孔維請 束金華

【摘要】 樹突狀細(xì)胞（DC）是目前發(fā)現(xiàn)的最強的專職抗原提呈細(xì)胞（APC），其最大的特點是能刺激初始T細(xì)胞活化和增殖，并能分泌如IL-12、INF-γ等細(xì)胞因子發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用，參與機體對腫瘤的免疫效應(yīng)。細(xì)胞因子激活的殺傷細(xì)胞（CIK）是在體外經(jīng)多種細(xì)胞因子誘導(dǎo)刺激形成的異質(zhì)細(xì)胞群，兼具T細(xì)胞特異性的強大抗腫瘤活性與非MHC限制性的廣譜殺傷腫瘤作用。經(jīng)樹突狀細(xì)胞誘導(dǎo)的細(xì)胞因子激活的殺傷細(xì)胞（DC-CIK）比單純的CIK有著更高的抗腫瘤活性。DC-CIK的生物免疫治療為非小細(xì)胞肺癌（NSCLC）治療提供又一有力手段，本文就DC-CIK的生物學(xué)作用及在NSCLC治療中的應(yīng)用做一綜述。

【關(guān)鍵詞】 非小細(xì)胞肺癌 樹突狀細(xì)胞 細(xì)胞因子激活的殺傷細(xì)胞 細(xì)胞免疫治療

doi：10.14033/j.cnki.cfmr.2019.32.079 文獻標(biāo)識碼 A 文章編號 1674-6805（2019）32-0-03

[Abstract] Dendritic cells （DC） is the strongest professional antigen presenting cell （APC） found at present. Its most prominent feature is that it can stimulate the activation and proliferation of initial T cells， and can secret cytokines such as IL-12， INF-γ to play an immune regulatory role and participate in the immune effect of the body on tumors. Cytokine induced killer cells （CIK） are heterogeneous cell populations induced and stimulated by a variety of cytokines in vitro， with strong anti tumor activity of T cell specificity and broad spectrum anti tumor effect not restricted by MHC. The DC-CIK have higher antitumor activity than CIK alone. The biological immunotherapy of DC-CIK provides another powerful means for the treatment of non-small cell lung cancer （NSCLC）. This article reviews the biological function of DC-CIK and its application in NSCLC treatment.

[Key words] Non-small cell lung cancer Dendritic cells Cytokine induced killer cells Cell immunotherapy

First-authors address： First People Hospital of Xuanwei City， Xuanwei 655400， China

肺癌是世界范圍內(nèi)發(fā)病率和死亡率最高的惡性腫瘤，全球范圍內(nèi)每年新發(fā)肺癌約182萬，占所有新發(fā)惡性腫瘤的13%。每年在所有腫瘤死亡病例中，肺癌死亡占19.4%，約160萬人。在中國，肺癌發(fā)病率和死亡率也位居首位[1]。肺癌根據(jù)其病理學(xué)類型，可分為小細(xì)胞肺癌（small cell lung cancer，SCLC）及非小細(xì)胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC），其中以NSCLC居多，占80%左右[2]。由于早期肺癌大多缺乏特異性臨床表現(xiàn)，發(fā)現(xiàn)時約85%已處于中晚期，手術(shù)效果受到限制，化學(xué)治療、放射治療作為NSCLC的又一重要治療手段，雖取得一定療效，但由于耐藥問題、腫瘤干細(xì)胞的存在、嚴(yán)重的不良反應(yīng)及對患者免疫功能的抑制等因素，使得肺癌的死亡率仍然居高不下，以致肺癌整體5年生存率一直徘徊在16%左右[3]。隨著科技的發(fā)展，分子靶向治療問世，由于其確切的療效、較低的毒副反應(yīng)及對患者免疫功能影響較小等諸多優(yōu)點，靶向治療成為近年研究的熱點，其中以表皮生長因子受體（epidermal growth factor receptor，EGFR）為靶點的藥物研究最為廣泛。但隨著臨床應(yīng)用的推廣，靶向藥物同樣存在耐藥問題，無疾病進展生存期及總體生存率仍然不理想[4]。在如此背景下，尋找新的治療方法成了目前最迫切的需求。隨著分子生物學(xué)及免疫學(xué)的發(fā)展，腫瘤細(xì)胞免疫治療應(yīng)運而生。細(xì)胞免疫治療由于其抗腫瘤作用強、不良反應(yīng)少等諸多優(yōu)點，逐漸成為治療惡性腫瘤的又一新興有效手段，通過利用各類免疫細(xì)胞及相應(yīng)細(xì)胞因子來提高機體免疫系統(tǒng)抗腫瘤能力，殺滅腫瘤細(xì)胞，從而達(dá)到治療腫瘤的目的。本文就以樹突狀細(xì)胞誘導(dǎo)的細(xì)胞因子激活的殺傷細(xì)胞（DC-CIK）為主的細(xì)胞免疫治療在NSCLC中的應(yīng)用做一綜述。

