李建軍，陳海泉

(1.濮陽(yáng)市油田總醫(yī)院 醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)科，河南 濮陽(yáng) 457001；2.菏澤市立醫(yī)院 檢驗(yàn)科，山東 菏澤 274000)

潰瘍性結(jié)腸炎(ulcerative colitis，UC)常累及直腸與結(jié)腸，呈反復(fù)性發(fā)作，患者可出現(xiàn)間歇性腹瀉、里急后重等癥狀，嚴(yán)重影響生活質(zhì)量，同時(shí)UC具有治療難度大、復(fù)發(fā)率高的特點(diǎn)。有研究表明，腸道菌群紊亂是誘發(fā)UC的重要原因[1]。當(dāng)腸道出現(xiàn)炎癥時(shí)會(huì)打破菌群分布的平衡狀態(tài)，進(jìn)而抑制機(jī)體免疫功能，可引發(fā)UC[1-2]。腸道菌群改變可能是UC發(fā)病的始動(dòng)及持續(xù)因素[3]。因此評(píng)估UC患者腸道菌群分布特征對(duì)患者治療及改善預(yù)后有重要意義。基于此，本研究分析UC患者腸道菌群分布特征分析。現(xiàn)報(bào)告如下。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象回顧性收集2018年12月至2020年12月濮陽(yáng)市油田總醫(yī)院收治的100例UC患者的臨床資料納入A組；另收集同期體檢的100例健康體檢者的臨床資料納入B組。納入標(biāo)準(zhǔn)：UC符合相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)[4]；心、肝、腎功能正常；影像資料及臨床資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并其他胃腸疾病；不依從用藥；入組前1個(gè)月內(nèi)使用過(guò)菌群制劑、糖皮質(zhì)激素等藥物；合并其他腸道急慢性炎癥疾病。

1.2 菌群分析在清潔環(huán)境中采集入組患者10 g新鮮糞便放于厭氧罐中送往采樣室。選取雙歧桿菌屬、乳桿菌屬、擬桿菌屬、梭菌屬、腸球菌屬、大腸埃希菌屬為腸道代表性菌群。準(zhǔn)備各菌型相應(yīng)的選擇性培養(yǎng)基(海博生物技術(shù)有限公司)，以日本光岡知足法測(cè)定菌屬數(shù)量。具體操作：取0.5 g新鮮糞便標(biāo)本存放于無(wú)菌安瓿瓶中，均在瓶中放入4.5 mL稀釋液及3粒玻璃珠，使用南精邁儀器儀表有限公司提供的XH-E型漩渦混合器震蕩1 min，轉(zhuǎn)速為300 r·min-1，另準(zhǔn)備7只無(wú)菌安瓿瓶，均加入1.8 mL稀釋液，從首只安瓿瓶中取0.2 mL混勻液到第2個(gè)安瓿瓶中震蕩混勻，依次以10-2、10-3至10-8倍數(shù)進(jìn)行稀釋。準(zhǔn)備好培養(yǎng)基，以標(biāo)準(zhǔn)滴管(47滴·L-1)由高稀釋度往低稀釋度滴種，需氧菌平板底面往上倒置在37 ℃恒溫培養(yǎng)箱SHX150Ⅲ(上海樹(shù)立儀器儀表有限公司)24 h后觀察結(jié)果，厭氧菌平板倒置在37 ℃恒溫培養(yǎng)箱24 h后觀察結(jié)果。

1.3 基線資料查閱UC患者臨床資料明確患者性別(男、女)、年齡(≥60歲、<60歲)、病變范圍(左/右半結(jié)腸、直腸)、疾病分期(活動(dòng)期、緩解期)、病情嚴(yán)重程度[輕度(大便次數(shù)<4次·d-1，體溫<37.5 ℃，脈搏<90次·min-1，血紅蛋白>11.5 g·dL-1，紅細(xì)胞沉降率高于正常值，但<20 mm·h-1，C反應(yīng)蛋白水平正常)、中度(大便次數(shù)4～6次·d-1，體溫≤37.8 ℃，脈搏<90次·min-1，血紅蛋白≥10.5 g·dL-1，20 mm·h-1<紅細(xì)胞沉降率≤30 mm·h-1，C反應(yīng)蛋白水平高于正常值，但≤30 mg·L-1)、重度(大便次數(shù)>6次·d-1，體溫>37.8 ℃，脈搏>90次·min-1，血紅蛋白<10.5 g·dL-1，紅細(xì)胞沉降率>30 mm·h-1，C反應(yīng)蛋白>30 mg·L-1)]。

