摘 要：高效液色譜相法（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）是20世紀(jì)70年代發(fā)展起來(lái)的一種高效、快速的分離分析技術(shù)。因其分離速度快、分離效能高、靈敏度高、所需試樣少等特點(diǎn)廣泛應(yīng)用于石油化工、食品安全、生命科學(xué)、環(huán)境監(jiān)測(cè)等方面。本文對(duì)高效液色譜相法的原理及其在各個(gè)領(lǐng)域中的應(yīng)用情況進(jìn)行綜述分析。

關(guān)鍵詞：高效液相色譜法;原理;應(yīng)用

1 高效液相色譜分析法的基本原理

高效液相色譜分析法是以液體為流動(dòng)相，采用高壓泵將儲(chǔ)液器中的流動(dòng)相打入系統(tǒng)中，試樣溶液經(jīng)進(jìn)樣器進(jìn)入流動(dòng)相之中，經(jīng)流動(dòng)相載入固定相中。試樣溶液中各組分與固定相和流動(dòng)相的相對(duì)溶解度不同，即分配系數(shù)不同，所以在兩相進(jìn)行相對(duì)運(yùn)動(dòng)的時(shí)候，通過(guò)吸附--解吸這樣一個(gè)分配過(guò)程時(shí)，滯留時(shí)間不同，分配系數(shù)大的組分保留值大，所以各組分最終被分離為單個(gè)組分依次從柱內(nèi)流出，再由檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)[1]。

2 高效液相色譜分析法的應(yīng)用

2.1 高效液相色譜分析法在石油化工方面的應(yīng)用

高效液相色譜法因其分離速度快、分離效能高、靈敏度高、所需試樣少等特點(diǎn)，在石油化工生產(chǎn)中的應(yīng)用非常廣泛，對(duì)促進(jìn)石油化工行業(yè)的發(fā)展具有非常重要的作用。馬宏園等使用高效液相色譜--示差折光檢測(cè)法測(cè)定柴油中芳烴的含量，具體實(shí)驗(yàn)條件為：色譜柱：安捷倫公司ZORBAX NH2柱（250mm×4.6mm，5μm），配氨基保護(hù)柱（12.5mm×4.6mm，5μm）;流動(dòng)相：正庚烷，流量0.8mL/min;柱溫：35℃;檢測(cè)器溫度：35℃;進(jìn)樣量：20μL。該方法的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在0.9%～6.1%，回收率在91.5%～109.1%，精密度和準(zhǔn)確度均較好，該方法快速、簡(jiǎn)便，能夠很好地滿足柴油芳烴快速檢測(cè)的要求[2]。努爾古麗等使用高效液相色譜法測(cè)定原油脫鈣工藝排水體系中NS3緩蝕劑的濃度，具體實(shí)驗(yàn)條件為：色譜柱：150mm×4.6mm，Kromasil C18柱，5μm;流動(dòng)相：乙腈：二氯甲烷（V/V）=9：1;流動(dòng)相流速：1.0mL/min;柱溫：室溫（℃）;沖洗方式：等度沖洗;檢測(cè)器：UV/300nm，1.0AU。測(cè)定結(jié)果表明NS3緩蝕劑濃度在100～900 mg /kg時(shí)，其峰面積與相應(yīng)的質(zhì)量濃度有良好的線性關(guān)系（r2=0.9999），相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差和相對(duì)誤差都小于2.0%，說(shuō)明該法測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確可靠，操作簡(jiǎn)便快速且重現(xiàn)性好[3]。

2.2 高效液相色譜分析法在食品安全方面的應(yīng)用

食品安全是保障人類和公共衛(wèi)生的重要課題，發(fā)生食品安全事故所造成的社會(huì)危害后果極其嚴(yán)重，因此食品中有害成分的檢測(cè)技術(shù)的應(yīng)用具有極其重要的意義。吳敏等使用高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定食品中8種脂溶性染料，具體實(shí)驗(yàn)條件為：色譜柱：Zorbax 80A Extend-C18柱（4.6mm×250mm，5μm）;流速：0.8mL/min;進(jìn)樣量：10μL;流動(dòng)相：0.1%甲酸水溶液（A）和0.1%甲酸乙腈溶液（B）;梯度洗脫程序：0～20minB由70%～95%，20～30min B由95%～100%，保持5min，35.1min變?yōu)?0%A和70%B，保持5min。其結(jié)果表明8種脂溶性染料（對(duì)位紅、蘇丹Ⅰ、蘇丹Ⅱ、蘇丹Ⅲ、蘇丹Ⅳ、蘇丹橙G、蘇丹紅7B、蘇丹紅G）標(biāo)準(zhǔn)在0.1～5mg/L范圍內(nèi)與峰面積具有良好的線性關(guān)系，辣椒醬及醬油樣品中8種染料的平均回收率在87%～103%之間，檢出限可達(dá)0.05mg/kg，說(shuō)明高效液相色譜法適用于檢測(cè)食品中這8種脂溶性染料[4]。

