【摘要】目的 研究乙型肝炎性原發(fā)性肝癌患者乙型肝炎病毒DNA載量水平與免疫功能的關系，為臨床提供參考。方法 選取2020年1月至2023年6月在廣寧縣人民醫(yī)院接受治療的87例乙型肝炎性原發(fā)性肝癌患者納入觀察組，另選取同期在廣寧縣人民醫(yī)院參與體檢的87例健康體檢者納入對照組，進行回顧性分析。比較兩組研究對象T淋巴細胞亞群、調(diào)節(jié)性T細胞（Treg）水平。根據(jù)TNM分期將觀察組患者分為Ⅱ期組（38例）和Ⅲ期組（49例），比較不同TNM分期患者乙型肝炎病毒DNA載量、T淋巴細胞亞群和Treg水平，分析乙型肝炎病毒DNA載量與T淋巴細胞亞群水平的相關性。結果 觀察組研究對象CD3+T淋巴細胞百分比、CD4+T淋巴細胞百分比和CD4+/CD8+比值均低于對照組，CD8+T淋巴細胞百分比、Treg水平均高于對照組（均Plt;0.05）。Ⅲ期組患者乙型肝炎病毒DNA載量、CD8+T淋巴細胞百分比、Treg水平均高于Ⅱ期組，CD3+T淋巴細胞百分比、CD4+T淋巴細胞百分比和CD4+/CD8+比值均低于Ⅱ期組（均Plt;0.05）。乙型肝炎病毒DNA載量與CD8+T淋巴細胞百分比、Treg水平均呈正相關，與CD3+T淋巴細胞百分比、CD4+T淋巴細胞百分比和CD4+/CD8+比值均呈負相關（均Plt;0.05）。結論 乙型肝炎性原發(fā)性肝癌患者乙型肝炎病毒DNA載量與CD8+T淋巴細胞百分比、Treg水平均呈正相關，與CD3+T淋巴細胞百分比、CD4+T淋巴細胞百分比和CD4+/CD8+比值均呈負相關，臨床應重點監(jiān)測上述指標。

【關鍵詞】乙型肝炎性原發(fā)性肝癌；乙型肝炎病毒DNA載量；免疫功能；調(diào)節(jié)性T細胞

【中圖分類號】R575 【文獻標識碼】A 【文章編號】2096-2665.2024.06.0028.03

DOI：10.3969/j.issn.2096-2665.2024.06.010

乙型肝炎病毒感染肝細胞后，病毒在細胞內(nèi)復制，導致細胞損傷和炎癥反應，長期炎癥刺激促使肝細胞不斷修復再生，從而增加癌變的可能性，導致乙型肝炎性原發(fā)性肝癌的發(fā)生[1]。乙型肝炎性原發(fā)性肝癌的發(fā)病過程中，免疫機制發(fā)揮著重要作用。腫瘤細胞能夠誘導免疫抑制，上調(diào)調(diào)節(jié)性T細胞（Treg）水平，并通過其特有的免疫抑制功能，可誘導腫瘤細胞發(fā)生免疫逃逸，導致患者預后不良[2]。近年來有報道顯示[3]，乙型肝炎病毒DNA載量可能通過誘導乙型肝炎性原發(fā)性肝癌患者免疫功能下降，進而促進腫瘤細胞生長和轉移，最終導致預后不良[4]。因此，早期發(fā)現(xiàn)和治療是改善患者預后的關鍵?；诖?，本研究主要觀察乙型肝炎性原發(fā)性肝癌患者乙型肝炎病毒DNA載量與免疫功能之間的關系，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2020年1月至2023年6月在廣寧縣人民醫(yī)院接受治療的87例乙型肝炎性原發(fā)性肝癌患者納入觀察組，另選取廣寧縣人民醫(yī)院體檢中心體檢的87例健康者納入對照組，進行回顧性分析。觀察組患者中男性60例，女性27例；年齡30～75歲，平均年齡（52.11±5.23）歲；BMI 20～27 kg/m2，平均BMI（23.33±1.05）kg/m2。對照組患者中男性58例，女性29例；年齡31～75歲，平均年齡（52.32±5.21）歲；BMI 21～28 kg/m2，平均BMI（23.41±1.06）kg/m2。兩組研究對象一般資料比較，差異無統(tǒng)計學意義（Pgt;0.05），具有可比性。根據(jù)TNM分期[5]將觀察組患者分為Ⅱ期組（38例）和Ⅲ期組（49例）。Ⅱ期組患者中男性26例，女性12例；年齡30～75歲，平均年齡（52.23±5.11）歲；BMI 21～27 kg/m2，平均BMI（23.45±1.13）kg/m2。Ⅲ期組患者中男性34例，女性15例；年齡31～75歲，平均年齡（52.25±5.12）歲；BMI 21～27 kg/m2，平均BMI（23.46±1.09）kg/m2。不同TNM分期患者一般資料比較，差異均無統(tǒng)計學意義（均Pgt;0.05），具有可比性。本研究經(jīng)廣寧縣人民醫(yī)院醫(yī)學倫理委員會批準。納入標準：⑴觀察組患者符合乙型肝炎性原發(fā)性肝癌的診斷標準[6]；⑵年齡≥30歲。排除標準：⑴合并嚴重心、腎等臟器疾病者；⑵合并神經(jīng)系統(tǒng)疾病者；⑶近期使用免疫抑制劑者；⑷合并其他惡性腫瘤者；⑸合并其他局部感染者。

