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        生活飲用水中菌落總數(shù)新方法應(yīng)用探究

        2021-12-14 11:08:28趙永旺
        現(xiàn)代食品 2021年22期
        關(guān)鍵詞:瓊脂總數(shù)飲用水

        ◎ 謝 俊,白 雪,高 然,趙永旺

        (蒙牛乳業(yè)(寶雞)有限公司,陜西 寶雞 721013)

        水中菌落總數(shù)是指水樣在營(yíng)養(yǎng)瓊脂上,有氧條件下經(jīng)過37 ℃培養(yǎng)48 h后,每毫升(每克)水樣所含細(xì)菌菌落的總數(shù)。與生活飲用水有關(guān)的衛(wèi)生問題大多來自于微生物污染,菌落總數(shù)作為生活引用水微生物檢測(cè)的首選項(xiàng)目,在一定程度上標(biāo)志著飲用水衛(wèi)生質(zhì)量?jī)?yōu)劣。目前國(guó)內(nèi)常用檢測(cè)方法是《生活飲用水標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法 微生物指標(biāo)》(GB/T 5750.12—2006)平板傾注法。

        2008年菌落總數(shù)測(cè)試片法在食品領(lǐng)域廣泛應(yīng)用。本次選擇3M PetrifilmTM菌落總數(shù)測(cè)試片法進(jìn)行試驗(yàn),其原理為采用可再生的水合物材質(zhì),由上下兩層薄膜組成。上層聚丙烯薄膜含有黏合劑、指示劑及冷水可溶性凝膠;下層聚乙烯薄膜含有細(xì)菌生長(zhǎng)所需的營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基。細(xì)菌在測(cè)試片上生長(zhǎng)時(shí),細(xì)胞代謝產(chǎn)物與上層的指示劑TTC發(fā)生氧化還原反應(yīng),將指示劑還原成紅色非溶解性產(chǎn)物三苯甲臜,從而使細(xì)菌著色。故測(cè)試片上紅色菌落判斷為菌落總數(shù)。

        3M PetrifilmTM菌落總數(shù)測(cè)試片法檢測(cè)生活飲用水中菌落總數(shù)含量,對(duì)比國(guó)標(biāo)法檢測(cè)更便捷,且易于菌落辨別計(jì)數(shù);為檢測(cè)生活飲用水菌落總數(shù)找出一種便捷檢測(cè)、且不影響結(jié)果準(zhǔn)確性的新型方法,也為標(biāo)準(zhǔn)修訂提供參考依據(jù)。

        1 材料與方法

        1.1 試劑與儀器

        1.1.1 試劑

        3M PetrifilmTM菌落總數(shù)測(cè)試片(貨號(hào)70200572157,有效期至20220104);營(yíng)養(yǎng)瓊脂(批次20190902,有效期3年,密封保存于陰涼干燥處);3份質(zhì)控樣品(批次為QC-FD-034的生活飲用水中菌落總數(shù)定量分析質(zhì)控樣,由中國(guó)檢驗(yàn)檢疫科學(xué)研究院提供);2份實(shí)驗(yàn)室間比對(duì)樣(批次為20-C448和20-H712,由中國(guó)檢驗(yàn)檢疫科學(xué)研究院提供)。

        1.1.2 儀器設(shè)備

        電子天平(百分之一)、電熱恒溫培養(yǎng)箱、滅菌器、超凈工作臺(tái)、恒溫水浴箱。

        1.2 樣液準(zhǔn)備

        1.2.1 質(zhì)控樣品

        于無菌環(huán)境下開啟凍干樣品西林瓶蓋,立即(1 min內(nèi))從220 mL無菌水中吸取20 mL加入西林瓶中將樣品復(fù)溶,待樣品粉末溶解后,將溶液吸出轉(zhuǎn)移至無菌瓶中,再用余下的無菌水反復(fù)清洗西林瓶?jī)?nèi)壁,回收清洗液于上述無菌瓶中,220 mL溶液即為待測(cè)水樣樣品原液。

