王志英　李全忠

摘要：目的 分析比較結(jié)核分枝桿菌快速培養(yǎng)兩種前處理方法，從而大大減少了操作過(guò)程中被污染的幾率，也提高了該培養(yǎng)方法的準(zhǔn)確性。方法 采用的結(jié)核菌快速液體培養(yǎng)方法中使用的前處理方法為N-乙酰-L-半胱氨酸（NALC）-NaOH法，與我院經(jīng)改良后的結(jié)核菌快速液體培養(yǎng)方法為NaOH-生理鹽水法相比較。結(jié)果 使用N-乙酰-L-半胱氨酸（NALC）-NaOH法進(jìn)行前處理的培養(yǎng)陽(yáng)性結(jié)果為92例。使用NaOH-生理鹽水法進(jìn)行前處理的培養(yǎng)陽(yáng)性結(jié)果為90例。結(jié)論 使用NaOH-生理鹽水法進(jìn)行前處理可以減少前處理過(guò)程中的許多環(huán)節(jié)，減少被污染，降低了實(shí)驗(yàn)成本。

關(guān)鍵詞：結(jié)核分枝桿菌； 快速液體培養(yǎng)；培養(yǎng)方法

Abstract：Objective Comparison of mycobacterium tuberculosis fast develop two kinds of pretreatment method， thus greatly reducing the chance of contamination in the process of operation， and also improve the accuracy of the training methods. Methods N/med tuberculosis bacterium rapid liquid culture method used in the pretreatment method for n-acetyl - L - cysteine （NALC） - NaOH method，with our improved n/med tuberculosis bacterium rapid liquid culture method for NaOH - saline method comparison. Results Use n-acetyl - L - cysteine （NALC） - NaOH method for pretreatment of the positive results of 92 cases. Using NaOH - saline method for pretreatment of the positive results of 90 cases. Conclusion Using NaOH - saline method for pretreatment can reduce many links in the process of pretreatment， reduce the pollution， reduce the experiment cost.

Key words：Mycobacterium tuberculosis； Rapid liquid culture； Training method

結(jié)核分枝桿菌的快速液體培養(yǎng)方法在結(jié)核分枝桿菌檢測(cè)陽(yáng)性率方面顯著高于涂片法，也高于羅氏培養(yǎng)法。在檢測(cè)時(shí)間上遠(yuǎn)遠(yuǎn)短于羅氏培養(yǎng)法。因此能達(dá)到快速診斷的目的。但是，目前用于快速培養(yǎng)的標(biāo)本前處理方法因其使用的處理試劑繁多，而且程序繁瑣容易在前處理過(guò)程中產(chǎn)生污染。本方法采用的前處理方法只需使用無(wú)菌生理鹽水代替前處理過(guò)程中的繁多試劑，從而大大減少了操作過(guò)程中被污染的幾率，也提高了該培養(yǎng)方法的準(zhǔn)確性。

1資料與方法

目前國(guó)際和我國(guó)采用的結(jié)核菌快速液體培養(yǎng)方法中使用的前處理方法為N-乙酰-L-半胱氨酸（NALC）-NaOH法。具體操作過(guò)程如下：

試劑配制： ①2.94%（0.1mol/L）枸櫞酸鈉溶液50ml，加4%NaOH溶液50ml混勻。臨用前加入0.5NALC，混勻后置室溫24～48h內(nèi)使用，此溶液不穩(wěn)定，應(yīng)密閉冷藏。②處理方法：取被檢標(biāo)本2ml左右，加等量的上述試劑進(jìn)行消化處理，振蕩30s，如果標(biāo)本粘稠，可適當(dāng)延長(zhǎng)時(shí)間，室溫（20℃～25℃）放置15min，加入0.067mol/LPB緩沖液20ml，混勻，以10000rmp離心10min，倒掉上清液。加入0.067mol/LPB緩沖液20ml，洗滌2次后，加入0.5ml0.067mol/LPB緩沖液，混勻后接種于快速液體培養(yǎng)基中。

我院經(jīng)改良后的結(jié)核菌快速液體培養(yǎng)方法為NaOH-生理鹽水法。具體操作過(guò)程如下：試劑配制：4%NaOH溶液，0.9%滅菌生理鹽水。

處理方法：取被檢標(biāo)本2ml左右，加等量的4%NaOH溶液，振蕩30s室溫放置15min，如果標(biāo)本粘稠，可適當(dāng)延長(zhǎng)放置時(shí)間，混勻，以10000rmp離心沉淀10min，去掉上清液。加入0.9%滅菌生理鹽水20ml充分混勻洗滌，再次以10000rmp離心沉淀10min，如此反復(fù)兩次，去掉上清液，，加入0.9%滅菌生理鹽水0.5ml，混勻后接種于快速液體培養(yǎng)基中。實(shí)驗(yàn)結(jié)果：自2013年1月～12月，我院共收集痰菌陽(yáng)性結(jié)核病患者痰標(biāo)本200例進(jìn)行結(jié)核菌快速液體培養(yǎng)，并將每個(gè)痰標(biāo)本分為兩組，分別使用兩種前處理方法對(duì)兩組標(biāo)本進(jìn)行前處理然后進(jìn)行快速液體培養(yǎng)。得出結(jié)果為使用N-乙酰-L-半胱氨酸（NALC）-NaOH法進(jìn)行前處理的培養(yǎng)陽(yáng)性結(jié)果為92例。使用NaOH-生理鹽水法進(jìn)行前處理的培養(yǎng)陽(yáng)性結(jié)果為90例。其培養(yǎng)陽(yáng)性檢出率分別為46%和45%。兩 種前 處理 法培 養(yǎng)陽(yáng) 性率 比較：？字2=0.5，0.5>P>0即：N-乙酰-L-半胱氨酸（NALC）-NaOH法和NaOH-生理鹽水法的前處理標(biāo)本培養(yǎng)陽(yáng)性率無(wú)顯著差異。

2討論

目前進(jìn)行結(jié)核菌快速液體培養(yǎng)的前處理方法由于使用處理的試劑種類(lèi)繁多，而且操作程序繁瑣，所以容易在前處理的過(guò)程中產(chǎn)生污染。使用NaOH-生理鹽水法進(jìn)行前處理不僅可以減少前處理過(guò)程中的許多環(huán)節(jié)，減少被污染的幾率。而且，減少許多試劑，從而降低了實(shí)驗(yàn)成本。為患者減少了就診中的費(fèi)用。

參考文獻(xiàn)：

[1]傳染性肺結(jié)核診斷標(biāo)準(zhǔn)及處理原則[S].中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，GB15987-1995.

[2]衛(wèi)生部疾病控制司、衛(wèi)生部醫(yī)政司.全國(guó)結(jié)核病防治工作手冊(cè)[S].1999. 編輯/孫杰