1 DC、CIK及DC-CIK的生物學(xué)作用及其抗腫瘤機制

1.1樹突狀細(xì)胞（dendritic cell，DC）

DC主要是由CD34+或CD14+細(xì)胞誘導(dǎo)分化的免疫細(xì)胞，可由骨髓中髓樣干細(xì)胞和淋巴樣干細(xì)胞分化而來，廣泛分布于除腦以外的全身各處組織，但數(shù)量極少，人外周血DC僅占單個核細(xì)胞（PBMC）的1%以下[5]。DC是目前發(fā)現(xiàn)的功能最強的抗原提呈細(xì)胞（antigen-presenting cell，APC），成熟的DC高度表達(dá)主要組織相容性復(fù)合體分子（major histocompatibility complex，MHC）和共刺激分子（B7、CD40），被DC所攝取的抗原經(jīng)加工提呈處理，以抗原肽-MHC復(fù)合物形式提呈給T細(xì)胞，從而激活初始T細(xì)胞啟動抗腫瘤免疫效應(yīng)[5-6]。另外，DC通過分泌TNF-α、INF-γ、IL-2、IL-12等細(xì)胞因子及趨化因子，增強機體免疫功能，調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞的分化，募集效應(yīng)T細(xì)胞維持在腫瘤細(xì)胞附近發(fā)揮抗腫瘤作用[7]。

1.2 細(xì)胞因子激活的殺傷細(xì)胞（cytokine induced killer，CIK）

CIK是PBMC在體外經(jīng)多種細(xì)胞因子誘導(dǎo)激活的一群以CD3+CD56+T細(xì)胞為主要效應(yīng)細(xì)胞的具有殺傷活性異質(zhì)細(xì)胞群，對腫瘤細(xì)胞有較高的細(xì)胞毒作用。CIK中約88%的細(xì)胞為CD3+CD56+T細(xì)胞，研究發(fā)現(xiàn)CD3+CD56+T細(xì)胞比CD3+CD56-T細(xì)胞具有更高的腫瘤殺傷活性[8]。CIK既有T淋巴細(xì)胞的強大抗腫瘤活性，又具有自然殺傷細(xì)胞（NK）的非MHC限制性的殺傷能力。目前普遍認(rèn)為CIK主要通過以下機制發(fā)揮抗腫瘤效應(yīng)：（1）直接殺傷。CIK可釋放穿孔素、顆粒酶使腫瘤細(xì)胞融解壞死，直接殺傷腫瘤細(xì)胞[9];（2）誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡。CIK表達(dá)的FasL通過與腫瘤細(xì)胞的Fas結(jié)合誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡;（3）釋放細(xì)胞因子，免疫調(diào)節(jié)。CIK通過釋放IL-2、IL-12、TNF-α、INF-γ等細(xì)胞因子增強免疫系統(tǒng)反應(yīng)水平，而且包括TNF-α部分細(xì)胞因子可直接抑制腫瘤細(xì)胞[10]。CIK抗腫瘤作用具有以下特點：（1）非MHC限制性殺傷作用。CIK對腫瘤細(xì)胞發(fā)揮細(xì)胞毒作用不需要通過MHC-I、MHC-II類分子和T細(xì)胞受體（TCR）相作用，而是被腫瘤細(xì)胞和CIK所結(jié)合的結(jié)合物所激活[11-12];（2）高效、廣譜殺瘤作用。由于CIK發(fā)揮作用不受MHC限制，為非特異性效應(yīng)，故不受器官組織差異及病理學(xué)類型的限制，對各種腫瘤細(xì)胞甚至耐藥腫瘤均有殺傷作用[13];（3）較低的毒副作用，不良反應(yīng)少。就目前大多數(shù)的關(guān)于CIK的臨床研究，報道不良反應(yīng)的甚為少見，大多數(shù)相對安全。Ma等[14]報道的關(guān)于CIK臨床應(yīng)用的一項Meta分析顯示，854例納入研究的患者僅少數(shù)出現(xiàn)輕微的發(fā)熱、畏寒等反應(yīng)，且經(jīng)對癥處理后即可好轉(zhuǎn)，顯示了CIK較高的安全性。

