廖正豐 譚志元

關(guān)鍵詞：質(zhì)譜技術(shù);臨床微生物實(shí)驗(yàn)室;應(yīng)用

【中圖分類號(hào)】Q93 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A 【文章編號(hào)】1673-9026（2022）10--01

前言

微生物實(shí)驗(yàn)在臨床疾病診斷、治療中具備較高實(shí)施必要性，原因在于通過開展微生物試驗(yàn)，可檢出致病菌、菌種及類型，同時(shí)明確患者病情進(jìn)展情況，由此指導(dǎo)臨床制定適宜治療方案，有助于臨床診療工作開展[1-2]。質(zhì)譜分析法是通過對(duì)被測(cè)樣品離子的質(zhì)荷比的測(cè)定來進(jìn)行分析的一種分析方法。對(duì)微生物具備鑒定作用，檢測(cè)時(shí)使樣品中的分析物在離子源中發(fā)生電離，生成不同電離分子質(zhì)荷比的帶電荷離子，經(jīng)加速電場(chǎng)的作用，形成離子束，進(jìn)入質(zhì)量分析器。質(zhì)量分析器將同時(shí)進(jìn)入其中的不同質(zhì)量的離子，按質(zhì)荷比m＼z大小分離。分離后的離子依次進(jìn)入離子檢測(cè)器，采集放大離子信號(hào)，經(jīng)過計(jì)算機(jī)處理，繪制成質(zhì)譜圖。以此分析生物分子，鑒別微生物類型。應(yīng)用質(zhì)譜技術(shù)與臨床微生物實(shí)驗(yàn)室微生物檢測(cè)當(dāng)中，經(jīng)由該技術(shù)檢測(cè)，能夠在短時(shí)間內(nèi)對(duì)微生物類型做到檢出，具有檢測(cè)效率高、精準(zhǔn)度良好等特點(diǎn)，相比其他檢測(cè)方式，應(yīng)用效果具備優(yōu)勢(shì)[3-4]?；诖耍敬螌?duì)臨床微生物實(shí)驗(yàn)室中質(zhì)譜技術(shù)的應(yīng)用進(jìn)展開展分析，現(xiàn)做報(bào)告，內(nèi)容如下：

1.MALDL-TOF-MS技術(shù)分析

臨床微生物實(shí)驗(yàn)室對(duì)微生物檢測(cè)具備適用性的檢測(cè)方式多樣，既往行檢測(cè)期間，多以傳統(tǒng)微生物鑒定方式進(jìn)行檢測(cè)，經(jīng)由染色、觸酶、氧化酶等操作，分辨菌種類型[5-6]。雖然該方式具備微生物鑒定作用，但檢測(cè)耗時(shí)較長(zhǎng)，加之工作人員操作、環(huán)境因素等影響，其檢出結(jié)果準(zhǔn)確性略顯不足。MALDL-TOF-MS技術(shù)在對(duì)微生物進(jìn)行檢測(cè)期間，其對(duì)菌種具備較高敏感性及高分辨率，易于區(qū)分鑒別存在相似性的菌株[7]。在檢測(cè)過程中，基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時(shí)間質(zhì)譜（MALDL-TOF-MS）技術(shù)操作便捷，受環(huán)境及外在因素影響較小，因此檢測(cè)所得結(jié)果精準(zhǔn)度較高，在臨床疾病診斷中能夠?yàn)槠涮峁┛煽恳罁?jù)。MALDL-TOF-MS技術(shù)原理是以激光激發(fā)方式使靶板上微生物與基質(zhì)的蛋白質(zhì)進(jìn)入真空飛行管，使用檢測(cè)器，對(duì)其飛行時(shí)間進(jìn)行匯總，構(gòu)建曲線圖譜，比對(duì)數(shù)據(jù)庫中信息，分辨微生物種類[8]。在臨床中，MALDL-TOF-MS技術(shù)能夠?qū)Χ喾N類型菌種做準(zhǔn)確檢出，但在既往應(yīng)用中發(fā)現(xiàn)，該項(xiàng)技術(shù)并不適用于沙門和志賀鑒定存在不足，檢出率不及預(yù)期，因此屬該項(xiàng)檢測(cè)所存弊端[9]。

