

        實驗試劑:緩沖蛋白胨水(Buffer Peptone Water,BPW)、改良月桂基硫酸鹽胰蛋白胨肉湯萬古霉素(Modified Lauryl Sulfate Tryptose Vancomycin Medium,mLST-Vm)、阪崎腸桿菌顯色培養(yǎng)基、胰蛋白胨大豆瓊脂(Trypticase Soy Aga,TSA)、阪崎腸桿菌生化鑒定試劑盒(北京陸橋)。多黏菌素B、萬古霉素、環(huán)丙沙星、呋喃妥因、氨芐西林、頭孢曲松、氯霉素、頭孢噻肟,上海源葉;MH 肉湯培養(yǎng)基(Mueller-Hinton Broth)、磷酸緩沖鹽溶液(Phosphate Buffer Saline,PBS),北京國藥。

        實驗儀器:電子比濁計,法國生物梅里埃公司;恒溫培養(yǎng)箱,上海智城分析儀器制造有限公司。

        1.2 試驗方法

        1.2.1 增菌培養(yǎng)

        無菌條件下準確稱取100 g待檢嬰幼兒米粉樣品,加到900 mL 緩沖蛋白胨水(BPW)中,放入36 ℃生化培養(yǎng)箱培養(yǎng)18 h,進行前增菌,取1 mL 上述前增菌液,接種到mLST-Vm 管中,放入44 ℃生化培養(yǎng)箱,培養(yǎng)24 h。

        1.2.2 平板分離

        無菌條件下取1 環(huán)mLST-Vm 增菌液,接種阪崎腸桿菌顯色平板,放入36 ℃生化培養(yǎng)箱,培養(yǎng)24 h,觀察結(jié)果,挑取可疑菌落接種TSA 瓊脂平板,25 ℃培養(yǎng)48 h[7]。

        1.2.3 生化鑒定

        挑取純化后的可疑單菌落,制作0.5 個麥氏濁度菌懸液,按照阪崎腸桿菌生化鑒定試劑盒操作說明進行鑒定,將菌懸液滴加到相應(yīng)的生化反應(yīng)孔,置于36 ℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)24 h,觀察結(jié)果。

        1.2.4 藥物敏感性試驗

        藥敏試驗依據(jù)美國臨床與實驗室標準化協(xié)會(CLSI2022 版)標準規(guī)定進行操作,所用抗生素包括氯霉素(苯丙醇類),呋喃妥因(硝基呋喃類),氨芐西林(青霉素類),多黏菌素B(多肽類),環(huán)丙沙星(氟喹諾酮類),頭孢噻肟、頭孢曲松(頭孢類)[8]。

        2 結(jié)果與分析

        2.1 平板分離

        阪崎腸桿菌顯色平板上長出藍綠色、邊緣光滑、形態(tài)較小的典型菌落,TSA 瓊脂平板上菌落顏色呈現(xiàn)黃色。平板結(jié)果見圖1。

        圖1 平板分離菌落形態(tài)圖

        2.2 生化鑒定

        挑取阪崎腸桿菌顯色平板上的典型菌落,接種TSA 瓊脂平板,進行阪崎腸桿菌生化試劑盒鑒定。檢驗結(jié)果為產(chǎn)生黃色素,氧化酶實驗陰性,L-賴氨酸脫羧酶陰性,L-鳥氨酸脫羧酶陽性,L-精氨酸雙水解酶陽性,檸檬酸水解陽性,D-山梨醇陽性,L-鼠李糖陽性,D-蜜二糖陽性,苦杏仁苷陰性。根據(jù)《食品安全國家標準 食品微生物學檢驗 克羅諾桿菌屬(阪崎腸桿菌)檢驗》(GB 4789.40 2016)標準規(guī)定,結(jié)果判定為陽性。結(jié)果見圖2。

        圖2 克羅諾桿菌屬生化鑒定結(jié)果圖

        2.3 耐藥性分析

        藥敏試驗結(jié)果顯示,43 株阪崎克羅諾桿菌對氯霉素的耐藥率為51.16%,對氨芐西林和呋喃妥因的耐藥率均為4.65%,對頭孢曲松和頭孢噻肟的耐藥率均為2.33%,對環(huán)丙沙星及多黏菌素B 均敏感。結(jié)果見表1。本研究中用到的抗生素MIC 折點及ATCC25922 質(zhì)控范圍見表2。

        表1 43 株克羅諾桿菌耐藥結(jié)果表

        表2 抗生素判定標準表

        3 結(jié)論與討論

        克羅諾桿菌屬感染發(fā)病率較低,但會導致較高的死亡率,國內(nèi)外特別重視嬰幼兒食品中克羅諾桿菌屬的污染。FAO/WHO 把阪崎腸桿菌列為嬰兒配方奶粉中的A 類致病菌[9]。

        本項目藥敏試驗結(jié)果顯示,43 株克羅諾桿菌分離菌株中有22 株耐藥,耐藥率為51.16%,早期報道克羅諾桿菌對各種抗生素敏感,但自1987 年以來,有關(guān)該菌耐藥性的報道不斷增加[10]。本研究43 株克羅諾桿菌對氯霉素的耐藥率為51.16%,對氨芐西林和呋喃妥因的耐藥率均為4.65%,對頭孢噻肟和頭孢曲松的耐藥率均為2.33%。氯霉素類抗生素抗菌譜廣,吸收快,體內(nèi)分布廣泛,因而使用廣泛,但其耐藥性也倍受重視。

        嬰幼兒食用嬰幼兒食品存在克羅諾桿菌屬感染的潛在風險,克羅諾桿菌屬的耐藥性要引起重視。相關(guān)監(jiān)管部門、生產(chǎn)企業(yè)需對嬰幼兒食品生產(chǎn)、運輸?shù)雀鱾€環(huán)節(jié)衛(wèi)生進行嚴格監(jiān)管,防止嬰幼兒食品受到致病性細菌的污染;臨床上一旦發(fā)現(xiàn)感染克羅諾桿菌屬的病例,應(yīng)分析其藥敏性,規(guī)范治療,避免抗生素的濫用,防止出現(xiàn)超級耐藥菌株。

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