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        “苦參堿分離純化”的實驗教學設(shè)計

        2018-09-18 09:23:44太志剛蔡樂余富朝李亞民楊波林連兵
        關(guān)鍵詞:分離純化苦參堿教學設(shè)計

        太志剛 蔡樂 余富朝 李亞民 楊波 林連兵

        【摘 要】 《制藥分離工程》是制藥工程專業(yè)的主要專業(yè)課程,開展課程實驗設(shè)計對于開展《制藥分離工程》教學較為重要?!吨扑幏蛛x工程》教學實驗開展了苦參堿的分離純化,實驗教學通過丙酮室溫浸提、萃取、調(diào)pH值、硅膠柱層析和結(jié)晶幾個步驟,即可從云南特色花卉-白刺花中獲得純度較高的苦參堿。實驗簡便、易于操作,實驗內(nèi)容涵蓋了固液分離、液液萃取、色譜分離和結(jié)晶等課程內(nèi)容,通過以上實驗教學,有效的提高《制藥分離工程》的教學質(zhì)量。

        【關(guān)鍵詞】 制藥分離工程;苦參堿;分離純化;教學設(shè)計

        【中圖分類號】R914.1 【文獻標志碼】 A【文章編號】1007-8517(2018)11-0121-02

        Abstract:Pharmaceutical separation engineering is the important specialized curriculum of the pharmaceutics engineering major. It is more important to design for experiments of pharmaceutical separation engineering. The Faculty carried out the teaching experiment which named separation and purification of matrine. In this experiment teaching, the higher purity matrine can be obtained from the flower of Sophora vicifolia usingthe following steps, such as extraction, pH adjustment, chromatography and crystallization. The experiment is simple and easy to operate. The experimental content covers the course content of solid-liquid separation, liquid-liquid extraction, chromatographic separation and crystallization. Through the experimental teaching mentioned above, the teaching quality of the pharmaceutical separation engineer can be effectively improved.

        Keywords:Pharmaceutical Separation Engineering; Matrine; Separation and Purification; Teaching Design

        1 引言

        《制藥分離工程》是制藥工程專業(yè)一門重要的專業(yè)基礎(chǔ)課,在制藥工程專業(yè)課程體系中占有非常重要的地位。主要介紹藥物的提取、分離與純化理論與技術(shù)。該課程著重培養(yǎng)學生的工程意識,通過學習,逐漸具備解決工程實際問題的能力[1]。在傳統(tǒng)的教學中存在著以下問題:①《制藥分離工程》開課前學生很少接觸工程實際問題,工程意識不強,實踐基礎(chǔ)薄弱,學生聽不懂。②《制藥分離工程》涉及一些分離操作原理,多采用模型和掛圖等輔助教具進行講解,教學手段單一,效果不好。③《制藥分離工程》是一門實踐性很強的課程,傳統(tǒng)的考試模式是以閉卷筆試為主,主要考查的是學生記憶基本原理和技術(shù)的能力,不能提高學生運用基本原理和技術(shù)解決實際問題的能力。在當前高等教育著力于培養(yǎng)有創(chuàng)新能力的高素質(zhì)人才的大背景下,教學時間的有限性與知識增長的無限性之間的矛盾日益突出,為了能使學生掌握本課程的基本內(nèi)容,運用課程中的基本原理和技術(shù)解決實際問題的能力,在教學安排上增加《制藥分離工程》教學實踐環(huán)節(jié)。從云南制藥工程專業(yè)的本科教學來看,從云南豐富的藥用植物資源中分離天然藥效成分,并為之設(shè)計有效的分離路線,進而付諸實踐教學,不僅可以調(diào)動學生學習積極性,讓學生從理論到實踐得以跨越,真正做到“知行合一”,同時也為后續(xù)的制藥工程生產(chǎn)實習和畢業(yè)實習奠定實踐基礎(chǔ)。

        2 實驗設(shè)計對象的選擇

        在《制藥分離工程》教學實驗設(shè)計時,以云南特色藥用植物資源為出發(fā)點,選擇有特色、有藥效、有資源和有開發(fā)價值的藥用植物開展《制藥分離工程》教學實踐。白刺花為豆科槐屬植物白刺花(Sophora viciifolia)的花蕾,別名苦刺花,廣泛分布于云南海拔2000~3500米的山坡上,白刺花在云南民間可食用[2],具有抗炎、抗過敏、抗腫瘤等藥理作用[3],其中含有生物堿類化學物質(zhì),苦參堿是其中的藥效成分[4],苦參堿具有治療抑制大腸癌細胞增殖、促大腸癌細胞凋亡、抗肝炎等功效[5],目前已有苦參堿注射液上市銷售[6]。云南具有廣泛的白刺花植物資源,其中的苦參堿具有顯著藥效,選擇白刺花,并設(shè)計其中苦參堿的分離純化實驗教學,對于《制藥分離工程》教學具有較強的教學實踐意義。

        3 實驗方案的設(shè)計

        通過文獻調(diào)研和實驗條件的摸索,比對了幾條實驗路線,結(jié)合《制藥分離工程》教材內(nèi)容和云南植物藥業(yè)有限公司的實際生產(chǎn)工藝,最終確定以下實驗方案。

        3.1 白刺花中總生物堿的提取 白刺花花蕾2.0 kg,陰干粉碎后用5 L 的丙酮室溫提取3次,每次48 h,提取液合并,減壓過濾,用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮,最后得到197.2 g浸膏,用水將所得浸膏分散,正丁醇萃取后得到,正丁醇部分提取物160.0 g和水部分37.2 g。水部分用氨水調(diào)pH為10,氯仿萃取3次,得萃取物4.2 g。