1.2 研究方法 ⑴采集患者空腹肘靜脈血4 mL，置于含有0.2 mL肝素鈉抗凝真空管內(nèi)，搖勻后抽取100 μL全血與CD3+、CD4+和CD8+檢測試劑混合，室溫孵育15 min后，加入2 mL溶血素，混勻后繼續(xù)孵育，液面澄清后，在5 min內(nèi)以1 500 r/min轉速離心2次，取400 μL 鞘液重懸細胞。使用流式細胞儀（美國BD公司，型號：FACS Calibur），檢測T淋巴細胞亞群水平變化，主要包括CD3+、CD4+、CD8+T淋巴細胞百分比，檢測調(diào)節(jié)性T細胞（Treg）水平，計算CD4+/CD8+比值。采用滅菌一次性真空帶蓋塑料管，抽取患者肘靜脈血3 mL，離心（3 000 r/min，10 min，離心半徑12 cm）取血清分裝1.5 mL滅菌離心管，-2 ℃冰箱備用，使用熒光定量聚合酶鏈式反應（PCR）法檢測乙型肝炎病毒DNA載量。正常的乙型肝炎病毒DNA載量參考范圍lt;1 000 IU/mL。⑵TNM分期[5]：包括Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期、Ⅳ期等，分期越高表示腫瘤進展程度越高。

1.3 觀察指標 ⑴比較兩組研究對象T淋巴細胞亞群、Treg水平。⑵比較不同TNM分期患者乙型肝炎病毒DNA載量、T淋巴細胞亞群和Treg水平。⑶分析乙型肝炎病毒DNA載量與T淋巴細胞亞群水平的相關性。

1.4 統(tǒng)計學分析 采用SPSS 22.0統(tǒng)計學軟件處理數(shù)據(jù)。計量資料以（x）表示，采用t檢驗。以Plt;0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 兩組研究對象T淋巴細胞亞群、Treg水平比較 觀察組研究對象CD3+T淋巴細胞百分比、CD4+T淋巴細胞百分比、CD4+/CD8+比值比對照組更低，CD8+T淋巴細胞百分比、Treg水平比對照組更高，差異均有統(tǒng)計學意義（均Plt;0.05），見表1。

2.2 不同TNM分期患者乙型肝炎病毒DNA載量、T淋巴細胞亞群和Treg水平比較 Ⅲ期組患者乙型肝炎病毒DNA載量、CD8+T淋巴細胞百分比、Treg水平均高于Ⅱ期組，CD4+T淋巴細胞百分比、CD3+T淋巴細胞百分比、CD4+/CD8+比值均低于Ⅱ期組，差異均有統(tǒng)計學意義（均Plt;0.05），見表2。

2.3 乙型肝炎病毒DNA載量與T淋巴細胞亞群水平的相關性分析 乙型肝炎病毒DNA載量與CD8+T淋巴細胞百分比、Treg水平均呈正相關，與CD4+T淋巴細胞百分比、CD3+T淋巴細胞百分比、CD4+/CD8+比值均呈負相關（均Plt;0.05），見表3。

