◎ 李 慧，李靜輝，馬德志，張可勇，崔 瑩，劉吉成

（齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院 科研處黃芪產(chǎn)業(yè)研究院，黑龍江 齊齊哈爾 161006）

黃芪來源于豆科植物膜莢黃芪Astragalus membranaceus（Fisch.）Bge.和蒙古黃芪Astragalus membranaceus（Fisch.）Bge. var.mongholicus（Bge.）Hsiao，主產(chǎn)于我國黃芪主產(chǎn)區(qū)，包括甘肅、內(nèi)蒙古、山西、黑龍江、河北等地[1]，顏色多為淡黃色，偶見粉色和紫紅色[2]。黃芪花最早于《神農(nóng)本草經(jīng)》中記載就作為藥用，主治月經(jīng)不調(diào)、咳嗽、頭痛和熱毒赤目?，F(xiàn)代研究也顯示黃芪花可以很好地起到補血或活血化瘀的作用，長期代茶飲能很好地預(yù)防身體貧血等癥狀，說明黃芪花具有較好的藥用價值。文獻(xiàn)研究顯示黃芪花含有多種生物活性成分，如黃酮類、皂苷類和多糖等，且黃芪花中的部分成分含量高于黃芪根中的含量。LI等[3]對黃芪花中的可溶性糖、可溶性蛋白、多種揮發(fā)性成分、核苷酸和17種氨基酸成分進(jìn)行了檢測，表明黃芪花含有多種活性成分。朱正蘭等[4]檢測了黃芪花和黃芪莖葉中的總皂苷含量，結(jié)果顯示黃芪莖中的總皂苷含量是1.768 mg·g-1，而花中的總皂苷含量是21.842 mg·g-1，遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于莖中的含量。姚天寧等[5]對黃芪花中的成分進(jìn)行了分離，結(jié)果顯示鑒定出8種皂苷和黃酮類成分，包括具有抗氧化活性較強的金絲桃苷和異槲皮苷。王桂臻等[6]對黃芪花中進(jìn)行檢測，結(jié)果發(fā)現(xiàn)黃芪花中含有6種黃酮類、2種皂苷類以及多種糖類和氨基酸成分。王昶等[7]采用紫外分光光度法，檢測了黃芪花中的多糖含量，結(jié)果顯示多糖含量為6 mg·g-1，表明黃芪花中含有較高的多糖含量?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究顯示黃芪花中的黃酮類化合物具有抗氧化、抗癌、抗病毒、神經(jīng)保護(hù)、降血糖和抑制黑色素生成等作用[8-9]，總皂苷類成分具有免疫調(diào)節(jié)、器官保護(hù)、抗病毒等藥理作用[10-11]，黃芪多糖具有保護(hù)視網(wǎng)膜、改善記憶力、認(rèn)知功能、抗衰老和抗骨質(zhì)疏松等作用[12-14]。

黃芪花除作為藥用來源外，還被用于長期食用，尤其在黑龍江大興安嶺、內(nèi)蒙古、廣東等地區(qū)長期做代茶飲使用。研究顯示黃芪花中含有多種營養(yǎng)成分，李園等[15]對黃芪花中營養(yǎng)成分進(jìn)行了檢測，結(jié)果顯示黃芪花中含有多糖類、水溶性蛋白質(zhì)、果糖、葡萄糖、蔗糖以及6種核苷類和15種游離氨基酸類成分，另外檢出8種脂肪酸類成分，為黃芪花的系統(tǒng)利用和深度開發(fā)提供了科學(xué)依據(jù)。目前，我國黃芪種植面積大、資源量豐富，黃芪花作為附加產(chǎn)品，不結(jié)莢年份常常自然凋謝浪費。作為有廣泛應(yīng)用前景的天然原料，其毒理學(xué)研究較少。李永[16]對黃芪茯苓制劑灌胃大鼠后的生殖毒性和胚胎致畸性進(jìn)行了觀察，結(jié)果顯示復(fù)方黃芪茯苓制劑無明顯致畸作用。朱玉平等[17]研究了黃芪甲苷對SD大鼠的致畸作用，結(jié)果表明黃芪甲苷為1.0 mg·kg-1劑量時對SD大鼠有一定母體毒性和胚胎毒性，但在受試劑量下無胎兒毒性，也無明顯的致畸作用。由于黃芪花中含有黃芪甲苷等有效成分，因此，開展相關(guān)的致畸性試驗對黃芪花的應(yīng)用具有重要的指導(dǎo)意義。