        1.2.2 生活飲用水樣品樣液制備

        依據(jù)《生活飲用水標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法 微生物指標(biāo)》(GB/T 5750.12—2006)進(jìn)行處理。對(duì)1.2.1制備后的質(zhì)控樣品和生活飲用水樣液以無菌操作方法吸取1 mL充分混勻的水樣,注入盛有9 mL滅菌生理鹽水的試管中,混勻成1∶10的稀釋液。吸取l∶10的稀釋液l mL注入盛有9 mL滅菌生理鹽水的試管中,混勻成l∶100稀釋液,并依次稀釋成l∶l 000、l∶10 000稀釋液等備用。每遞增稀釋一次,更換一支l mL滅菌吸管。

        1.3 檢測(cè)方法

        1.3.1 營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板傾注法

        依據(jù)樣品量及樣本污染情況[1],在無菌條件下用滅菌吸管取1 mL充分混勻的水樣稀釋液,置于2個(gè)無菌平皿內(nèi),同時(shí)吸取1 mL無菌生理鹽水,做空白對(duì)照。傾注15~20 mL已融化并冷卻至45 ℃左右的營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基,并立即旋搖平皿,使水樣與培養(yǎng)基充分混勻。待冷卻凝固后翻轉(zhuǎn)平皿,置于(36±1)℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48 h,進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)。

        1.3.2 3M PetrifilmTM菌落總數(shù)測(cè)試片法

        依據(jù)樣品量及樣本污染情況,在無菌條件下用滅菌吸管取1 mL充分混勻的水樣稀釋液[2],注入3M PetrifilmTM菌落總數(shù)測(cè)試片中心位置,蓋下膜后用壓板壓平,每次檢驗(yàn)時(shí)進(jìn)行平行接種,同時(shí)做空白對(duì)照。壓板后至少等待1 min,置于(36±1)℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)(48±2)h,進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)。

        1.4 統(tǒng)計(jì)方法

        使用Mintable軟件進(jìn)行配對(duì)T檢驗(yàn)分析,P<0.05具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

        1.5 計(jì)算方法

        質(zhì)控樣品測(cè)試結(jié)果依據(jù)證書特性值區(qū)間進(jìn)行評(píng)價(jià);實(shí)驗(yàn)室間比對(duì)質(zhì)控樣品測(cè)試結(jié)果采用“穩(wěn)健統(tǒng)計(jì)四分位距計(jì)算Z值”進(jìn)行評(píng)價(jià)。當(dāng)|Z|≤2,測(cè)試結(jié)果滿意;當(dāng)2<|Z|<3,測(cè)試結(jié)果有問題(可疑);當(dāng)|Z|≥3,測(cè)試結(jié)果不滿意(離群)。

        2 結(jié)果與分析

        2.1 平板傾注法及3M PetrifilmTM測(cè)試片法檢測(cè)結(jié)果及分析

        選擇15組自制水樣、3組質(zhì)控樣、2組實(shí)驗(yàn)室間比對(duì)樣分別使用營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板傾注法和3M PetrifilmTM菌落總數(shù)測(cè)試片法進(jìn)行檢測(cè),其檢測(cè)結(jié)果使用精密度和T檢驗(yàn)進(jìn)行分析。由表1可知,兩種方法檢測(cè)結(jié)果的對(duì)數(shù)差絕對(duì)值均<0.45,表明營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板傾注法和3M PetrifilmTM菌落總數(shù)測(cè)試片法檢測(cè)生活飲用水中菌落總數(shù)的差異符合要求。

        表1 平板傾注法和3M PetrifilmTM測(cè)試片法數(shù)據(jù)對(duì)比分析表

        由T檢驗(yàn)得,平均差的95%置信區(qū)間為(-0.069 2,0.122 0),t=0.58,P=0.570>0.05,表明營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板傾注法和3M PetrifilmTM菌落總數(shù)測(cè)試片法檢測(cè)生活飲用水中菌落總數(shù)結(jié)果無顯著性差異,見表2。