1.3 DC與CIK聯(lián)合

作為體內(nèi)專職APC，DC具有強大的抗原提呈能力，可以有效地捕獲腫瘤抗原，在腫瘤免疫過程中參與腫瘤抗原的識別與提呈，對T細(xì)胞的活化起著關(guān)鍵作用，將DC與CIK聯(lián)合培養(yǎng)將能發(fā)揮協(xié)同抗腫瘤作用，比單獨應(yīng)用CIK能取得更顯著地腫瘤殺傷效應(yīng)[15-16]。由于DC分泌的IL-2、IL-12、INF-γ等細(xì)胞因子可激活CIK細(xì)胞，加之DC-CIK共培養(yǎng)可下調(diào)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Treg）的表達(dá)，有利于解除免疫抑制效應(yīng)，所以將DC和CIK細(xì)胞聯(lián)合培養(yǎng)能相互促進彼此的分化和成熟，這一理論在相應(yīng)研究中也得到了驗證[17]。Ma等[18-19]的研究顯示，DC-CIK對腫瘤細(xì)胞的殺傷活性和抑制效應(yīng)顯著高于單純CIK，將DC和CIK聯(lián)合培養(yǎng)有助于提高活性T細(xì)胞比例，增強抗腫瘤效應(yīng)，若機體內(nèi)的DC細(xì)胞缺乏，則不能活化足夠多的T細(xì)胞，導(dǎo)致CIK抗腫瘤能力下降。邱育淼等[20]通過建立人肺腺癌裸鼠移植瘤模型，分為CIK組和DC-CIK組，發(fā)現(xiàn)DC與CIK共培養(yǎng)后CD3+與CD8+均較單純CIK升高，DC-CIK組能明顯下調(diào)移植瘤中VEGF、MMP-9等蛋白的表達(dá)，表明DC-CIK能較單純CIK活化更多CD8+T細(xì)胞并能顯著抑制肺腺癌移植瘤的生長。所以，將具有強大抗原提呈能力和免疫激活能力的DC與對腫瘤有殺傷效應(yīng)的CIK聯(lián)合培養(yǎng)將更能起到協(xié)同抗腫瘤作用。

2 DC-CIK細(xì)胞免疫療法在NSCLC治療中的應(yīng)用

化療和放射治療是治療NSCLC的有力手段，能減少腫瘤的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移，對提高患者總體生存率有一定作用，但化療和放療對人體有明顯的不良反應(yīng)，對機體免疫能力有明顯的抑制作用，加之腫瘤細(xì)胞對化療藥物的耐藥，導(dǎo)致其療效受到限制[21]。Verma等[22]的研究顯示，化療對人體CD4+T細(xì)胞和B細(xì)胞有較明顯的抑制作用，接受化療期間機體免疫細(xì)胞普遍減少，導(dǎo)致患者免疫功能低下，更加有利于腫瘤的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移。DC-CIK聯(lián)合放化療可以有效清除手術(shù)后殘余癌細(xì)胞，增強機體免疫功能，降低放化療的不良反應(yīng)率，提高放化療療效[23]。Zhu等[24]以63例ⅢB期NSCLC患者為研究對象，治療組采用DC-CIK聯(lián)合多西他賽與鉑類雙藥化療和同步放療，對照組患者僅采用多西他賽與鉑類雙藥化療和同步放療，結(jié)果顯示治療組患者的治療有效率、KPS評分、腫瘤標(biāo)志物和6、12個月生存率等指標(biāo)均顯著高于對照組，說明DC-CIK聯(lián)合放化療能顯著增強放化療的療效，延長患者生存期并改善NSCLC患者的生存質(zhì)量。劉淑娟等[25]選取185例晚期NSCLC患者做研究，將患者隨機分為化療組、DC-CIK組和聯(lián)合組，化療采用培美曲塞或吉西他濱治療6～8周期，DC-CIK組和聯(lián)合組進行2次DC-CIK回輸治療，結(jié)果顯示聯(lián)合組客觀反應(yīng)率（ORR）、疾病控制率（DCR）、生活質(zhì)量評分均高于其他兩組，且不良反應(yīng)癥狀量表評分低于其他兩組，表明DC-CIK聯(lián)合化療可提高近期療效，減低化療不良反應(yīng)，改善患者生活質(zhì)量。Wang等[26]的一項納入了505名患者的Meta分析結(jié)果顯示，DC-CIK細(xì)胞免疫治療在改善患者無疾病進展生存期（PFS）、總生存期（OS）和疾病控制率（DCR）方面顯示出較明顯的優(yōu)勢，并且沒有明顯致命的不良反應(yīng)出現(xiàn)，療效確切、安全。一項利用28篇關(guān)于DC-CIK聯(lián)合化療治療NSCLC的隨機對照研究做的薈萃分析[27]，結(jié)果顯示DC-CIK聯(lián)合化療治療NSCLC能顯著提高患者外周血CD4+、CD8+T細(xì)胞、NK細(xì)胞數(shù)量，提升CD4+/CD8+比值，治療組有著更低的Treg，且亞組分析還顯示，DC-CIK與NP方案或GP方案聯(lián)合對免疫細(xì)胞提升最明顯，表明DC-CIK細(xì)胞免疫治療能有效地提高患者免疫力，減少化療對患者免疫功能的抑制，加強抗腫瘤免疫。