3 討論

乙型肝炎病毒是一種常見的嗜肝DNA病毒，可經(jīng)母嬰、血液、體液傳播[7]。乙型肝炎病毒主要侵襲肝細胞，并在肝細胞內(nèi)進行復制。乙型肝炎病毒感染后可導致機體免疫反應被激活，使實驗室指標異常，免疫應答參與乙型肝炎病毒感染后疾病進展，因此，乙型肝炎患者在患病時通常會表現(xiàn)出肝功能異常。如乙型病毒性肝炎未得到及時有效的治療，病情可能會逐漸進展，逐漸出現(xiàn)肝纖維化，進一步發(fā)展為肝硬化，嚴重者會引發(fā)癌變，嚴重威脅人類的身體健康。臨床試驗顯示，乙型肝炎性原發(fā)性肝癌患者的乙型肝炎病毒DNA載量與患者預后存在密切關系[8]。

本研究結果顯示，與對照組相比，觀察組研究對象CD4+T淋巴細胞百分比、CD3+T淋巴細胞百分比、CD4+/CD8+比值均較低，CD8+T淋巴細胞百分比、Treg水平均較高，提示乙型肝炎性原發(fā)性肝癌會導致患者機體免疫功能降低，細胞免疫失衡。究其原因在于乙型肝炎病毒感染后，免疫細胞的活性受到抑制，導致其對病毒的清除能力降低，使病毒在體內(nèi)持續(xù)復制，導致免疫調(diào)節(jié)因子失衡，進一步損害肝功能[9]。病毒復制不斷誘導機體免疫反應，導致不同程度的肝臟炎癥和細胞壞死，加重病情。T淋巴細胞在免疫系統(tǒng)中起著重要作用，人體內(nèi)主要有兩種類型的T淋巴細胞，其中一種稱為CD4+T淋巴細胞，位于T細胞表面，也被稱為免疫系統(tǒng)的輔助細胞，可以指導身體對抗病毒等微生物。CD3+T淋巴細胞代表外周血中成熟T細胞的總數(shù)，其數(shù)量變化可反映外周血單個核細胞中T淋巴細胞總數(shù)比例的變化。CD8+T淋巴細胞主要位于T輔助淋巴細胞上，當機體免疫系統(tǒng)遭受破壞后，CD4+T淋巴細胞降低，CD8+T淋巴細胞可以抑制和抗擊病毒感染，其增多常見于自身免疫性疾病、腫瘤、活動性肝炎等。CD4+/CD8+比值通常被用作評估免疫調(diào)節(jié)情況，當其比值減小時，通常提示機體免疫系統(tǒng)受損[10]。Treg能夠通過分泌細胞因子從而抑制T淋巴細胞，具有維持內(nèi)部平衡和預防自身免疫性疾病的功能。根據(jù)相關研究顯示，乙型肝炎病毒感染可導致免疫調(diào)節(jié)因子失衡，使免疫系統(tǒng)對病毒產(chǎn)生過度反應，引發(fā)炎癥反應，炎癥反應長期存在可能導致肝臟纖維化、肝硬化，最終發(fā)展成肝癌[11]。

本研究結果顯示，與Ⅱ期組相比，Ⅲ期組患者乙型肝炎病毒DNA載量、CD8+T淋巴細胞百分比、Treg水平均更高，CD4+T淋巴細胞百分比、CD3+T淋巴細胞百分比、CD4+/CD8+比值均更低，且乙型肝炎病毒DNA載量與CD8+T淋巴細胞百分比、Treg水平均呈正相關，與CD4+T淋巴細胞百分比、CD3+T淋巴細胞百分比、CD4+/CD8+比值均呈負相關，提示隨著乙型肝炎病毒感染加重，患者免疫功能受到嚴重影響，導致機體免疫功能無法有效作用于腫瘤細胞，從而使免疫監(jiān)視失效，進一步加速疾病進展[12]。乙型肝炎病毒會進一步導致T淋巴細胞數(shù)量的急劇下降，從而引發(fā)免疫功能失調(diào)，免疫功能失調(diào)使人體對疾病的抵抗能力降低[13]。

綜上所述，乙型肝炎病毒DNA載量與CD8+T淋巴細胞百分比、Treg水平均呈正相關，與CD4+T淋巴細胞百分比、CD3+T淋巴細胞百分比、CD4+/CD8+比值均呈負相關，臨床應重點監(jiān)測上述指標。

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