2.質(zhì)譜檢測(cè)法的原理與發(fā)展

質(zhì)譜檢測(cè)法是以質(zhì)譜儀離子源電離效應(yīng)為原理所誕生的檢測(cè)技術(shù)，在行檢測(cè)期間，質(zhì)譜儀離子源通過電離效應(yīng)對(duì)目標(biāo)物釋放能量，目標(biāo)物對(duì)能量進(jìn)行吸收后，將產(chǎn)生離子化效能，將其帶入質(zhì)譜儀，由質(zhì)譜儀捕捕捉帶電粒子信號(hào)，所取得信號(hào)比較標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)圖譜信息，即可對(duì)為樣本中微生物類型做出鑒別，從而做出診斷[10-11]。相比臨床微生物實(shí)驗(yàn)室其他微生物檢測(cè)方式，質(zhì)譜檢測(cè)法微生物檢測(cè)作用、菌種鑒別效果等方面均具備優(yōu)勢(shì)性，且在醫(yī)療科技不斷發(fā)展的今天，質(zhì)譜檢測(cè)法技術(shù)逐漸得到完善，因此在檢測(cè)過程中，質(zhì)譜檢測(cè)法檢測(cè)時(shí)效性、菌種檢出率、準(zhǔn)確性等方面均顯著提升，由此滿足臨床疾病診療中及時(shí)開展救治的工作需求，同時(shí)有助疾病確診，增進(jìn)診療工作開展準(zhǔn)確性，具備良好檢測(cè)實(shí)施效果，在微生物檢測(cè)中，質(zhì)譜檢測(cè)法具備較高實(shí)施必要性[12-13]。

3.目前MALDL-TOF-MS技術(shù)的應(yīng)用現(xiàn)狀

MALDL-TOF-MS技術(shù)是以菌種檢出類型多樣、檢測(cè)效率高、檢測(cè)精準(zhǔn)度良好等為技術(shù)優(yōu)勢(shì)，行檢測(cè)時(shí)，經(jīng)由電離技術(shù)、能量吸收、探測(cè)器采集離子飛行時(shí)間等，鑒別菌種類型，以實(shí)現(xiàn)高效、快速鑒定菌種的檢測(cè)目的，技術(shù)優(yōu)勢(shì)性明顯[14]。隨著現(xiàn)今藥物濫用、不合理用藥等情況發(fā)生幾率升高，致病菌變異情況屢見不鮮，致病菌菌種變異后，其傳播幾率、感染幾率及耐藥性等方面均將大幅度提升，由此造成臨床救治工作開展困難性，不利于患者疾病康復(fù)[15]。采用MALDL-TOF-MS技術(shù)實(shí)施微生物檢測(cè)，首先，MALDL-TOF-MS技術(shù)能夠?qū)N進(jìn)行鑒別，區(qū)分其類型，對(duì)疾病致病成因檢出具有促進(jìn)作用;其次，MALDL-TOF-MS技術(shù)檢測(cè)鑒定菌種，能夠輔助臨床對(duì)治療藥物進(jìn)行合理選擇，準(zhǔn)確規(guī)劃藥物使用劑量，因此對(duì)患者康復(fù)能夠產(chǎn)生間接影響;最后，MALDL-TOF-MS技術(shù)鑒定所需樣本量極少，且檢測(cè)效率較高，操作便捷、準(zhǔn)確性良好，綜合應(yīng)用價(jià)值遠(yuǎn)高于其他檢測(cè)方式[16]。

4.質(zhì)譜技術(shù)在臨床微生物實(shí)驗(yàn)室中的應(yīng)用

4.1 真菌鑒定

真菌屬真核微生物，其形態(tài)、組織結(jié)構(gòu)等均較其他類型微生物存在明顯差異性。采用質(zhì)譜技術(shù)對(duì)真菌實(shí)施鑒定，不同類型、品種的菌種在檢測(cè)結(jié)果檢出率及鑒定準(zhǔn)確性等均存在差異性。行檢測(cè)期間，真菌菌絲、分生孢子及其形態(tài)等方面，在檢測(cè)期間對(duì)蛋白質(zhì)譜造成一定影響，如癬菌、小柱孢屬菌等菌種檢測(cè)，期間并未能獲取質(zhì)譜信號(hào)，由此造成鑒定誤差，影響檢測(cè)結(jié)果。而酵母菌、格特隱球菌等菌種檢測(cè)中，質(zhì)譜技術(shù)能夠?qū)ζ渥龅骄珳?zhǔn)檢出，同時(shí)在檢測(cè)中菌種類型，對(duì)該類菌種檢出率、鑒別精準(zhǔn)度等方面均良好。因此在真菌鑒定中，質(zhì)譜技術(shù)具備一定應(yīng)用價(jià)值，對(duì)部分菌種鑒定具備適用性，需根據(jù)實(shí)際情況做合理使用[17-18]。

