王荷溪 潘蓉蓉 戴曉云 魏欽俊 康東洋

1.江蘇省鎮(zhèn)江市計(jì)劃生育指導(dǎo)所（212004）；2.南京醫(yī)科大學(xué)生物技術(shù)系；3.解放軍總醫(yī)院耳鼻咽喉研究所

我國(guó)是出生缺陷和殘疾高發(fā)國(guó)家，出生缺陷總發(fā)生率40‰～60‰。殘疾人群有8296萬(wàn)，其中聽(tīng)力殘疾人群有2780萬(wàn)（33%），居各類殘疾之首［1－2］。研究表明，中國(guó)耳聾人群中，GJB2、SLC26A4及線粒體基因（mtDNA12Sr RNA）是導(dǎo)致大部分遺傳性耳聾發(fā)生的三大責(zé)任基因，所占比例分別約為21%、14.5%及3.8%，由此催生出的耳聾基因診斷技術(shù)在中國(guó)已成為耳聾病因?qū)W分析的有力工具，并常規(guī)應(yīng)用于臨床檢測(cè)［3］。目前中國(guó)耳聾人群中約66%的遺傳性耳聾已能夠得到明確診斷。對(duì)于明確遺傳學(xué)病因和遺傳風(fēng)險(xiǎn)的耳聾人群和聽(tīng)力正常的致聾基因突變攜帶者，在其婚配前進(jìn)行遺傳咨詢，孕早期進(jìn)行產(chǎn)前基因診斷，可指導(dǎo)其家庭生育聽(tīng)力正常的孩子［4］。筆者2012～2013年對(duì)鎮(zhèn)江市區(qū)165個(gè)青年聾人進(jìn)行遺傳性耳聾基因檢測(cè)及生育指導(dǎo)，報(bào)告如下。

1 對(duì)象與方法

1.1 對(duì)象

2012年1月～2013年12月，對(duì)由市殘聯(lián)組織的年齡20～35歲有生育意愿的青年聾人165例進(jìn)行耳聾基因檢測(cè)及婚配生育指導(dǎo)，其中男性97例，女性74例；含聾人夫妻12對(duì)。

1.2 方法

1.2.1 一般檢查 詳細(xì)詢問(wèn)患者病史包括發(fā)病年齡、原因，有無(wú)氨基糖甙類抗生素用藥史，有無(wú)頭部外傷史，以及家族史等情況。體格檢查包括全身查體以及耳鼻咽喉?？撇轶w。聽(tīng)力學(xué)及影像學(xué)檢查包括純音測(cè)聽(tīng)、聲導(dǎo)抗、聽(tīng)覺(jué)腦干反應(yīng)（ABR）、畸變產(chǎn)物耳聲發(fā)射（DPOAE）、顳骨CT以及顱腦MRI等。建立記錄冊(cè)，簽訂耳聾基因檢測(cè)知情同意書。

1.2.2 DNA提取方法 抽取外周靜脈血3～5ml，EDTA抗凝。所有血樣用小量基因組DNA抽提試劑盒提取DNA（北京天根生物公司），定量鑒定，其余保存于－20℃?zhèn)溆谩?/p>

1.2.3 耳聾基因芯片檢測(cè)方法 應(yīng)用遺傳性耳聾基因芯片檢測(cè)試劑盒（博奧生物有限公司，北京）對(duì)GJB2（35delG、176del16、235delC、299delAT）、SLC26A4（2168A＞G、IVS7－2A＞G）、GJB3（538C＞T）和mtDNA12srRNA（1494C＞T、1555A＞G）4個(gè)耳聾相關(guān)基因的9個(gè)致聾突變位點(diǎn)進(jìn)行檢測(cè)。該試劑盒以基因組DNA為模板，采用帶有Tag標(biāo)簽序列的基因位點(diǎn)特異性引物對(duì)相關(guān)突變位點(diǎn)所在的基因片段進(jìn)行擴(kuò)增和熒光標(biāo)記，然后與能夠識(shí)別相應(yīng)標(biāo)簽序列的基因芯片進(jìn)行雜交，最后通過(guò)軟件對(duì)芯片進(jìn)行掃描和數(shù)據(jù)分析，得到9個(gè)突變位點(diǎn)的檢測(cè)結(jié)果?；蛐酒捎梦⒘奎c(diǎn)樣技術(shù)，將檢測(cè)突變位點(diǎn)的通用探針與各種對(duì)照探針固定在經(jīng)過(guò)化學(xué)修飾的基片上，每一個(gè)檢測(cè)探針重復(fù)5個(gè)點(diǎn)，每一個(gè)對(duì)照探針重復(fù)5、10或15個(gè)點(diǎn)，形成11行×15列的微陣列，每張芯片上有4個(gè)同樣的微陣列，每個(gè)微陣列可以檢測(cè)一份樣品。

2 結(jié)果

2.1 耳聾基因檢查情況

165例青年聾人中發(fā)現(xiàn)有91例攜帶致聾基因，男性52例，女性39例。其中GJB2 39例，SLC26A4 38例，mtDNA12Sr RNA14例。有2例攜帶兩種致聾基因，1例為SLC26A4IVS7－2A＞G雜合＋ mtDNA12Sr RNADNAA1555G；1 例 為 GJB2235delC雜合＋SLC26A42168A＞G＋I(xiàn)VS7－2A＞G復(fù)合雜合。見(jiàn)表1。