1.4 觀察指標(biāo)(1)腸道菌群測(cè)定結(jié)果：明確所有入組者的乳桿菌屬、雙歧桿菌屬、梭菌屬、腸球菌屬、擬桿菌屬、大腸埃希菌屬數(shù)量。(2)不同特征UC患者腸道菌群分布情況：比較不同性別、年齡、病變范圍、疾病分期、病情嚴(yán)重程度UC患者的腸道菌群數(shù)量。

2 結(jié)果

2.1 腸道菌群測(cè)定結(jié)果A組雙歧桿菌屬、乳桿菌屬、擬桿菌屬、梭菌屬數(shù)量均較B組低，腸球菌屬、大腸埃希菌屬數(shù)量均較B組高(P<0.05)。見(jiàn)表1。

表1 所有入組者腸道菌群測(cè)定結(jié)果比較

2.2 不同特征UC患者腸道菌群分布情況不同性別、年齡、病變范圍UC患者腸道菌群分布比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見(jiàn)表2～4。活動(dòng)期UC患者的雙歧桿菌屬、乳桿菌屬、擬桿菌屬、梭菌屬數(shù)量均低于緩解期組，腸球菌屬及大腸埃希菌屬數(shù)量均高于緩解期組(P<0.05)，見(jiàn)表5。

表2 不同性別患者腸道菌群測(cè)定結(jié)果比較

表3 不同年齡患者腸道菌群分布情況比較

表4 不同病變范圍患者腸道菌群分布情況比較

表5 不同分期患者腸道菌群分布情況比較

2.3 不同病情嚴(yán)重程度UC患者腸道菌群分布情況重度UC患者雙歧桿菌屬、乳桿菌屬、擬桿菌屬、梭菌屬最低，中度UC患者次之，輕度UC患者最高，重度UC患者腸球菌屬、大腸埃希菌屬最高，中度UC患者次之，輕度UC患者最低(P<0.05)。見(jiàn)表6。

表6 不同病情嚴(yán)重程度患者腸道菌群分布情況比較

2.4 UC患者腸道菌群分布情況對(duì)病情嚴(yán)重程度的影響將UC患者病情嚴(yán)重程度作為因變量(輕度=1，中度=2，重度=3)，將雙歧桿菌屬、乳桿菌屬、擬桿菌屬、梭菌屬、腸球菌屬、大腸埃希菌屬分布情況作為自變量(均為連續(xù)變量)，以輕度UC患者作為參照，行有序回歸分析。結(jié)果顯示，雙歧桿菌屬、乳桿菌屬、擬桿菌屬、梭菌屬高水平是病情嚴(yán)重程度的保護(hù)因素(OR<1，P<0.05)；腸球菌屬、大腸埃希菌屬高水平是病情嚴(yán)重程度的危險(xiǎn)因素(OR>1，P<0.05)。見(jiàn)表7。

表7 UC患者腸道菌群分布情況對(duì)病情嚴(yán)重程度的影響

3 討論

健康機(jī)體腸道中有600種細(xì)菌菌落存在，且每種菌落的數(shù)量眾多，正常情況下腸道菌群保持相對(duì)穩(wěn)定，但如出現(xiàn)失調(diào)，則可誘發(fā)多種消化道疾病，在UC研究過(guò)程中，人們?cè)絹?lái)越注意到優(yōu)勢(shì)腸道菌群分布情況的改變?cè)赨C的發(fā)生發(fā)展中的重要作用[5-6]。

