歐陽日威+張琪+曾慧+黃祺+劉思思+楊將

摘 要 辣椒素具有多種藥理生理學(xué)活性，對(duì)某些含有 P-物質(zhì)的感覺神經(jīng)系統(tǒng)、 心血管、體溫調(diào)節(jié)、胃腸機(jī)能有顯著影響；具有消炎止痛止癢、促進(jìn)脂肪代謝及保護(hù)胃腸等作用。本實(shí)驗(yàn)主要研究 辣椒素對(duì)小鼠免疫功能的影響。

關(guān)鍵詞 辣椒素 小鼠 免疫功能

中圖分類號(hào)：Q954.4 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

生活在潮濕陰冷、四季變化明顯地區(qū)的居民有特定的飲食習(xí)慣來增強(qiáng)自身免疫，達(dá)到御寒防潮目的。而在這些地區(qū)，人們普遍都存在吃辣椒的習(xí)慣，因此猜想這是否與他們長期食用辣椒存在關(guān)聯(lián)。而辣椒素是辣椒中的主要成分，因此通過研究辣椒素對(duì)小鼠免疫功能的作用，是否有增強(qiáng)小鼠免疫力的功效，具有一定的研究價(jià)值，實(shí)驗(yàn)報(bào)告如下：

1 材料與方法

1.1辣椒素

每粒500mg，純度為98%，由北京某公司提供，推薦成人抗炎日用量為20mg/kg，試驗(yàn)時(shí)將受試物配制成不同濃度。

1.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

清潔級(jí)昆明種小鼠120只，體重 21-25g，6-12周齡。

1.3主要儀器和試劑

全自動(dòng)酶標(biāo)儀（瑞士Tecan公司）；倒置顯微鏡（日本 Olympus公司）；細(xì)胞計(jì)數(shù)儀（德國Scharfe system公司）；RPMll640 培養(yǎng)液（美國Gibco公司）。

1.4劑量選擇

根據(jù)受試物推薦用量進(jìn)行劑量設(shè)計(jì)，分別以每天推薦用量的1、10和30倍作為低劑量（20mg/kg體重）、中劑量（200 mg/kg體重）和高劑量（600 mg/kg體重），同時(shí)設(shè)陰性對(duì)照組。

1.5實(shí)驗(yàn)方法及指標(biāo)測(cè)定

按照衛(wèi)生部《保健食品檢驗(yàn)與技術(shù)評(píng)價(jià)規(guī)范》（2003年[3中規(guī)定的方法。小鼠（昆明種，體重：20-25g，6-12周齡），將120只小鼠隨機(jī)分為 4 組，分別為3組低劑量、中劑量、高劑量陽性實(shí)驗(yàn)組，和1組生理鹽水陰性對(duì)照組（生理鹽水0.2ml/只）。1 次/天，連續(xù)30天后，做以下小鼠免疫功能指標(biāo)檢測(cè)。

（1）脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù)的測(cè)定：

脾臟指數(shù)=脾臟重量（mg）/體重（g）

胸腺指數(shù)=胸腺重量（mg）/體重（g）

（2）細(xì)胞免疫，淋巴細(xì)胞增殖能力的測(cè)定：

將小鼠處死，將脾臟取出，制成脾臟單細(xì)胞懸液，調(diào)整細(xì)胞濃度為3€？06 ml-1 ，將脾臟單細(xì)胞懸液加入96孔培養(yǎng)板，用MMT方法檢測(cè)增殖指數(shù)。

（3）體液免疫，血清溶血素（HC50）的測(cè)定：

取小鼠血液30 ml，將血液室溫靜置30min，2000rpm/min 離心 10min，吸取血清分裝，-20℃保存。血清經(jīng)處理，利用分光光度計(jì)在540nm波長測(cè)出樣品的吸光度值和綿羊紅細(xì)胞半數(shù)溶血時(shí)的吸光度值。血清溶血素含量以半數(shù)溶血值HC50表示，樣品管中半數(shù)溶血值HC50按下式計(jì)算：每只小鼠的血清HC50=（樣品的吸光度值/綿羊紅細(xì)胞半數(shù)溶血時(shí)的吸光度值）€紫∈捅妒？