1 材料與方法

1.1 原料

試驗樣品為蒙古黃芪與膜莢黃芪的花，呈淡黃色，少數(shù)為粉色，采收后自然條件下晾干。提取方法在胡志航等[18]的提取方法上進(jìn)行了優(yōu)化，具體方法如下：樣品采用熱回流的方式進(jìn)行提取，水提設(shè)置為微沸條件下提取2次，每次2 h，提取后的殘渣再進(jìn)行醇提，條件為75%乙醇提取2次，每次2 h，將水提、醇提的過濾液合并后直接噴霧干燥成粉，得率為20%，主要有效成分有黃芪皂苷、多糖、黃酮類和氨基酸等成分。

1.2 試驗動物

選擇清潔級SD大鼠共210只，雌雄比為6∶1，體重為（200±20）g，生產(chǎn)和使用許可證號分別為SCXK（ 浙）2014-0001和SYXK（ 浙）2011-0166。基礎(chǔ)飼料執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)GB 14924—2010，飼養(yǎng)環(huán)境為室溫20～25 ℃，相對濕度為40%～70%。

1.3 試驗方法

1.3.1 劑量和分組

根據(jù)前期急性毒性實驗結(jié)果，分別設(shè)干制黃芪花3.75 g·kg-1BW、7.50 g·kg-1BW、15.00 g·kg-1BW（相當(dāng)于人體推薦量的75、150、300倍）低中高3個劑量組以及陰性對照組。按照前期樣品提取率計算分別稱取樣品22.5 g、45.0 g、90.0 g加300 mL蒸餾水混勻保存在4 ℃冰箱中。

雌性大鼠與雄性大鼠以2∶1的比例同籠過夜，次日早晨陰道涂片見精子者確定為受精鼠，將受精鼠隨機分為4組，并記錄體重，受精當(dāng)天確定為受孕0 d，每組不少于16只。

1.3.2 試驗方法及觀察指標(biāo)

在雌鼠受孕后的第6 d開始，孕鼠按10 mL·kg-1BW灌胃容量于每天上午經(jīng)口給予受試物，共給予10 d，于受孕的第0 d、6 d、9 d、12 d、15 d、20 d記錄體重。第20 d處死母鼠并取出子宮，檢查記錄黃體數(shù)、活胎數(shù)、吸收胎及死胎數(shù)（用“n”代表數(shù)量）。逐個記錄活胎鼠的體長、尾長、性別、體重以及是否發(fā)生畸形。將胎鼠的一半進(jìn)行茜紅素染色觀察骨骼畸形，另一半浸入Bouins溶液觀察內(nèi)臟。

1.3.3 數(shù)據(jù)處理

計算各個觀測指標(biāo)的平均數(shù)、標(biāo)準(zhǔn)差、發(fā)生率等，采用SPSS 13.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計量數(shù)據(jù)均采用t檢驗，計數(shù)數(shù)據(jù)采用卡方檢驗，以P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果與分析

2.1 對孕鼠體重的影響

試驗期間各組孕鼠的攝食、飲水正常，體重增長良好，未出現(xiàn)中毒表現(xiàn)和體征，無死亡發(fā)生。受孕大鼠各時期的體重、增重及凈增重與陰性對照組比較均無顯著性差異（P＞0.05），結(jié)果見表1。

