林炳柱 劉小燕
[摘要]目的 探討化學(xué)發(fā)光免疫測定法在梅毒螺旋體抗體檢測中所起的作用。 方法 選取160例梅毒患者及135例非梅毒患者的血清,分別采用化學(xué)發(fā)光免疫測定法、RPR法、TPPA法分別檢測血清中的梅毒螺旋體抗體。結(jié)果 對照組的敏感性分別為97.0%、76.3%和98.3%。RPR法的敏感性與特異性明顯低于化學(xué)發(fā)光免疫測定法、TPPA法,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);化學(xué)發(fā)光免疫測定法和TPPA法相比,敏感性和特異性差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)論 梅毒的化學(xué)發(fā)光免疫測定法的敏感性和特異性較高,是一種方便、準(zhǔn)確的檢測方法。
[關(guān)鍵詞] 梅毒;作用;化學(xué)發(fā)光免疫測定法
[中圖分類號] R446.6 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A [文章編號] 1674-0742(2014)02(b)-0010-03
梅毒是感染梅毒螺旋體后引起的一種易傳染的性傳播疾病[1]。梅毒是一種易傳染、危害性大的人類性傳播疾病[2-4]。血清學(xué)檢測梅毒螺旋體抗體的方法已經(jīng)被我國衛(wèi)生部列為手術(shù)前、孕婦產(chǎn)前的必檢項(xiàng)目,血清學(xué)檢測梅毒螺旋體抗體的方法是診斷梅毒的重要依據(jù)之一[5-6]。因此,選擇特異性強(qiáng)、敏感性高的實(shí)驗(yàn)方法非常有助于梅毒的診治。為探討化學(xué)發(fā)光免疫測定法在梅毒螺旋體抗體檢測中所起的作用,該研究選擇該院臨床中心2012—2013年收治的160例梅毒患者為研究對象,現(xiàn)報道如下。
1 資料與方法
1.1 一般資料
選擇該院臨床中心的160例梅毒患者血清與135例非梅毒患者的血清為實(shí)驗(yàn)標(biāo)本,梅毒患者血清標(biāo)本通過真空促凝管采集靜血漿3 mL,將血清分離,保存在4~8 ℃的冰箱,待檢測[7-9]。
1.2 儀器與試劑
CLIA試劑盒、TPPA試劑盒均為日本富士瑞必歐生物技術(shù)有限公司,RPR試劑盒為上海榮盛生物科技有限公司。
1.3 方法
將160份梅毒患者血清與135例非梅毒患者血清標(biāo)本分別同時進(jìn)行CLIA和TPPA檢測,比較兩種方法的不同之處。
將160份梅毒患者血清與135例非梅毒患者血清,進(jìn)行CLIA檢測結(jié)果顯示為陽性時,再進(jìn)行TPPA和RPR檢測,探討TPPA陽性結(jié)果的S/CO值與TPPA、RPR之間有何聯(lián)系。所有進(jìn)行檢測的試劑均達(dá)到實(shí)驗(yàn)要求,且操作均按照操作說明書操作[10]。
1.4 統(tǒng)計(jì)方法
采用SPSS14.2軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,計(jì)數(shù)資料進(jìn)行χ2檢驗(yàn)。
2 結(jié)果
①160份梅毒患者血清中,CLIA法檢測陽性151份,TPPA陽性130份,以回歸分析結(jié)果為參考,CLIA法的陽性率為93.75%,TPPA法的陽性率為82.50%,兩種方法差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=3.8,P<0.05)。
②135份非梅毒患者血清中,CLIA法檢測陽性率為2.28%,TPPA法檢測陽性率為9.28%,RPR陽性法檢測陽性率為10.37%。CLIA的S/CO值在2~11有3份,其中TTPA陽性12份,RPR陽性14份;738份,TPPA均為陽性,RPR陽性7份。CLIA法陽性S/CO值與TPPA,RPR法所測結(jié)果關(guān)系,見表1。
③CLIA與TPPA結(jié)果不一致的21份,經(jīng)RPR法檢測,陽性4份,1份含TP31、TP47條帶,3份含TP32、TP47條帶,1份 含TP17、TP32、TP47條 帶,檢測結(jié)果未顯示出的4份,為TP45陽性。14份RPR法檢測陰性的標(biāo)本,通過CLIA法驗(yàn)證也均為陰性 [11]。
3 討論
梅毒對人體的危害多種多樣,越早對梅毒的確診,有利于患者得到全面有效的治療,有利于患者疾病的快速康復(fù)。梅毒臨床確診按照梅毒病毒的特異性抗體的檢測和患者的臨床癥狀作為判斷依據(jù)[12]。TP-ELISA適合數(shù)量較大的操作,但測量結(jié)果經(jīng)常遇到假陽性的情況[13]。CLIA技術(shù)是ELISA技術(shù)的更新技術(shù),以敏感的化學(xué)發(fā)光底物代替原始的底物,其特點(diǎn)是信號模式可被酶增強(qiáng),而且發(fā)光信號時間被保持和拉長了,一方面保留了發(fā)光免疫分析超高的敏感性,另一方面也避免了傳統(tǒng)光信號持續(xù)時間較短等缺點(diǎn)。過氧化物酶催化魯米諾發(fā)光和堿性磷酸酶催化金剛烷衍生物的方法是當(dāng)今較為常用的兩種方法。CLIA法對各期梅毒的靈敏性和特異性均>97.5%,因此其也成為一種新興的檢測梅毒的方法[14]。
該研究發(fā)現(xiàn), CLIA法的陽性符合率高于TPPA法。研究發(fā)現(xiàn),CLIA法為陽性結(jié)果時,S/CO值較低時TPPA會出現(xiàn)陰性結(jié)果, RPR法發(fā)現(xiàn)14份為陰性,CLIA法驗(yàn)證結(jié)果也為陰性,由此可說明CLIA法的靈敏度明顯高于TPPA法;此外,實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)假陽性的結(jié)果可能是標(biāo)本處理不當(dāng)導(dǎo)致的。
采用RPR法檢測結(jié)果為陽性的為4份,1份為TP17、TP45條帶,2份為TP45、TP47條帶,1份為TP32、TP45、TP47條帶。這是由于CLIA包被的梅毒抗原特異性導(dǎo)致的,而TPPA采用的抗原是提純后的致病性梅毒螺旋體菌體,對TP15、TP17、的抗體選擇性較強(qiáng),當(dāng)僅有TP15、TP17抗體時,TPPA只會出現(xiàn)陰性。有研究發(fā)現(xiàn)梅毒早期診斷的指標(biāo)之一為TP47 [15],活動期梅毒標(biāo)志的抗體之一是TP15 [16]。因此推測,9份抗體梅毒標(biāo)本可能屬于早期感染或隱性感染的患者,在早期或隱性梅毒感染中的檢測CLIA法比TPPA具有更高的靈敏度。
綜上,CLIA作為一種新開發(fā)的梅毒抗體檢測試劑,相比TPPA具有非常明顯的優(yōu)勢,且容易操作、自動化技術(shù)高、結(jié)果判斷準(zhǔn)確且重復(fù)性較好等優(yōu)勢,有望成為臨床上廣泛使用的一種方法。
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(收稿日期:2014-01-05)