林舉達(dá) 熊素素 葉小清 吳鵬 謝丹萍 梁道蘭

（1 廣東醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院精神心理科 廣東 湛江 524000）

（2 廣東省湛江市原佳彩印包裝材料有限公司微生物檢驗室 廣東 湛江 524000）

抗瘧藥用于治療系統(tǒng)性紅斑狼瘡(systemic lupus erythematosus,SLE)已有100多年的歷史[1]，其中羥氯喹是一種喹諾酮類抗瘧藥，其主要成分是4-氨基喹啉，羥氯喹可通過抑制抗原呈遞、阻斷Toll樣受體的活性等發(fā)揮免疫抑制作用，同時還有光保護(hù)作用，減少紫外線照射后皮膚中白細(xì)胞介素6,白細(xì)胞介素1β和腫瘤壞死因子α的mRNA的產(chǎn)生，從而抑制皮膚炎癥介質(zhì)的產(chǎn)生, 該藥是目前治療SLE的基礎(chǔ)藥物[2,3]。而同樣作為抗瘧藥的青蒿素對SLE也有治療作用，近期屠呦呦科研團(tuán)隊提出雙氫青蒿素片增加SLE適應(yīng)癥的新藥申請，并通過國家食品藥品監(jiān)督管理總局審批，獲得藥物臨床試驗批件[4]。本研究選取羥氯喹和青蒿素做微生物抑制實驗，探討其在體外的抑菌作用，為臨床應(yīng)用提供實驗依據(jù)。

1.資料與方法

1.1 一般資料

1.1.1 藥物試劑 頭孢呋辛酯片（0.25g/片）；硫酸羥氯喹片（0.1g/片)；98%青蒿素純品。

1.1.2 微生物 含有多種混合細(xì)菌生長的消防水。

1.1.3 試劑與儀器 無菌超凈工作臺；立式高壓滅菌鍋；生化培養(yǎng)箱；胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基；烘箱；吸管；無菌鑷子；培養(yǎng)皿等。

1.2 體外抑菌實驗

1.2.1 配置培養(yǎng)基 加蒸餾水1000ml到容量為1000ml的無菌燒瓶中，并稱取胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基40g放入燒瓶中，常溫溶解，搖勻，再放入高壓滅菌鍋經(jīng)121℃高壓滅菌15min，經(jīng)冷卻后備用。

1.2.2 藥液的制備 取頭孢呋辛酯片0.25g、硫酸羥氯喹0.1g及青蒿素20mg分別置于無菌培養(yǎng)皿中，再用吸管吸取1ml無菌生理鹽水加入各培養(yǎng)皿中，放置大約20分鐘至藥物完全溶解。

1.2.3 微生物抑制實驗 向盛放各藥液的培養(yǎng)皿中分別加入1ml消防水，用玻璃棒攪勻，再加入25ml培養(yǎng)基，然后另取一培養(yǎng)皿加入1ml消防水和25ml培養(yǎng)基，最后將所有接種好的培養(yǎng)皿置于溫度為35℃生化培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)三天后檢測菌落數(shù)。

2.實驗結(jié)果

培養(yǎng)的第3天檢測菌落數(shù)：頭孢呋辛酯片0cfu；硫酸羥氯喹0cfu、青蒿素2cfu、消防水25cfu。培養(yǎng)的第4天檢測菌落數(shù)：頭孢呋辛酯片0cfu；硫酸羥氯喹0cfu、青蒿素3cfu、消防水56cfu。培養(yǎng)的第5天檢測菌落數(shù)：頭孢呋辛酯片0cfu；硫酸羥氯喹0cfu、青蒿素3cfu、消防水249cfu。本實驗結(jié)果顯示：羥氯喹和青蒿素均有類似于頭孢呋辛酯的體外抑制細(xì)菌生長的作用。