3 結(jié)語與展望

DC-CIK細(xì)胞免疫療法是自身免疫細(xì)胞回輸患者體內(nèi)治療惡性腫瘤的新興療法，且DC和CIK共培養(yǎng)能相互促進彼此成熟，提高CIK殺瘤作用，比單純CIK具有更強大的抗腫瘤免疫功能，DC-CIK聯(lián)合化療治療NSCLC能提高患者生存率，延緩或減少腫瘤的復(fù)發(fā)，提高機體免疫功能，降低化療所致的不良反應(yīng)，是一種安全、有效、低毒的綠色生物療法，具有巨大發(fā)展?jié)摿蛷V闊發(fā)展空間，是未來肺癌免疫治療的發(fā)展方向之一，但目前多數(shù)研究均為小樣本研究，且針對DC-CIK最佳回輸方式、治療周期、與化療或放療聯(lián)合的最佳時機等問題的研究尚有空白，還需大規(guī)模、多中心的研究進一步證實其療效。

參考文獻

[1] Ferlay J，Soerjomataram I，Dikshit R，et al.Cancer incidence and mortality worldwide：sources，methods and major patterns in GLOBOCAN 2012[J].Int J Cancer，2015，136（5）：E359-E386.

[2] Gazdar A F，Bunn P A，Minna J D.Small-cell lung cancer：what we know，what we need to know and the path forward[J].Nat Rev Cancer，2017，17（12）：725-737.

[3] Zeng H，Zheng R，Guo Y，et al.Cancer survival in China，2003-2005：a population-based study[J].Int J Cancer，2015，136（8）：1921-1930.

[4] Remon J，Moran T，MajemM，et al.Acquired resistance to epidermal growth factor receptor tyrosine kinase inhibitors in EGFR mutant non-small cell lung cancer：A new era begins[J].Cancer Treatment Reviews，2014，40（1）：93-101.

[5]龔非力.醫(yī)學(xué)免疫學(xué)[M].北京：科學(xué)出版社，2012：95-99.

[6] Marongiu L，Donini M，Toffali L，et al.ESAT-6 and HspX improve the effectiveness of BCG to induce human dendritic cells-dependent Th1 and NK cells activation[J].PLoS One，2013，8（10）：e75684.

[7] Xie S，Wu X，Zhang G，et al.Remarkable regression of a lung recurrence from an undifferentiated embryonal sarcoma of the liver treated with a DC vaccine combined with immune cells：a case report[J].Cell Immunol，2014，290（2）：185-189.

[8] Joshi P S，Liu J Q，Wang Y，et al.Cytokine-induced killer T cells kill immature dendritic cells by TCR-independent and perforin-dependent mechanisms[J].J Leukoc Biol，2006，80（6）：1345-1353.

[9] Su X，Zhang L，Jin L，et al.Immunotherapy with cytokine-induced killer cells in metastatic renal cell carcinoma[J].Cancer Biother Radiopharm，2010，25（4）：465-470.