4.2 血液及體液標(biāo)本的培養(yǎng)鑒定

臨床微生物實(shí)驗(yàn)室行檢測(cè)期間，所用檢測(cè)樣本可分為血液、體液兩大類，進(jìn)一步劃分，體液還可分為尿樣、腦脊液、滲出液、分泌物等多種類型，對(duì)血液及體液標(biāo)本進(jìn)行鑒定，首選需對(duì)樣本中菌種進(jìn)行取樣、培養(yǎng)，以便于后續(xù)檢測(cè)操作，從而檢測(cè)、鑒別菌種類型。通過既往臨床行檢測(cè)觀察發(fā)現(xiàn)，血液樣本行質(zhì)譜技術(shù)檢測(cè)，革蘭陰性菌檢出率較高，而革蘭陽性菌檢出率略低;體液樣本檢測(cè)中，處理樣本所用溶液對(duì)菌種鑒定結(jié)果存在影響性，由此導(dǎo)致部分菌種鑒定準(zhǔn)確率下降，如尿液樣本中大腸埃希菌、腦脊液樣本中肺炎鏈球菌等，菌種類型鑒定結(jié)果不佳，不利于臨床疾病確診，因此在菌種鑒定中，根據(jù)患者疾病癥狀反應(yīng)，合理選取檢測(cè)樣本進(jìn)行檢測(cè)，有助于質(zhì)譜技術(shù)對(duì)致病菌檢測(cè)、鑒定作用發(fā)揮[19]。

4.3 ?厭氧菌鑒定

厭氧菌是臨床中常見致病菌種類型，是導(dǎo)致血液感染及組織器官感染等疾病只要致病成因，厭氧菌以能在無氧環(huán)境下滋生、增殖為主要特點(diǎn)，于人體免疫系統(tǒng)薄弱時(shí)，易誘發(fā)人體炎癥反應(yīng)，從而導(dǎo)致疾病發(fā)生。厭氧菌菌種類型多樣，且致感染幾率高，且不同菌種需采用不同類型抗生素類藥物，方可達(dá)到疾病治療目的。因此，采用質(zhì)譜技術(shù)對(duì)厭氧菌進(jìn)行鑒定，采集檢測(cè)樣本后，采用MALDL-TOF-MS檢測(cè)儀對(duì)樣本進(jìn)行檢測(cè)分析，60分鐘至120分鐘內(nèi)即可獲取菌種鑒定結(jié)果，明確樣本中所感染厭氧菌菌株類型，菌種檢出率及鑒定準(zhǔn)確率均較高，在厭氧菌鑒定中，質(zhì)譜技術(shù)具備極佳檢測(cè)效果[20]。

4.4 細(xì)菌鑒定

應(yīng)用質(zhì)譜技術(shù)對(duì)細(xì)菌進(jìn)行檢測(cè)，相比傳統(tǒng)檢測(cè)方式，檢測(cè)所需樣本量較小，取樣后，經(jīng)由細(xì)菌分離、培養(yǎng)，可對(duì)腸桿菌科、發(fā)酵型革蘭陰性桿菌、葡萄球菌、鏈球菌、酵母菌等多種菌種做到準(zhǔn)確檢出及類型鑒別，檢測(cè)準(zhǔn)確率較高。但部分細(xì)菌菌種檢測(cè)中，質(zhì)譜技術(shù)檢測(cè)符合率略顯不足，以沙門菌科和志賀菌科等檢測(cè)結(jié)果未能達(dá)到預(yù)期，這一情況的發(fā)生，以細(xì)菌親緣關(guān)系相近、殊蛋白指紋圖譜峰特征不明顯為主要原因，因此在對(duì)細(xì)菌菌種進(jìn)行鑒別中，質(zhì)譜技術(shù)還需做進(jìn)一步完善。

結(jié)束語

質(zhì)譜技術(shù)在臨床微生物實(shí)驗(yàn)室中，具有一定應(yīng)用價(jià)值，該項(xiàng)技術(shù)可對(duì)真菌、厭氧菌、部分細(xì)菌等菌種類型做到準(zhǔn)確檢出，通過將所獲取質(zhì)譜數(shù)據(jù)與細(xì)菌庫標(biāo)準(zhǔn)菌株圖譜進(jìn)行比較，即可對(duì)菌種類型進(jìn)行鑒別，以此發(fā)揮質(zhì)譜技術(shù)菌種鑒定功能。為進(jìn)一步提高質(zhì)譜技術(shù)在臨床微生物實(shí)驗(yàn)室中應(yīng)用價(jià)值，完善細(xì)菌庫標(biāo)準(zhǔn)菌株圖譜，豐富數(shù)據(jù)數(shù)量，以此為菌種鑒別提供更多參考數(shù)據(jù)，以此提高菌種檢出數(shù)量及鑒別精準(zhǔn)度，從而在微生物檢測(cè)中，使質(zhì)譜技術(shù)優(yōu)勢(shì)性能夠得到充分發(fā)揮。

綜上，臨床微生物實(shí)驗(yàn)室菌種檢測(cè)中，質(zhì)譜技術(shù)具備良好應(yīng)用效果，較其他檢測(cè)技術(shù)更具菌種鑒別優(yōu)勢(shì)性。

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