表 藥物微生物抑制實驗結(jié)果

3.討論

SLE是臨床上常見的自身免疫系統(tǒng)性疾病，此病常引起患者身體多個系統(tǒng)及器官損傷，病情嚴(yán)重時甚至可導(dǎo)致患者死亡[5]。目前該病的發(fā)病機(jī)制尚不明確，有研究者認(rèn)為，此病的發(fā)生是在遺傳因素、環(huán)境因素和雌性激素的相互作用下，引起機(jī)體的免疫系統(tǒng)出現(xiàn)紊亂，使其自身產(chǎn)生大量的T、B細(xì)胞，導(dǎo)致機(jī)體的淋巴細(xì)胞被異?；罨a(chǎn)生大量抗體，并與其體內(nèi)的自身抗原結(jié)合，形成免疫復(fù)合物，進(jìn)而導(dǎo)致多系統(tǒng)及器官的嚴(yán)重?fù)p傷[6]。還有部分學(xué)者認(rèn)為，遺傳因素、感染、內(nèi)分泌失調(diào)和免疫系統(tǒng)異常均與SLE的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)[7]。羥氯喹能通過抑制細(xì)胞膜中溶酶體的活性，從而增強(qiáng)溶酶體的穩(wěn)定性，同時還對淋巴細(xì)胞、TNF及IL-1A具有明顯的阻滯作用，可以消除炎性介質(zhì)，從而發(fā)揮治療SLE的作用[8]。而青蒿素及其衍生物則具有雙向免疫調(diào)節(jié)作用，對于治療SLE等自身免疫性疾病有確切的療效，屠呦呦科研團(tuán)隊通過雙氫青蒿素治療自發(fā)型系統(tǒng)性紅斑狼瘡小鼠(BXSB小鼠)，發(fā)現(xiàn)雙氫青蒿素通過抑制B淋巴細(xì)胞增殖，并且促進(jìn)CD8+T細(xì)胞的增殖抑制自身抗體產(chǎn)生，發(fā)揮雙向調(diào)節(jié)免疫功能，降低體液免疫反應(yīng)，減輕免疫復(fù)合物的形成，從而達(dá)到治療SLE的作用[9]。而筆者在臨床上觀察到SLE病人常有發(fā)熱、感染、皮疹與關(guān)節(jié)腫痛等癥狀，實驗室檢查也發(fā)現(xiàn)血白細(xì)胞計數(shù)（WBC）和中性粒細(xì)胞比例（NE）增高、血抗鏈球菌溶血素O（ASO）增高、血沉增快、尿WBC增高，或存在咽扁桃炎、鼻竇炎、胃炎等現(xiàn)象，據(jù)此，筆者推測SLE的發(fā)病機(jī)制可能是體表皮膚黏膜潛伏著慢性隱性細(xì)菌感染，細(xì)菌長期釋放毒素入血，致遠(yuǎn)隔組織器官毒素性損害伴炎癥免疫性反應(yīng)，從而引起的全身性多系統(tǒng)損害[10]。本次研究我們也發(fā)現(xiàn)羥氯喹與青蒿素具有與抗生素相似的抗菌作用，因此羥氯喹和青蒿素在治療SLE中既發(fā)揮了目前人們普遍認(rèn)為的抗炎及調(diào)節(jié)免疫的作用，同時也可能具有與抗生素相似的抗菌作用，可消除或控制患者體內(nèi)慢性隱性細(xì)菌感染，起到SLE的病因?qū)W治療的作用。但是由于目前對SLE的細(xì)菌感染機(jī)制認(rèn)識不足，不能充分徹底地對SLE進(jìn)行病因?qū)W治療，因此導(dǎo)致SLE療效欠佳，病情遷延，反復(fù)發(fā)作。本研究還是一個初步的探索，在未來研究中，我們還需要開展更嚴(yán)謹(jǐn)規(guī)范的實驗去進(jìn)一步證實羥氯喹與青蒿素的抗菌作用。