[10] Kornacker M，Moldenhauer G，Herbst M，et al.Cytokine-induced killer cells against autologous CLL：direct cytotoxic effects and induction of immune accessory molecules by interferon-gamma[J].Int J Cancer，2006，119（6）：1377-1382.

[11] Pievani A，Borleri G，Pende D，et al.Dual-functional capability of CD3+CD56+ CIK cells，a T-cell subset that acquires NK function and retains TCR-mediated specific cytotoxicity[J].Blood，2011，118（12）：3301-3310.

[12]劉玉珍.肝癌根治性切除術(shù)后聯(lián)合DC-CIK治療的臨床研究[J].中外醫(yī)學(xué)研究，2018，16（35）：35-36.

[13]李新靈，王志爽，邵曉楓，等.CIK細(xì)胞體外誘導(dǎo)培養(yǎng)及對不同腫瘤細(xì)胞株的細(xì)胞毒作用[J].天津醫(yī)藥，2013，41（8）：759-766.

[14] Ma Y，Zhang Z，Tang L，et al.Cytokine-induced killer cells in the treatment of patients with solid carcinomas：a systematic review and pooled analysis[J].Cytotherapy，2012，14（4）：483-493.

[15] Zhang L，Yang X，Sun Z，et al.Dendritic cell vaccine and cytokine-induced killer cell therapy for the treatment of advanced non-small cell lung cancer[J].Oncol Lett，2016，11（4）：2605-2610.

[16] Chen Q，Cui X X，Liang P F，et al.Immunotherapy with dendritic cells and cytokine-induced killer cells for MDA-MB-231 breast cancer stem cells in nude mice[J].Am J Transl Res，2016，8（7）：2947-2955.

[17] Tao L，Huang G，Shi S，et al.Bevacizumab improves the antitumor efficacy of adoptive cytokine-induced killer cells therapy in non-small cell lung cancer models[J].Med Oncol，2014，31（1）：777.

[18] Ma Y，Aymeric L，Locher C，et al.The dendritic cell-tumor cross-talk in cancer[J].Curr Opin Immunol，2011，23（1）：146-152.

[19] DeVita VT Jr，Rosenberg S A.Two hundred years of cancer research[J].N Engl J Med，2012，366（23）：2207-2214.

[20]邱育淼，杜薇，陳婭，等.負(fù)載腫瘤抗原DC與CIK共培養(yǎng)對裸鼠肺腺癌移植瘤抑制作用觀察[J].中華腫瘤防治雜志，2014，21（21）：1680-1684.

[21] Ettinger D S，Wood D E，Aisner D L，et al.Non-Small Cell Lung Cancer，Version 5.2017，NCCN Clinical Practice Guidelines in Oncology[J].J Natl Compr Canc Netw，2017，15（4）：504-535.

[22] Verma R，F(xiàn)oster R E，Horgan K，et al.Lymphocyte depletion and repopulation after chemotherapy for primary breast cancer[J].Breast Cancer Res，2016，18（1）：10.

[23] Linn Y C，Yong H X，Niam M，et al.Aphase I/II clinical trial of autologous cytokine-induced killer cells as adjuvant immunotherapy for acute and chronic myeloid leukemia in clinical remission[J].Cytotherapy，2012，14（7）：851-859.

[24] Zhu X P，Xu Y H，Zhou J，et al.A clinical study evaluating dendritic and cytokine-induced killer cells combined with concurrent radiochemotherapy for stage IIIB non-small cell lung cancer[J].Genet Mol Res，2015，14（3）：10228-10235.

[25]劉淑娟，張海梅，宋海平，等.自體細(xì)胞免疫治療聯(lián)合化療對晚期非小細(xì)胞肺癌的近期療效[J].山東醫(yī)藥，2017，57（37）：45-47.

[26] Wang S，Wang Z.Efficacy and safety of dendritic cells co-cultured with cytokine-induced killer cells immunotherapy for non-small-cell lung cancer[J].Int Immunopharmacol，2015，28（1）：22-28.

[27] Xiao Z，Wang C Q，Zhou M H，et al.The Antitumor Immunity and Tumor Responses of Chemotherapy with or without DC-CIK for Non-Small-Cell Lung Cancer in China：A Meta-Analysis of 28 Randomized Controlled Trials[J].J Immunol Res，2018，2018：9081938.

（收稿日期：2019-06-25） （本文編輯：桑茹南）