        表2 平板傾注法和3M Petrifilm TM測(cè)試片法T檢驗(yàn)分析表

        2.2 質(zhì)控樣品3M PetrifilmTM菌落總數(shù)測(cè)試片法檢測(cè)結(jié)果及分析

        由表3可知,質(zhì)控樣品使用3M PetrifilmTM菌落總數(shù)測(cè)試片法檢測(cè)結(jié)果分別為4 000 CFU·mL-1,93CFU·mL-1、88 CFU·mL-1。對(duì)照質(zhì)控樣證書,檢測(cè)結(jié)果均在證書特性值區(qū)間范圍內(nèi),表明3M PetrifilmTM測(cè)試片法適用于生活飲用水中的菌落總數(shù)測(cè)定,檢測(cè)結(jié)果精準(zhǔn)。

        表3 質(zhì)控樣品3MPetrifilmTM測(cè)試片法菌落總數(shù)結(jié)果評(píng)價(jià)表

        2.3 實(shí)驗(yàn)室間比對(duì)樣3M PetrifilmTM菌落總數(shù)測(cè)試片法檢測(cè)結(jié)果及分析

        由表4可知,實(shí)驗(yàn)室間比對(duì)樣使用3M PetrifilmTM菌落總數(shù)測(cè)試片法檢測(cè)結(jié)果分別為1 800 CFU·mL-1、370 CFU·mL-1,使用穩(wěn)健統(tǒng)計(jì)四分位距法計(jì)算Z值分別為1.2、1.1,結(jié)果評(píng)價(jià)均為滿意。表明3M PetrifilmTM測(cè)試片法適用于生活飲用水中菌落總數(shù)測(cè)定,檢測(cè)結(jié)果精準(zhǔn)。

        表4 實(shí)驗(yàn)室間比對(duì)樣3M PetrifilmTM測(cè)試片法菌落總數(shù)結(jié)果評(píng)價(jià)表

        3 結(jié)論與討論

        (1)試驗(yàn)結(jié)果表明,3M PetrifilmTM菌落總數(shù)測(cè)試片法檢測(cè)生活飲用水中的菌落總數(shù)結(jié)果與營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板傾注法檢測(cè)結(jié)果無顯著性差異,從精密度、準(zhǔn)確度維度進(jìn)行評(píng)價(jià),均表明3M PetrifilmTM菌落總數(shù)測(cè)試片適用于生活飲用水中的菌落總數(shù)測(cè)定。

        (2)營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板屬于普通培養(yǎng)基,不具有選擇性。出現(xiàn)特殊菌落、繁殖過快時(shí)易造成菌斑重疊覆蓋現(xiàn)象,影響結(jié)果計(jì)數(shù)。而3M PetrifilmTM菌落總數(shù)測(cè)試片中含有指示劑TTC發(fā)生氧化還原反應(yīng)使細(xì)菌著色,呈現(xiàn)紅色斑點(diǎn),便于計(jì)數(shù)。具體見圖1、圖2。

        圖1 平板法菌落形態(tài)圖

        圖2 測(cè)試片法菌落形態(tài)圖

        (3)3M PetrifilmTM測(cè)試片法檢測(cè)過程中減少藥品稱量、配置、滅菌、平皿清洗等環(huán)節(jié),培養(yǎng)過程占用面積小,節(jié)省空間。適合培養(yǎng)空間小和檢測(cè)樣品數(shù)量多的實(shí)驗(yàn)機(jī)構(gòu)。

        綜上所述,3M PetrifilmTM菌落總數(shù)測(cè)試片適用于生活飲用水中的菌落總數(shù)測(cè)定,同時(shí)為水質(zhì)中菌落總數(shù)檢測(cè)提供了一種便捷易操作的檢測(cè)方法。

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