張清 馮序 房翠蘭 郭麗菊

摘 要：本文建立了高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（LC-MS/MS）同時(shí)測定豬肉中44種獸藥殘留的檢測方法。樣品中的4種四環(huán)素類、16種喹諾酮類、24種磺胺類化合物用1%甲酸乙腈溶液提取后，經(jīng)QuEChERS凈化，氮吹濃縮后通過C18色譜柱分離，并采用基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線法定量。結(jié)果表明44種化合物在2.0～100.0μg/kg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)R均大于0.995，加標(biāo)回收率在70.8%～106.2%之間，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.1%～8.1%（n=6）。該方法操作簡便、經(jīng)濟(jì)快速、靈敏準(zhǔn)確，適用于豬肉中多種獸藥殘留的快速篩查。

關(guān)鍵詞：QuEChERS，高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（LC-MS/MS），獸藥殘留

DOI編碼：10.3969/j.issn.1002-5944.2023.15.041

基金項(xiàng)目：本文受重慶市公共衛(wèi)生重點(diǎn)?？疲▽W(xué)科）建設(shè)經(jīng)費(fèi)資助。

Determination of 44 Veterinary Drugs Residues in Pork by QuEChERS-LCMS/MS Method

ZHANG Qing1 FENG Xu1 FANG Cui-lan1 GUO Li-ju2*

（1. Chongqing Jiulongpo District Center for Disease Control and Prevention； 2. Haiyuan College， Kunming Medical University）

Abstract： A high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry （LC-MS/MS） method was developed for the simultaneous determination of 44 veterinary drug residues in pork. Four tetracyclines， 16 quinolones and 24 sulfonamides in the sample were extracted with 1% formic acid acetonitrile solution and purifi ed by QuEChERS method. The concentrated solution after nitrogen blowing was separated by C18 chromatographic column and quantified by matrix standard curve method. The results showed that the linear range was from 2.0 μg/kg to 100.0 μg/kg and the correlation coefficient was greater than 0.995. The recoveries were 70.8%～106.2% ， and the relative standard deviations （RSD， n=6） were 1.1%～8.1%. The method is simple， economical， rapid， sensitive and accurate， which can be applied to rapid screening of veterinary drug residues in pork.

Keywords： QuEChERS， high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry （LC-MS/MS）， veterinary drug residues

0 引 言

我國是豬肉生產(chǎn)和消費(fèi)大國，為防治生豬疫病、促進(jìn)生長和繁殖，獸藥被普遍使用在養(yǎng)殖中。為追求經(jīng)濟(jì)利益，養(yǎng)殖戶不合理或違規(guī)濫用獸藥，導(dǎo)致藥物殘留超標(biāo)引發(fā)食品安全的事件時(shí)有發(fā)生[1]。長期攝入獸藥殘留超標(biāo)的動物制品后，藥物在人體中蓄積，因產(chǎn)生毒性反應(yīng)會危害人體健康等[2]。

GB 31658.17-2021《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 動物性食品中四環(huán)素類、磺胺類和喹諾酮類藥物殘留量的測定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》可用于測定豬肉中36種獸藥殘留，但標(biāo)準(zhǔn)中樣品前處理方法耗時(shí)長、有機(jī)溶劑損耗大、成本較高，不能滿足獸藥殘留快速檢測需求。QuEChERS方法是一種基于固相萃取和基質(zhì)固相分散技術(shù)的預(yù)處理方法，因快速、簡單、低廉、有效、穩(wěn)定和安全等特點(diǎn)，在獸藥殘留檢測中廣泛應(yīng)用[3]。本文采用QuEChERS方法對豬肉樣品進(jìn)行前處理，采用高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法對豬肉中的4種四環(huán)素類、16種喹諾酮類、24種磺胺類獸藥殘留進(jìn)行同時(shí)檢測，建立豬肉中多種獸藥殘留同時(shí)快速檢測的方法。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 主要設(shè)備與試劑

主要設(shè)備：高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀（Triple Quad 5500）；電子天平（SQP SECURA2250-1CN）；超聲波清洗器（KQ-500DE）；高速離心機(jī)（Avanti J-30I）。

試劑：四環(huán)素（純度99.8%）、強(qiáng)力霉素（純度99.9%）、土霉素（純度96.0%）、金霉素（純度93.0%）、酞磺胺噻唑（純度99.7%）、馬波沙星（純度99.8%）購于壇墨質(zhì)檢科技股份有限公司；23種磺胺混標(biāo)（100 mg/L）、15種喹諾酮混標(biāo)（100 mg/ L）購于上海安譜實(shí)驗(yàn)科技股份有限公司；N-丙基乙二胺吸附劑（PSA）、十八烷基鍵合硅膠吸附劑（Cl8），購于美國Supeco公司；甲酸、乙腈、甲醇，均為色譜純，購于北京百靈威科技有限公司。

1.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配置

稱取適量各標(biāo)準(zhǔn)品（活性成分約10 mg）置于10 mL容量瓶中，四環(huán)素類、酞磺胺噻唑加甲醇溶解并稀釋至刻度，馬波沙星加0.03 mol/L氫氧化鈉溶液溶解并稀釋至刻度，得到標(biāo)準(zhǔn)儲備液（1 mg/mL）。分別移取一定體積的標(biāo)準(zhǔn)儲備液、23種磺胺混標(biāo)和15種喹諾酮混標(biāo)，用甲醇稀釋成濃度為1 mg/L的44種混合標(biāo)準(zhǔn)使用液。

