李祖洪

摘 要：目的：探討酶抑制法在蔬菜農(nóng)藥殘留檢測(cè)中的作用。方法：完成樣品與對(duì)照溶液的制備后，采用乙酰膽堿酯酶對(duì)樣品與對(duì)照溶液內(nèi)殘留的有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果：白菜樣品中對(duì)酶抑制率為71.2%;番茄樣品對(duì)酶抑制率為89.2%;甘蘭樣品對(duì)酶抑制率為90.1%。根據(jù)酶抑制程度，表明3種樣品中皆含有一定的農(nóng)藥殘留。結(jié)論：運(yùn)用酶抑制法能夠快速測(cè)定蔬菜農(nóng)藥殘留含量，但為了保障測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確性，應(yīng)結(jié)合定性定量方式一同進(jìn)行檢測(cè)。

關(guān)鍵詞：蔬菜農(nóng)藥殘留;酶抑制法;應(yīng)用

近年來(lái)，頻頻發(fā)生的食品質(zhì)量安全問(wèn)題，使得公民安全消費(fèi)意識(shí)逐步提升，對(duì)蔬菜農(nóng)藥殘留予以了更多的關(guān)注。為促進(jìn)農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全水平的提升，保障消費(fèi)者健康，相關(guān)職能部門應(yīng)當(dāng)對(duì)蔬菜生產(chǎn)實(shí)施全過(guò)程農(nóng)藥管控。酶抑制法無(wú)需耗費(fèi)太多成本，具備較高的準(zhǔn)確性與靈敏度，在基層市場(chǎng)監(jiān)管部門農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)中十分適用。

1 實(shí)驗(yàn)方法

1.1 儀器與試劑

農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)儀，比色瓶、移液槍、樣品超聲提取儀等。K2HPO4（無(wú)水磷酸氫二鉀）;KH2PO4（磷酸二氫鉀）;C14H6N2O8S2（二硫代二硝基苯甲酸）;NaHCO3（碳酸氫鈉）;C7H16SNI（硫代乙酰膽堿）等;蒸餾水;葉菜類蔬菜、瓜果、塊根（莖）樣品。

1.2 試劑配制

緩沖液：取KH2PO4、K2HPO4各3.23 g、11.90 g，用蒸餾水（1 000.0 mL）溶解。

顯色劑：取NaHCO3、C14H6N2O8S2各15.6 mg、160.00 g，用上述緩沖液（20.0 mL）溶解，轉(zhuǎn)入冰箱（4 ℃）。

底物：取硫代乙酰膽堿25.0 mg，用蒸餾水（3.0 mL）溶解，轉(zhuǎn)入冰箱（4 ℃）。

乙酰膽堿酯酶：以酶活性為根據(jù)，緩沖液溶解，控制3 min吸光度值變化不低于0.3，搖勻后冰箱中保存（4 ℃）。

2 檢測(cè)步驟

2.1 樣品溶液制備

擦掉蔬菜樣品表面泥土，取塊根（莖）、瓜果類蔬菜取2.00 g表皮，葉菜類蔬菜剪成大小為1cm2的碎片后取2.00 g，加入到含有10.0 mL緩沖液的提取瓶中，然后轉(zhuǎn)至多用可調(diào)速振蕩器內(nèi)，震蕩提取2 min，靜置3～5 min[1]。

浸提液顏色較淺或無(wú)色時(shí)，轉(zhuǎn)入離心管備用，待測(cè);若顏色渾濁，吸取0.5mL至離心管并離心，上層液清澈時(shí)結(jié)束離心，做樣液，待測(cè)。

浸提液存在嚴(yán)重色素干擾時(shí)，可轉(zhuǎn)至另一提取瓶?jī)?nèi)，根據(jù)顏色深淺加入活性炭0.10～0.50 g，轉(zhuǎn)入多用可調(diào)速振蕩器，振蕩提取5～6 min后，靜置5～10 min，吸取0.5 mL至離心管，用微型離心機(jī)離心至上層液清澈，做樣液備用（若有活性炭殘留于樣液中，需再次離心處理，保障樣液內(nèi)無(wú)活性炭殘留）。