2.3 高效液相色譜分析法在生命科學(xué)方面的應(yīng)用

隨著現(xiàn)代科學(xué)和技術(shù)的迅猛發(fā)展，生命科學(xué)已成為21世紀(jì)最富有拓展力和生命力的科學(xué)領(lǐng)域之一，在揭露生命過(guò)程中的機(jī)制方面具有巨大的理論和實(shí)踐意義。鄭屹等采用高效液相色譜法測(cè)定細(xì)胞中ATP、ADP和AMP含量，具體實(shí)驗(yàn)條件為：高效液相色譜分析系統(tǒng)采用Ecosil C18反相柱（4.6*250mm5μm pH2～8），以15mM磷酸二氫鉀緩沖液和10%甲醇作為流動(dòng)相，控制流速在0.5mL/min，紫外檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm;檢測(cè)溫度為25℃，進(jìn)樣量20μL。其實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明擬衰老細(xì)胞中ATP、EC含量較對(duì)照組顯著降低，而AMP含量明顯升高，該差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但兩組之間的ADP含量并沒(méi)有明顯差別，說(shuō)明了高效液相色譜法可檢測(cè)出不同狀態(tài)細(xì)胞能量物質(zhì)的差異，而且操作簡(jiǎn)便、快速、重現(xiàn)性好[5]。

2.4 高效液相色譜分析法在環(huán)境監(jiān)測(cè)方面的應(yīng)用

隨著人口的增長(zhǎng)和現(xiàn)代工業(yè)的迅速發(fā)展，環(huán)境污染問(wèn)題日益嚴(yán)峻，讓環(huán)境監(jiān)測(cè)這一污染防治基礎(chǔ)工作面臨巨大的挑戰(zhàn)。就目前為止，高效液相色譜分析法因其靈敏度高、精確度好、重現(xiàn)性和選擇性均較好，在環(huán)境監(jiān)測(cè)方面發(fā)揮著不可替代的作用。吳睿清等使用反相固相萃取預(yù)處理與超高效液相色譜--串聯(lián)四極桿質(zhì)譜儀（RSPE UPLC--MS/MS） 聯(lián)用同時(shí)測(cè)定污水中9種鹵乙酸（HAAs）。具體實(shí)驗(yàn)條件為：Acquity UPLC HSS T3色譜柱（2.1mm×100mm，1.8μm）;流動(dòng)相為：甲醇（A）和0.0005%甲酸水溶液（B）組成，控制流速在0.2 mL/min。單個(gè)樣品檢測(cè)時(shí)間15.0min，洗脫梯度為：1%A保持1.5 min，在4min內(nèi)升至40%并保持3min，然后在0.2 min內(nèi)快速升至90%并保持2.8 min，最后降至1% A并平衡3.5 min。進(jìn)樣量：10μL;樣品室溫度為25℃，色譜柱的溫度為35℃。該法測(cè)得9種HAAs的線性范圍為0.5～100μg/L，相關(guān)系數(shù)（ r2）為0. 999 7～0.999 9，檢出限和定量下限分別為0.02～0.26μg/L和0.05～0.86μg/L，日內(nèi)和日間相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為1.4%～10.0%和1.7%～10.0%。表明該方法能夠滿足污水處理廠出水中9種HAAs的檢測(cè)要求[6]。

3 結(jié)語(yǔ)

近年來(lái)，高效液相色譜分析技術(shù)不論在在色譜柱方面，還是色譜柱填料方面都取得較大進(jìn)步，同時(shí)關(guān)于高效液相色譜法的理論基礎(chǔ)研究更加深入，新型材料的不斷涌現(xiàn)，都為高效液相色譜法的發(fā)展提供新鮮血液，使得該法的應(yīng)用范圍得以延伸。多元化的色譜柱填料和建立多種儀器聯(lián)用的分析方法進(jìn)一步推動(dòng)了高效液相色譜技術(shù)的快速發(fā)展，在未來(lái)，高效液相色譜法必將以更迅猛的速度發(fā)展，其應(yīng)用范圍將得到進(jìn)一步的延伸。

參考文獻(xiàn)：

[1]昝川南，葉梁銀.淺析高效液相色譜分析法在各領(lǐng)域的應(yīng)用及發(fā)展前景[J].化學(xué)工程與裝備，2013（02）：158-161.

[2]馬宏園，安曉春，江明玉，劉毅.高效液相色譜-示差折光檢測(cè)法測(cè)定柴油中的芳烴含量[J].中國(guó)測(cè)試，2017，43（05）：40-44.

[3]努爾古麗，冉竹葉，唐新忠，欒利新，馬玲，方瑞平.高效液相色譜法測(cè)定原油脫鈣工藝排水體系中NS-3緩蝕劑濃度[J].分析測(cè)試技術(shù)與儀器，2006（03）：143-146.

[4]吳敏，林建忠，鄒偉，吳抒懷，周昱.高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定食品中對(duì)位紅和蘇丹色素等8種脂溶性染料[J].分析測(cè)試學(xué)報(bào)，2006（03）：74-76.

[5]鄭屹，陳賽慧，葉薇，呂建新.高效液相色譜法檢測(cè)細(xì)胞能量代謝物質(zhì)的方法建立與應(yīng)用[J].科技通報(bào)，2012，28（07）：46-50.

[6]吳睿清，梁欣然，李偉，劉玉燦.反相固相萃取/超高效液相色譜-串聯(lián)四極桿質(zhì)譜儀同時(shí)測(cè)定污水中9種鹵乙酸的方法研究[J].分析測(cè)試學(xué)報(bào)，2016，35（11）：1422-1427.

作者簡(jiǎn)介：

姚君尉（1999- ），男，漢族，江西南昌人，本科學(xué)歷，江西師范大學(xué)，研究方向：化學(xué)。