1.3 樣品前處理

稱取2.0 g 均勻的試樣于50 mL塑料離心管，準(zhǔn)確加入1%甲酸乙腈溶液10 mL，渦旋1 min，超聲振蕩30 min。試樣中加入1 g NaCl和4 g無水MgSO4，振蕩5 min，10000 r/min離心10 min。取上清液，加入PSA 50 mg、C18 150 mg、NaSO4 900 mg ，振蕩5 min，10，000 r/min離心5 min。取凈化后上清液5 mL，40 ℃氮吹至干，加入流動相定容至1 mL，渦旋溶解。樣液通過0.22 μm濾膜，待LC-MS/MS測定。

1.4 基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

稱取7份2.0 g陰性試樣于50 mL塑料離心管，分別加入0、4、10、20、40、100、200 μL的混合標(biāo)準(zhǔn)使用液（1 mg/L），按1.3進(jìn)行前處理，得到濃度分別為0、2、5、10、20、50和100 μg/kg的系列基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線，待LC-MS/MS測定。

1.5 LC-MS/MS條件

1.5.1 色譜條件

色譜柱：Thermo Hypersil Gold（2.1 mm×50 mm，1.8μm）；流速：0.3 mL/min，柱溫35℃，進(jìn)樣量6 μL；流動相A：0.1%甲酸水溶液；流動相B：甲醇與乙腈的體積比為2：8，含0.1%甲酸。洗脫梯度程序?yàn)锳：B=0.00（95：5），2.00（90：10），5.00（85：15），8.00（50：50），9.00（0：100），9.40（0：100），9.50（95：5），10.00（95：5）。

1.5.2 質(zhì)譜條件

離子源：電噴霧離子源ESI；掃描方式：正離子模式；檢測方式：多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）；離子源溫度（TEM）：350 ℃；電噴霧電壓（IS）：5500 V；氣簾氣壓力（CUR）：35 psi；霧化氣壓力（GS1）：50 psi；輔助氣壓力（GS2）：50 psi；碰撞氣（CAD）：7 mL/min。

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果討論

2.1 質(zhì)譜條件

取含量為100 μg/kg的基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液注入LCMS/MS，對待測物的母離子、子離子、去簇電壓等條件進(jìn)行優(yōu)化，得到待測物的檢測參數(shù)，結(jié)果見表1。

2.2 方法學(xué)結(jié)果

在最優(yōu)儀器參數(shù)下測定1.4中的基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液，每個(gè)濃度平行測定3次。以濃度為橫坐標(biāo)（X），峰面積為縱坐標(biāo)（Y），繪制基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)曲線和計(jì)算回歸方程。結(jié)果見表2，在2.0 ～ 100.0 μg/kg范圍內(nèi)， 44種待測物具有良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)不低于0.995。

通過降低加入空白豬肉基質(zhì)的混合標(biāo)準(zhǔn)使用溶液含量，按1.3進(jìn)行前處理后得到低濃度基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液。根據(jù)10倍信噪比，可得到乙酰磺胺（SFM）、磺胺嘧啶（SDZ）、磺胺間甲氧嘧啶（SMM）、洛美沙星（LOM）的定量限為5.0 μg/kg，其他40個(gè)待測物的定量限均為2.0 μg/kg，說明該方法靈敏度較高，可滿足對豬肉中的獸藥殘留進(jìn)行快速篩查的要求。

向陰性豬肉基質(zhì)中添加低濃度（5 μg /kg）、中濃度（50 μg /kg）、高濃度（100 μg /kg）的混合標(biāo)準(zhǔn)使用溶液，按1.3進(jìn)行前處理，每組濃度平行6次實(shí)驗(yàn)，再計(jì)算加標(biāo)回收率和相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）。結(jié)果表明，44種待測物的平均加標(biāo)回收率為70.8%～106.2%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為1.1% ～ 8.1%。

2.3 實(shí)際樣品的測定

用建立的方法對市場上購買的30批次豬肉進(jìn)行測定。結(jié)果表明：喹諾酮類、磺胺類藥物殘留量均小于定量限；有5個(gè)批次樣品檢測出強(qiáng)力霉素，其含量在20 ～ 50 μg/kg。

3 結(jié) 論

本文結(jié)合QuEChERS前處理方法，建立了LCMS/MS方法實(shí)現(xiàn)豬肉中多種獸藥殘留的快速測定。樣品采用1%甲酸乙腈提取，經(jīng)QuEChERS凈化，通過C18色譜柱在10 min內(nèi)完成44種獸藥的分析。采用基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線法定量，待測物在2.0 ～ 100.0 μg/kg范圍內(nèi)線性良好，回收率在70.8% ～106.2%，RSD在1.1% ～ 8.1%。該方法簡單快捷、經(jīng)濟(jì)高效、準(zhǔn)確靈敏，可為豬肉安全監(jiān)管提供技術(shù)支持。

參考文獻(xiàn)

[1]史艷艷，王俊菊.畜禽養(yǎng)殖業(yè)獸藥使用現(xiàn)狀及建議[J].畜牧獸醫(yī)科學(xué)（電子版），2021（5）：185-186.

[2]杜軍，曾曉，賈榮玲.畜禽飼養(yǎng)中獸藥殘留的原因、危害及防控措施[J].山西農(nóng)經(jīng)，2020（16）：134-135.

[3]王玉梅，孫健，于泓，等.動物源性食品中獸藥殘留檢測技術(shù)的研究進(jìn)展[J].食品工業(yè)，2021 （6）：414-47.

作者簡介

張清，碩士，高級工程師，研究方向?yàn)榛瘜W(xué)分析檢測。

郭麗菊，通信作者，碩士，講師，研究方向?yàn)榛瘜W(xué)分析、化學(xué)教育。

（責(zé)任編輯：袁文靜）