□ 吳兆根 吉林醫(yī)藥學(xué)院

啤酒花，學(xué)名Humulus Lupulus L，別明蛇麻草、陀得花、唐草花、忽布與酵母花等，是?？撇輰俣嗄晟葙|(zhì)蔓生藤本植物，其雌性球穗花序簡(jiǎn)稱酒花。主要產(chǎn)地在美國(guó)、歐洲、澳大利亞、南美洲和中國(guó)。我國(guó)啤酒花人工栽培已有半個(gè)世紀(jì)的歷史，主要分布于華東、西北、東北等地，現(xiàn)已在甘肅、新疆、遼寧等地建立了較大的啤酒花原料生產(chǎn)基地[1]。

1 材料和方法

1.1 材料與試劑

啤酒花：來源吉林醫(yī)藥學(xué)院種植園、石油醚（天津市富宇精細(xì)化工有限公司）、蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品（中國(guó)藥品生物制品檢定所）、亞硝酸鈉（北京化工廠）、硝酸鋁（北京化工廠）、氫氧化鈉（北京化工廠）、維生素C（國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）。

1.2 實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備

FA1104N電子天平（廣州滬瑞明儀器有限公司）、微型植物粉碎機(jī)FZ102（天津市泰斯特儀器有限公司）、數(shù)控超聲波清洗器KQ—500DB（上海越眾儀器設(shè)備有限公司）、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器R—201D（上?？粕齼x器有限公司）、722型可見分光光度計(jì)（上海菁華科技儀器有限公司）。

1.3 樣品處理

啤酒花自然陰干后于50 ℃烘箱中干燥12 h，粉碎過60目篩。精確稱取8.0 g樣品，石油醚為提取劑，索氏提取脫脂去葉綠素，提取條件3 h、59 ℃，提取完成后，于65 ℃恒溫干燥20 min去除殘留醚。加入乙醇進(jìn)行提取。提取條件[2]：乙醇體積濃度40%，料液比1∶40（g/mL），提取溫度60 ℃，超聲波功率200 W，提取時(shí)間40 min。過濾，殘?jiān)偬崛∫淮危喜纱翁崛∫?，減壓濃縮，乙醇定容到500 mL，待用。

1.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制定

配置濃度為150 μg/mL的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液，精密吸取0.00、0.50、1.00、2.00、3.00 mL與4.00 mL應(yīng)用液移入10 mL容量瓶中，加入30%乙醇溶液至5 mL，加入0.3 mL質(zhì)量濃度為5 %的NaNO2溶液，振蕩6 min，加入0.3 mL濃度為10%的Al（NO3）3，待其反應(yīng)6 min后，再加入2 mL濃度為1.0 mol/L的NaOH溶液，即刻用30%的乙醇定容，搖勻后，放置15 min，充分反應(yīng)后，于510 nm處測(cè)定吸光度，以0號(hào)管為空白調(diào)零，以濃度（μg/mL）為橫坐標(biāo)，吸光值（As）為縱坐標(biāo)，繪制曲線，得蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線線性方程[3]。

1.5 體外抗氧化活性

精確稱取0.003 9 g DPPH移入100 mL容量瓶中，加入95%乙醇溶液溶解，定容，配制成0.1 mmol/L DPPH乙醇溶液，置于暗處保存。向試管中加入1.5 mL 0.1 mmol/L 的DPPH乙醇溶液和1.5 mL不同濃度梯度的樣品溶液（同濃度的VC溶液作陽性對(duì)照），混合，振蕩，在室溫和避光條件下使其反應(yīng)30 min后，于517 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度（A1）。以空白試劑作對(duì)照，DPPH自由基清除率按照公式（1）進(jìn)行計(jì)算[4]。

清除率 =（A0—A1）/A0×100% （1）

式（1）中：A0為DPPH乙醇溶液的吸光度（As）。

2 結(jié)果

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線方程及相關(guān)性

蘆丁可以和Al3+配合形成穩(wěn)定的黃色配合物，該配合物在堿性溶液中呈紅色，最大吸收波長(zhǎng)為510 nm，可用分光光度法測(cè)定其含量。得到標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為：y=0.014 1x—0.005 7，R2=0.999 7。啤酒花中總黃酮的含量為41.81 mg/g，提取率為4.18%。

2.2 DPPH自由基清除能力測(cè)定結(jié)果

以VC為對(duì)照，測(cè)定了啤酒花總黃酮對(duì)DPPH自由基的清除能力。結(jié)果表明，啤酒花總黃酮及VC對(duì)DPPH自由基具有一定的清除能力，且對(duì)DPPH自由基的清除率都隨著樣品濃度的增加而增加，呈現(xiàn)較好的量效關(guān)系。結(jié)果詳見下圖1。

圖1 DPPH自由基清除能力測(cè)定

3 結(jié)論

當(dāng)啤酒花總黃酮的濃度從0增加到17.5 μg/mL時(shí)，其去除DPPH自由基的能力從0%增加到82.43%，但當(dāng)濃度高于17.5 μg/mL時(shí)，其去除DPPH自由基的能力沒有顯著性增加。當(dāng)VC的濃度從0 μg/mL增加到20 μg/mL時(shí)，其去除DPPH自由基的能力從0%增加到92.44%，但當(dāng)濃度高于20 μg/mL時(shí)，其去除DPPH自由基的能力沒有顯著性增加。

在本試驗(yàn)條件下，啤酒花總黃酮對(duì)DPPH自由基的清除能力在濃度低于16.5 μg/mL時(shí)強(qiáng)于VC，其原因是啤酒花總黃酮中的查爾酮是C環(huán)的1、2位鍵斷裂生成的開環(huán)衍生物，因其C環(huán)開環(huán)，使其抗氧化作用增強(qiáng)[5]；濃度高于16.5 μg/mL時(shí)弱于VC，其原因需進(jìn)一步探索。