1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用 SPSS 13.0 軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析，數(shù)據(jù)以x€眘 的形式表示。

2 結(jié)果

（1）辣椒素對(duì)小鼠臟體比值影響 各劑量組小鼠脾/體及胸腺/體比值與陰性對(duì)照組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05，表1）。

（2）辣椒素對(duì)小鼠細(xì)胞免疫功能的影響中、高劑量組小鼠足跖腫脹度值與陰性對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01或P<0.05），提示辣椒素具有增強(qiáng)小鼠遲發(fā)性變態(tài)反應(yīng)的功能。中、高劑量組小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖能力與陰性對(duì)照組比較，差異亦有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01或P<0.05，表2）。

（3）辣椒素對(duì)小鼠體液免疫功能的影響高劑量組小鼠溶血空斑數(shù)明顯高于陰性對(duì)照組，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），提示辣椒素具有增高小鼠抗體形成細(xì)胞數(shù)的作用。各劑量組小鼠血清半數(shù)溶血值（HC50）（下轉(zhuǎn)第171頁）（上接第168頁）與陰性對(duì)照組相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05，表3）。

3結(jié)論

在之前的研究表明，TRPV1參與介導(dǎo)炎癥條件下傷害性熱刺激引起的痛覺過敏。文獻(xiàn)表明，辣椒素治療可使SP的免疫反應(yīng)纖維減少，通過降低感覺神經(jīng)敏感性，緩解并消除變應(yīng)性鼻炎的炎癥反應(yīng)，從而達(dá)到治療效果。Tohda等研究表明，急性外周炎可減少背根神經(jīng)節(jié)中TRPV1的mRNA水平，增加TRPV1mRNA經(jīng)軸突向周圍和中樞末梢的轉(zhuǎn)運(yùn)。急性炎癥引起TRPV1在神經(jīng)末梢的表達(dá)上調(diào)，至少是由TRPV1mRNA的軸漿運(yùn)輸增加實(shí)現(xiàn)的。在急性炎癥中，背根神經(jīng)節(jié)的中樞端對(duì)辣椒素的敏感性增加。從而認(rèn)為TRPV1可能參與了初級(jí)傳入神經(jīng)對(duì)辣椒素的高敏性并調(diào)節(jié)炎性痛覺。

該試驗(yàn)則是擬通過細(xì)胞免疫功能和體液免疫功能觀察其對(duì)小鼠免疫功能的影響，試驗(yàn)結(jié)果顯示，辣椒素可顯著提高小鼠足跖腫脹度值、脾淋巴細(xì)胞增殖能力及脾臟抗體生成數(shù)，在小鼠細(xì)胞免疫試驗(yàn)結(jié)果呈陽性，表明辣椒素具有促進(jìn)小鼠免疫功能的作用。

研究結(jié)果表明，辣椒素可明顯提高機(jī)體免疫力，為相關(guān)制劑的進(jìn)一步研究開發(fā)提供有效的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。另外，研究結(jié)果還顯示，高劑量組在增加足跖腫脹度值和脾淋巴細(xì)胞增殖能力均不如中劑量組，推測(cè)其原因可能與作用濃度過高反而抑制了機(jī)體的吸收有關(guān)，其具體作用機(jī)制有待于進(jìn)一步研究。

參考文獻(xiàn)

[1] 張軍.辣椒素的藥理與臨床研究進(jìn)展[J].國外醫(yī)學(xué)中醫(yī)中藥分冊(cè)，1996，18（2）：8-11

[2] N orlanderT，BolgerWE，Stierna P，et al.A comparison ofmor？ phological effects on the rabbitnasal and sinusmucosa after surgi？ cal denervation and topical capsaicin application[J].EurA rchOtorhinolaryngo， 1996.253（4-5）：205-213.

[3] Tohda C，SasakiM，Konemura T，et al.Axonl transport ofVR1 capsaicin receptormRNA in pri mary afferents and itsparticipation in inflammation- induced increase in Capsaicin sensitivity[J]. J Neurochem，2001，76（6）： 1628-1635.