◎ 鄧偉恒，黎 韻，吳國(guó)輝，王柳玲，吳俊發(fā)

（廣州檢驗(yàn)檢測(cè)認(rèn)證集團(tuán)有限公司，廣東 廣州 511440）

低聚果糖作為一種功能性低聚糖，正廣泛使用于食品工業(yè)中，其具有促進(jìn)鈣鐵鎂等的吸收的作用，也能改善腸道功能、增強(qiáng)免疫力。在嬰幼兒配方乳粉中，通常當(dāng)作膳食纖維而添加到其中?，F(xiàn)行國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB 5009.255-2016《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中果聚糖的測(cè)定》[1]中有具體的方法對(duì)食品中果聚糖進(jìn)行測(cè)定。該方法將樣品中蔗糖經(jīng)蔗糖酶水解成葡萄糖和果糖，再經(jīng)硼氫化鈉還原成糖醇，多余硼氫化鈉用乙酸中和；再加入果聚糖酶將果聚糖水解成果糖和葡萄糖，利用離子色譜測(cè)定其果糖含量，經(jīng)過換算可得樣品低聚糖的含量。該方法經(jīng)過驗(yàn)證，能準(zhǔn)確測(cè)定配方乳粉中低聚果糖的含量，但同時(shí)也有前處理復(fù)雜、耗時(shí)較長(zhǎng)等的缺點(diǎn)。針對(duì)這幾點(diǎn)，建立了液相色譜法測(cè)定配方乳粉中低聚果糖的含量。

1 實(shí)驗(yàn)部分

本方法以GB/T 23528-2009《低聚果糖》[2]為基礎(chǔ)，通過前處理脫去配方乳粉中脂肪蛋白質(zhì)等的物質(zhì)，獲得澄清溶液至液相色譜儀通過示差檢測(cè)器進(jìn)行測(cè)定。

1.1 儀器與試劑

2695/2414 WATERS高效液相色譜儀配備示差檢測(cè)器，Millipore Milli-Q去離子水發(fā)生器。

蔗果三糖（GF2）、蔗果四糖（GF3）和蔗果五糖（GF4）低聚果糖標(biāo)準(zhǔn)品，購自WOKO公司；乙腈（HPLC級(jí)），購自CNW公司；亞鐵氰化鉀、乙酸鋅和冰乙酸（分析純）；配方乳粉購自本地超市。

1.2 樣品處理

配制亞鐵氰化鉀溶液（亞鐵氰化鉀10.6 g用水溶解定容至100 mL容量瓶）、乙酸鋅溶液（乙酸鋅21.9 g和3 mL冰乙酸，用水溶解定容至100 mL容量瓶）。稱取5 g配方乳粉，60 ℃溫水溶解，加入5 mL亞鐵氰化鉀溶液和5 mL乙酸鋅溶液，定容至100 mL容量瓶，搖勻，過濾獲得澄清溶液。

1.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線

稱取低聚果糖（GF2、GF3和GF4）標(biāo)準(zhǔn)品各0.25 g（精確至0.1 mg），加水溶解并定容至25 mL容量瓶中，保存在4 ℃冰箱中。使用時(shí)，用水稀釋配成需要濃度的標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.4 色譜條件

色譜柱：氨基柱（250 mm×4.6 mm i.d., 5.0 μm，安普）；流動(dòng)相：乙腈+水=75+25（V/V），等度洗脫；流速：1.0 mL/min；進(jìn)樣量：10 μL；柱溫：30 ℃；采集時(shí)間：40 min。檢測(cè)器：示差折光檢測(cè)器。

1.5 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

以分析物的峰面積（y）和對(duì)應(yīng)的質(zhì)量濃度（x，mg/mL）進(jìn)行線性回歸計(jì)算，得到線性方程和相關(guān)系數(shù)。在線性范圍0.15～10.0 mg/mL，有良好的線性關(guān)系?；貧w系數(shù)均大于0.999。標(biāo)準(zhǔn)圖譜見圖1。3個(gè)標(biāo)準(zhǔn)峰依次為GF2、GF3、GF4。

圖1 低聚果糖標(biāo)準(zhǔn)圖譜圖

樣品圖譜見圖2。樣品在GF2和GF3相對(duì)應(yīng)的出峰時(shí)間有響應(yīng)，得到理想峰形的色譜峰，通過計(jì)算，結(jié)果與其產(chǎn)品質(zhì)量明示指標(biāo)相符。

圖2 樣品圖譜圖

1.6 數(shù)據(jù)比較

用液相色譜法與國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)法同時(shí)測(cè)定8個(gè)添加低聚果糖的配方奶粉，結(jié)果見表1。

表1 不同方法測(cè)定結(jié)果比較表

2 結(jié)果與分析

根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，可見液相色譜法在含量1 g/100 g以上時(shí)，檢測(cè)得出的數(shù)據(jù)結(jié)果與國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)法和明示值均接近，相對(duì)偏差在10%以內(nèi)。而測(cè)定含量在1 g/100 g以下的樣品時(shí)，往往偏差較大。這可能是由于含量過低時(shí)，GF2峰受其前面的乳糖峰影響較大，導(dǎo)致GF2的測(cè)定數(shù)據(jù)結(jié)果偏小。因?yàn)榍疤幚矸椒]有對(duì)乳糖的處理，而配方乳粉中普遍有很高含量的乳糖，因此會(huì)對(duì)結(jié)果產(chǎn)生較大的影響。經(jīng)比較可知，液相色譜法和國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)法均有其自己的優(yōu)缺點(diǎn)，見表2。

表2 兩種方法優(yōu)缺點(diǎn)表

3 結(jié)語

液相色譜法作為一個(gè)低聚果糖國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)方法的改良，能測(cè)出具體GF2、GF3、GF4的數(shù)值，方法操作簡(jiǎn)單、快速，定量準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好，適用于大部分配方乳粉的低聚果糖檢測(cè)。