        3.2 白刺花中苦參堿的分離 將氯仿萃取物進行硅膠柱層析,流動相條件為:石油醚/丙酮/二乙胺(體積比為30∶1∶0.2),梯度洗脫,逐漸增加丙酮的體積,直到流動相的體積比為10∶10∶0.2,同時采用薄層層析法將相同洗脫成分合并,最終得到了4個部分(Fr.W1-Fr.W4)。對Fr.W3進行硅膠柱層析,流動相為氯仿/甲醇(98∶2),得到化合物1(836 mg)和化合物2(50 mg)。以苦參堿為標準品,采用薄層層析法將化合物1、2與苦參堿標準品在薄層板上展開,展開劑為氯仿/甲醇/氨水(比例為90∶7∶3),顯色劑為用碘化鉍鉀試劑噴霧,最終苦參堿樣點顯橙紅色,經(jīng)過比移值Rf比對,確定化合物1為苦參堿。

        3.3 白刺花中苦參堿的純化 將分離得到的苦參堿置于5~8 mL的熱水(70~80 ℃)中溶解,加入15%的NaOH,邊滴加邊攪拌,直至苦參堿溶解完全,冷卻,靜置24 h,過濾,所得結(jié)晶體用8~10 mL石油醚于40~50 ℃下回流溶解,熱濾,母液冷卻后靜置24 h,過濾后用石油醚清洗晶體,40~50 ℃真空干燥,得到柱狀苦參堿晶體。

        3.4 結(jié)構(gòu)表征所得化合物 通過與對照品進行薄層層析的比對分析初步確定苦參堿,再通過核磁共振進行測定,測定所得數(shù)據(jù)如下:1H NMR (CDCl3, 500 MHZ) δppm:4.35 (1H, m, He-17), 3.74(1H, m, H-11), 3.00 (1H, m, Ha-17), 2.78 (1H, d, J=11.5 Hz, He-10), 2.70(1H, d, J =11.5 Hz, He-2), 2.31(1H, m, He-14), 2.14(1H, m, Ha-14), 1.96(2H, m, Ha-10,); 13C NMR (CDCl3, 125 MHz) δppm: 57.5(C-2), 21.0(C-3), 27.6(C-4), 35.3(C-5), 64.0(C-6), 41.9(C-7), 26.8(C-8), 21.9(C-9), 58.0(C-10), 53.5(C-11), 27.5(C-12), 19.1(C-13), 33.0(C-14), 170.1(C-15), 43.1(C-17)。

        4 實驗教學中的注意事項

        4.1 白刺花采收和苦參堿成分的預(yù)判 采收白刺花后,引導學生用少量樣品進行預(yù)實驗,通過與苦參堿對照品進行薄層層析比對分析,預(yù)先判斷是否含有苦參堿,并學習從薄層斑點的大小初步判斷苦參堿的含量。

        4.2 提取工藝 得到苦參堿結(jié)晶體后,讓學生計算得率,從提高得率和環(huán)保角度出發(fā),引導學生在提取溶劑種類、溶劑料液比、時間、溫度、原料預(yù)處理等方面進行思考,深入設(shè)計實驗,并反復(fù)比對實驗結(jié)果,總結(jié)得到最佳提取方法。結(jié)晶時以結(jié)晶量的多少和結(jié)晶含量高低為主要考慮因素,引導學生從結(jié)晶溶液濃度、NaOH用量、結(jié)晶溫度和加入晶種方法考慮結(jié)晶工藝的優(yōu)化,深入開展后續(xù)實驗,優(yōu)選最佳工藝。

        5 小結(jié)

        本實驗教學內(nèi)容涵蓋了《制藥分離工程》中固液提取、液液萃取、色譜分離和結(jié)晶等課程內(nèi)容,通過以上實驗,使學生加深了以上教學內(nèi)容的思考和理解,學生掌握了固液萃取、液液萃取、色譜分離和結(jié)晶的基本操作方法,深入掌握了以上分離技術(shù)的原理。同時,在實驗過程中還碰到了一些具體問題,如:提取率低、苦參堿純度不高、雜質(zhì)多等,通過對以上問題的分析和解決,使學生真正學會了從經(jīng)濟、有效和環(huán)保的角度出發(fā),深入思考和解決藥物分離問題。綜上所述,苦參堿的分離純化實驗教學,能有效提高學生學習《制藥分離工程》的積極性,加深學生對本課程的思考和認識,有效提高教學質(zhì)量。

        參考文獻

        [1]李潔瓊, 齊濱, 于波,等. 制藥分離工程教學改革探索與實踐[J]. 教育教學論壇, 2017(11):83-84.

        [2]吳榮書, 袁唯, 趙燕. 野生白刺花的加工技術(shù)研究[J]. 食品科學, 2000, 21(8):67-68.

        [3]毛曉健, 溫敏, 蔣孝悝. 白刺花水煎劑的部分藥效學研究[J]. 云南中醫(yī)中藥雜志, 2009, 30(2):44-46.

        [4]董劉宏, 太志剛, 楊亞濱,等. 白刺花花的化學成分研究[J]. 華西藥學雜志, 2010, 25(6):636-640.

        [5]王菁雯, 沈克平. 中醫(yī)藥對大腸癌信號通路的調(diào)控作用[J]. 中國實驗方劑學雜志, 2018(1):227-234.

        [6]白建剛, 朱偉平, 羅金武,等. 苦參堿注射液治療乙型肝炎療效觀察[J].中國醫(yī)藥導報, 2007, 4(17):19-20.

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