腸道固有菌主要分為生理性細(xì)菌及條件致病菌，生理性細(xì)菌也叫做益生菌，主要包括雙歧桿菌、乳桿菌、擬桿菌等專性厭氧菌；條件致病菌以兼性需氧菌為主，如腸桿菌、腸球菌。本研究結(jié)果顯示，A組乳桿菌屬、擬桿菌屬、雙歧桿菌屬、梭菌屬數(shù)量均較B組低，腸球菌屬、大腸埃希菌屬數(shù)量均較B組高；且活動(dòng)期UC患者的雙歧桿菌屬、乳桿菌屬、擬桿菌屬、梭菌屬數(shù)量均低于緩解期UC患者，腸球菌屬及大腸埃希菌屬數(shù)量均高于緩解期UC患者。表明活動(dòng)期UC患者的雙歧桿菌屬、乳桿菌屬、擬桿菌屬、梭菌屬數(shù)量遠(yuǎn)低于緩解期UC患者及健康體檢者，活動(dòng)期UC患者的腸球菌屬及大腸埃希菌屬數(shù)量遠(yuǎn)高于緩解期UC患者及健康體檢者。由此可見(jiàn)UC患者腸道菌群分布較為紊亂，較緩解期UC患者，活動(dòng)期UC患者腸道菌群失衡更明顯。行有序回歸分析結(jié)果顯示，隨雙歧桿菌屬、乳桿菌屬、擬桿菌屬降低，腸球菌屬、大腸埃希菌屬升高，患者病情越嚴(yán)重。分析其原因?yàn)?，雙歧桿菌屬、乳桿菌屬、擬桿菌屬、梭菌屬均是對(duì)人體有益無(wú)害的益生菌，能發(fā)揮促進(jìn)營(yíng)養(yǎng)吸收、合成大量維生素、提高機(jī)體免疫力尤其是腸道免疫力、減少腸道吸收過(guò)量類毒素等作用[7-8]。腸球菌屬及大腸埃希菌屬為條件致病菌，在正常情況下不會(huì)損害人體健康，一旦此類細(xì)菌過(guò)度增殖或由腸道轉(zhuǎn)移到身體其他部位，則可能引發(fā)相應(yīng)的腸道疾病[9-10]。當(dāng)腸道內(nèi)益生菌數(shù)量降低且條件致病菌數(shù)量上升時(shí)可破壞腸道原有菌群的動(dòng)態(tài)平衡，會(huì)使得腸上皮細(xì)胞對(duì)菌群信號(hào)的反應(yīng)功能紊亂而引起患者免疫應(yīng)答失調(diào)及腸黏膜屏障功能減退，會(huì)加劇腸黏膜損害，增加腸道通透性而不斷損傷腸壁微循環(huán)系統(tǒng)，進(jìn)而引起UC[11]。益生菌與條件致病菌菌群失衡狀態(tài)越嚴(yán)重，患者的免疫功能下降越明顯，腸壁微循環(huán)系統(tǒng)受損越嚴(yán)重，引起以激肽系統(tǒng)為中心的繼發(fā)性腸道黏膜炎癥反應(yīng)，不斷損害腸道黏膜正常生理功能而導(dǎo)致疾病不斷進(jìn)展，長(zhǎng)期處于活動(dòng)期狀態(tài)[12]。本研究也存在一些不足：第一，未對(duì)患者病情分期進(jìn)行限制，疾病分期可能也會(huì)對(duì)患者病情嚴(yán)重程度造成影響；第二，本研究屬于單中心研究，納入患者較少，可能對(duì)研究?jī)r(jià)值造成影響。

綜上所述，UC患者腸道菌群分布呈失衡狀態(tài)，以乳桿菌屬、雙歧桿菌屬、擬桿菌屬、梭菌屬數(shù)量下降及腸球菌屬與大腸埃希菌屬數(shù)量升高為主要分布特征，同時(shí)腸道菌群分布情況與UC患者病情嚴(yán)重程度密切相關(guān)。