表1 干制黃芪花對孕鼠體重的影響表

2.2 對孕鼠生殖功能的影響

各組孕鼠之間的指標(biāo)與陰性對照組相比無顯著差異（P＞0.05），表明干制黃芪花對孕鼠生殖功能無影響，結(jié)果見表2。

表2 干制黃芪花對孕鼠生殖功能的影響表

2.3 黃芪花對胎鼠的影響

2.3.1 對胎鼠生長發(fā)育的影響

黃芪花飼喂孕鼠后，各劑量組胎鼠的身體指標(biāo)與陰性對照組之間相比均無顯著差異（P＞0.05），提示黃芪花對胎鼠的生長發(fā)育無有害影響，結(jié)果見表3。

表3 干制黃芪花對胎鼠生長發(fā)育的影響表

2.3.2 對胎鼠畸變的影響

3個不同劑量組與陰性對照組在腦外露、脊椎裂、腹外露、唇裂、無尾等指標(biāo)方面均無畸形發(fā)生，表明黃芪花不引起胎鼠的畸形。在受檢胎鼠中，內(nèi)臟鼻腔充血、腦室充血、腎臟萎縮和上腭裂等均為0，說明黃芪花飼喂孕鼠對胎鼠內(nèi)臟畸形無影響。在胎鼠胸骨缺失及囟門增大等畸形方面各組均有部分胎鼠發(fā)生，但各組與陰性對照組之間無差異，說明胸骨缺失及囟門增大畸形不是由黃芪花引起。結(jié)果見表4、表5、表6。

表4 干制黃芪花對胎鼠外觀畸形的影響表

表5 干制黃芪花對胎鼠骨骼畸形的影響表

表6 干制黃芪花對胎鼠內(nèi)臟畸形的影響表

3 結(jié)論與討論

黃芪花作為天然綠色資源，長期作為食品原料進(jìn)行應(yīng)用，在大興安嶺、內(nèi)蒙古、廣州等國內(nèi)多個地區(qū)用于做代茶飲，并研發(fā)出多款黃芪花食品[19-20]。近年來，關(guān)于黃芪花的研究主要集中在營養(yǎng)成分、藥理作用等方面，而關(guān)于黃芪花的毒理學(xué)研究較少，尤其是致畸研究。在已有的黃芪毒理學(xué)研究方面，主要有少數(shù)研究集中在黃芪根、莖葉方面，目前的相關(guān)研究顯示黃芪根和莖葉在實驗劑量下未見對小鼠的毒害作用。隨著人們生活健康水平的提升，天然的食療保健產(chǎn)品逐漸受到更多的關(guān)注，科學(xué)合理地綜合開發(fā)富含生物活性有效成分、氨基酸、維生素的黃芪花，使人們通過膳食方式提升免疫力，促進(jìn)身體健康具有重要的現(xiàn)實和深遠(yuǎn)的社會意義。另外，由于黃芪花提取物含有的化學(xué)成分及含量與日常代茶飲相比更加豐富，能夠全面揭示黃芪花對大鼠的致畸作用，因此利用提取物進(jìn)行致畸試驗具有較強的代表性。

干制黃芪花提取物的致畸試驗結(jié)果顯示未對孕鼠產(chǎn)生中毒影響，對胎鼠的身長、尾長等特征指標(biāo)未產(chǎn)生顯著差異性影響。各劑量組胎鼠的骨骼畸形和內(nèi)臟畸形未出現(xiàn)相關(guān)影響，表明黃芪花提取物在本實驗劑量條件下對大鼠無生殖毒性作用，對胎鼠無致畸效應(yīng)。本研究結(jié)果與胡志航等[18]對黃芪的致畸性研究結(jié)果一致，表明黃芪花與黃芪在一定劑量條件下均無致畸效應(yīng)。朱玉平等[17]顯示黃芪甲苷在1.0 mg·kg-1劑量下具有一定母體毒性，但由于黃芪花中含有的黃芪甲苷含量較低，因此高劑量條件下未產(chǎn)生母體毒性，表明黃芪花的食用劑量應(yīng)相對嚴(yán)格控制。