2.2 對(duì)照溶液制備

緩沖液作對(duì)照液，待測(cè)。

2.3 測(cè)試

樣品溶液測(cè)試：試管內(nèi)移入

2.5 mL樣品提取液，并加入0.1 mL酶液、顯色劑，搖勻后在37 ℃下靜置15 min。加入底物0.1 mL，搖勻，當(dāng)發(fā)生顯色反應(yīng)后，向儀器比色池轉(zhuǎn)移，記錄樣品溶液持續(xù)反應(yīng)3 min后的吸光度ΔAt。

對(duì)照溶液測(cè)試：試管內(nèi)移入

2.5 mL對(duì)照溶液，并依次加入0.1 mL酶液、顯色劑，其他操作同樣品溶液的測(cè)試，記錄對(duì)照溶液持續(xù)反應(yīng)3 min后吸光度。

測(cè)試操作程序：在V型槽內(nèi)完成顯色劑、底物及酶試劑等的移取，移取裝置選擇多通道移液器。用移液器分別將20 μL酶加入測(cè)試微孔板內(nèi)，后加入250 μL樣品溶液或?qū)φ杖芤骸Ｎ⒖装遛D(zhuǎn)入儀器，開(kāi)啟振板將酶和樣品混勻[2]。完成振板后，酶試劑與樣品溶液或?qū)φ杖芤夯旌弦撼掷m(xù)反應(yīng)10 min，將10 μL顯色劑、底物分別加入測(cè)試微孔板內(nèi)，隨后轉(zhuǎn)入儀器測(cè)量。根據(jù)面板顯示開(kāi)始測(cè)量，第一列會(huì)被儀器自動(dòng)視作對(duì)照溶液，樣品溶液則為其他行。完成測(cè)量后，儀器將當(dāng)前對(duì)照值自動(dòng)保存，后續(xù)樣品測(cè)量中無(wú)需再次測(cè)量對(duì)照。各通道樣品抑制率的計(jì)算，參照各自對(duì)照液。各通道對(duì)照測(cè)試完成后，微孔板所有孔皆可視作樣品測(cè)量，轉(zhuǎn)至儀器后，根據(jù)面板顯示開(kāi)始測(cè)量。

2.4 結(jié)果

以酶被抑制程度表示結(jié)果。酶抑制率在50%以下，說(shuō)明蔬菜健康，農(nóng)藥殘留量極少;酶抑制率在50%及以上，說(shuō)明蔬菜內(nèi)有機(jī)磷等農(nóng)藥含量較高，重復(fù)檢驗(yàn)兩次后確認(rèn)結(jié)果為陽(yáng)性。

此次檢測(cè)中，白菜樣品對(duì)酶的抑制率為71.2%;番茄樣品對(duì)酶的抑制率為89.2%;甘蘭樣品對(duì)酶的抑制率為90.1%。表明3種樣品中皆含有一定的農(nóng)藥殘留。

3 討論

運(yùn)用酶抑制法快速測(cè)定蔬菜農(nóng)藥殘留含量，能及時(shí)了解蔬菜質(zhì)量及安全性，然而該方法僅限于含有有機(jī)磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥的蔬菜，且僅支持粗篩，檢測(cè)結(jié)果與國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)農(nóng)藥最大殘留限量要求值不符合，獲取的檢測(cè)數(shù)據(jù)準(zhǔn)確性也有一定不足，需結(jié)合定性定量方式一同檢測(cè)。

參考文獻(xiàn)

[1]丁澤鋒.基于酶抑制法的蔬菜農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)研究[J].農(nóng)業(yè)技術(shù)與裝備，2019（9）：28-29，31.

[2]周琴.酶抑制法在蔬菜農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)中的應(yīng)用[J].河南農(nóng)業(yè)，2017（32）：53-54.