李新

摘要：磺胺類藥物與喹諾酮類藥物是一種人工合成的抗菌藥物，目前主要用于集約化養(yǎng)殖當中，如果使用量過多或者不遵守休藥期規(guī)定會導致藥物殘留在水產(chǎn)品當中，危害人們健康。近年來國際組織對牲畜和水產(chǎn)品中的獸藥殘留最大允許殘留限量作出明確規(guī)定，同時檢測技術(shù)也在不斷進步，以下對相關(guān)內(nèi)容進行分析。

關(guān)鍵詞：水產(chǎn)品;喹諾酮類;磺胺類;獸藥殘留;檢測方法

一、當前水產(chǎn)品獸藥殘留常用檢測方法

超高效液相串聯(lián)質(zhì)譜法不需要對樣品衍生化處理，能夠同時對多個目標物測定，體現(xiàn)出靈活性高、選擇性廣的優(yōu)勢，目前這一技術(shù)已經(jīng)在食品安全分析中廣泛利用。QuEChERS是農(nóng)產(chǎn)品檢測的快速樣品前處理技術(shù)，具有操作簡單、檢測速度快、價格低廉、安全性高的優(yōu)勢。問世以來，在農(nóng)藥殘留檢測中得到了普遍利用。目前已逐步用于獸藥殘留檢測當中，能夠分析肉制品中磺胺類獸藥的殘留，有相關(guān)研究人員對紅霉素、泰勒菌素、北里霉素、硝沙霉素以及恩諾沙星、丹諾沙星、環(huán)丙沙星、沙拉沙星、林可霉素惡喹酸在內(nèi)的10幾種殘留物檢測，方法為在線固相萃取液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法，我國相關(guān)人員借助HPLC-MS/MS內(nèi)標法對水產(chǎn)品當中18種磺胺類藥物的殘留含量進行分析，不過這兩種檢測手段較為繁瑣，并且檢測成本偏高，以下就喹諾酮類和磺胺類獸藥殘留檢測進行深入分析。

二、喹諾酮類和磺胺類獸藥殘留檢測技術(shù)

（一）材料與儀器準備

在分析過程中主要利用的儀器包括超高效液相色譜串聯(lián)四級桿質(zhì)譜聯(lián)用儀、天平、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀、離心機、氮吹濃縮儀，使用材料包括超純水、乙腈、甲醇、甲酸、C18填料;醋酸為優(yōu)級純、無水硫酸鈉為分析純。標準物質(zhì)如下：吡哌酸、西諾沙星、萘啶酸、諾氟沙星、氧氟沙星、依諾沙星、單諾沙星、環(huán)丙沙星、洛美沙星、氟甲喹、恩諾沙星、沙拉沙星、磺胺噻唑、磺胺嘧啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺甲氧噠嗪、磺胺二甲嘧啶、磺胺對甲氧嘧啶鈉、磺胺間甲氧嘧啶鈉、磺胺氯噠嗪、磺胺多辛、磺胺甲惡唑、磺胺異惡唑、磺胺地索辛。標準溶液和內(nèi)標溶液配置方法如下：乙腈溶劑配制質(zhì)量濃度范圍0.2mg/mL-1mg/mL，將其作為標準儲備溶液，并放置在-18℃或者4℃的避光條件下，保存為期三個月。再配置成10 mg/mL的標準中間液，保存時間為30天。之后借助初始流動相對中間液稀釋，之后稀釋成為滿足標準工作液的要求，保存7天。

（二）樣品前期處理

需要選取具有代表性的脊背部魚肉，先進行破碎處理，之后再把蝦類、貝類中可食部分破碎，將脊背部魚肉、蝦類、貝類共同放置在-18℃環(huán)境下保存，把破碎魚肉樣品（2g）放在規(guī)格為50 mL的離心管內(nèi)部，技術(shù)人員加入10μg內(nèi)標溶液，后續(xù)加入10 mL 1%的醋酸、乙腈搖勻，之后使用離心機轉(zhuǎn)數(shù)設定為5000r/min，持續(xù)旋轉(zhuǎn)5 min，盛出上部清液，轉(zhuǎn)移到另一離心管內(nèi)，該步驟重復兩次，然后將提取的溶液合并。將提取的液體放在含有Na2SO4的離心管當中，溶液重量為5g，完成離心后將上部清液取出，在原底燒瓶當中處于40℃、60r/min的減壓條件下蒸發(fā)，發(fā)之后加入甲醇5mL，再次轉(zhuǎn)移到裝滿C18填料的離心管中，之后使用乙醇8mL洗滌圓底燒瓶，完成以上操作對上部清液收集，使用氮氣吹干，然后加入2mL流動相，經(jīng)0.22μm濾膜過濾。

（三）色譜-質(zhì)譜條件

選取WatersBEHC181.7μm，2.1mm×100mm為色譜柱，流動相A為0.1%甲酸水，B為乙腈，梯度洗脫程序如表一：

采用正離子模式掃描，并且利用多反應監(jiān)測采集方法，其中霧化氣壓力為413.8kPa、輔助氣壓力為413.8kPa、氣簾氣壓力為206.9kPa、離子源溫度為551℃、電噴霧電壓（IS）：5400V，質(zhì)譜參數(shù)見表二：

（四）優(yōu)化提取劑

在水產(chǎn)品中獸藥多殘留同時測定過程中，關(guān)鍵在于對提取方式合理選擇，提取溶劑主要包括有甲醇、醋酸乙酯、乙腈。研究發(fā)現(xiàn)醋酸乙酯、甲醇溶液提取過程中不易去除油脂等雜質(zhì)，并且對蛋白的沉積效果不明顯。乙腈可減少從組織中提取出的脂肪含量，并且具有蛋白沉積效果，所以本次研究選擇乙腈作為提取溶劑，分別為乙腈、1%醋酸、5%醋酸乙腈，之后優(yōu)化提取劑的酸度。

（五）優(yōu)化質(zhì)譜和色譜條件

質(zhì)譜條件中的去阻電壓和碰撞能量大小對離子分度影響明顯，并且與方法靈敏度關(guān)系密切。本次實驗使用的已經(jīng)配制濃度為25 ng/mL標準品。

在液相檢測過程中，甲醇和乙腈為流動相。在利用以氫作為流動相時容易定量。由于甲酸可以起到提升離子化效果，檢測方法更加靈活，所以在試驗的有機相中加入0.1%的甲酸。色譜圖如下：

結(jié)束語：

綜上所述，本次研究分析了石斑魚、鯉魚、鰱魚等樣本，利用1%醋酸、乙腈提取，前處理方法選擇QuEChERS，流動相選擇水、乙腈（都含有0.1%甲酸），建立了UPLC-MS/MS，形成了測定水產(chǎn)品中獸藥殘留的方法。最終實驗結(jié)果如下：回收率為69%-124%，相對標準偏差為1%-19%，檢測周期短，不需要理由特殊實驗裝置，并且實驗成本低，有利于大批量水產(chǎn)品獸藥殘留檢測研究。

參考文獻：

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國家輕工業(yè)食品質(zhì)量監(jiān)督檢測南京站 江蘇南京 210000