2.2 婚配生育指導(dǎo)

165例中有12對(duì)夫妻，只有1對(duì)夫妻雙方均未檢出致聾基因，1對(duì)夫妻雙方都攜帶相同致聾基因。3對(duì)聾人夫婦妊娠，其中1對(duì)夫婦男方致聾基因?yàn)镚JB2235delC純合，女方未檢出，妊娠后在解放軍301醫(yī)院行產(chǎn)前診斷胎兒基因型為GJB2235delC雜合，現(xiàn)已生育，女孩，聽(tīng)力正常。另1對(duì)夫婦男方未檢出，女方檢出致聾基因?yàn)閙tDNA12Sr RNAA1555G均質(zhì)，子代芯片檢測(cè)為mtDNA12Sr RNAA1555G均質(zhì)，目前聽(tīng)力正常；第3對(duì)夫婦男方為SLC26A42168A＞G＋I(xiàn)VS7－2A＞G復(fù)合雜合，女方為SLC26A4IVS7－2A＞G／1079C＞T復(fù)合雜合，現(xiàn)已生育，男孩，聽(tīng)力障礙，基因型為IVS7－2A＞G純合。未婚聾人141例，檢出致聾基因76例 。

表1 165例聾人致聾基因檢出情況

3 討論

同癥婚配是遺傳學(xué)一個(gè)普遍的現(xiàn)象，其會(huì)增加連續(xù)的遺傳性狀變異的發(fā)生幾率已成為共識(shí)，而耳聾群體的同證婚配在國(guó)內(nèi)外有極高的比例，耳聾患者的出生隨著高密度的同癥婚配而持續(xù)增長(zhǎng)［4］。在我國(guó)，聾啞學(xué)校、聾兒康復(fù)機(jī)構(gòu)和殘疾人福利機(jī)構(gòu)使得聾人處于同癥聚集狀態(tài)，聾人之間的婚配也是主要的婚姻模式。耳聾基因診斷的積極意義在于可以為相當(dāng)部分的耳聾患者揭示分子病因，為耳聾家庭提供致病基因的攜帶狀況和遺傳規(guī)律等信息，從而為耳聾的遺傳咨詢、產(chǎn)前診斷及出生缺陷預(yù)防提供理論基礎(chǔ)和依據(jù)。

對(duì)未婚人群我們專門印制了婚配生育指導(dǎo)卡，用紅、黃、紫分別代表 GJB2、mtDNA12Sr RNA、SLC26A4不同的3種基因型。告之耳聾的遺傳規(guī)律，在選擇對(duì)象組織家庭時(shí)讓對(duì)方也來(lái)做基因檢測(cè)，盡量避免與攜帶相同致聾基因（同色卡）的人婚配生育，妊娠后要進(jìn)行遺傳咨詢和產(chǎn)前診斷，以有效避免生育聾兒，實(shí)現(xiàn)一級(jí)預(yù)防。對(duì)3對(duì)擬生育但檢出致聾基因的聾人夫婦均給予了遺傳咨詢和生育指導(dǎo)，其中2對(duì)夫婦生育聽(tīng)力正常兒；另1對(duì)生育聾兒的家庭有其特殊性，由于女方是再婚且年齡比男方大，婚姻得不到雙方父母的支持和認(rèn)可，特別希望生育一個(gè)聽(tīng)力正常的孩子建立家庭維持彼此感情，產(chǎn)前由解放軍總醫(yī)院耳鼻咽喉研究所檢測(cè)，生育聾兒的幾率幾乎是100%，但是最終他們還是選擇生下孩子。

聾人是生育聾兒的高風(fēng)險(xiǎn)人群，他們的生育意愿應(yīng)該得到充分尊重，因此迫切需要得到確實(shí)有效的專業(yè)指導(dǎo)。耳聾基因診斷使得耳聾的診斷躍升至分子水平，大大提高了臨床耳聾患者的確診率，并為預(yù)防耳聾患兒的出生和耳聾的發(fā)生提供了重要技術(shù)保障和實(shí)施途徑。本資料中SLC26A4基因檢出率（23.03%）明顯高于文獻(xiàn)報(bào)道，也與袁永一等［5］報(bào)道（19.43%）有差別。由于本文例數(shù)有限，有待于更多耳聾人群基因檢測(cè)結(jié)果驗(yàn)證，以分析判斷地區(qū)差異。

［1］ 康媛，樓懿婷，凌佩華，等.婚前醫(yī)學(xué)檢查與出生缺陷預(yù)防的現(xiàn)狀調(diào)查［J］.中華婦幼臨床醫(yī)學(xué)雜志（電子版），2008，（1）：4.

［2］ 孫喜斌，魏志云，于麗玫，等.中國(guó)聽(tīng)力殘疾人群現(xiàn)狀及致殘?jiān)蚍治觯跩].中華流行病學(xué)雜志，2008，29（7）：643－646.

［3］ 韓明昱，盧彥平，邊旭明，等.遺傳性耳聾家庭康復(fù)與預(yù)防模式的探討［J］.中華耳科學(xué)雜志，2014，12（1）：12－14.

［4］ 袁永一，戴樸.耳聾基因診斷--轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)推動(dòng)耳科學(xué)發(fā)展的范例［J］.中華耳科學(xué)雜志，2014，12（1）：1－5.