薛孟姝

（哈高科白天鵝藥業(yè)）

摘 要：本文采用高校液相測(cè)定了芪黃顆粒中鹽酸小檗堿的含量，固定相為：安捷倫Cl8（4.6mm×250mm，5um），乙腈-0.1磷酸溶液（53∶47）（每1000mL加十二烷基硫酸鈉0.1g）為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為265nm，流速1.0mL·min-1，柱溫：30℃。鹽酸小檗堿在5～50μg·mL-1范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。鹽酸小檗堿的平均回收率為99.5%，RSD為0.86%（n=6）；此方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，可用于芪黃顆粒中鹽酸小檗堿的含量測(cè)定。

關(guān)鍵詞：芪黃顆粒；鹽酸小檗堿；含量

芪黃顆粒主要用于治療鼻咽癌癌前病變之氣虛郁熱等癥，具有益氣解毒、生津利咽等作用。鹽酸小檗堿對(duì)溶血性鏈球菌、大腸桿菌、肺炎雙球菌、腦膜炎球菌、金葡菌、霍亂弧菌、志賀痢疾桿菌、傷寒桿菌、白喉?xiàng)U菌等有較強(qiáng)的抑制作用，對(duì)阿米巴原蟲、流感病毒、鉤端螺旋體也有一定抑制作用。臨床鹽酸小檗堿主要用于治療胃腸炎、細(xì)菌性痢疾等腸道感染、眼結(jié)膜炎、口舌生瘡、燒燙傷、心率失常、高血壓、糖尿病、化膿性中耳炎等[1-2]。高效液相色譜法又稱“高壓液相色譜”、“高速液相色譜”、“高分離度液相色譜”、“近代柱色譜”等，已成為化學(xué)、醫(yī)學(xué)、工業(yè)、農(nóng)學(xué)、商檢和法檢等學(xué)科領(lǐng)域中重要的分離分析技術(shù)。本文采用高校液相測(cè)定了芪黃顆粒中鹽酸小檗堿的含量。

1 儀器與試藥

HH-601超級(jí)恒溫水?。ńK金壇市億通電子有限公司）；CC-304Bvpc單加熱型高溫不銹鋼槽（北京賽美思儀器設(shè)備有限公司）；Dura 12/24超純水系統(tǒng)（上海和泰儀器有限公司）；屹譜儀器U-1810準(zhǔn)雙光束紫外可見分光光度計(jì)（屹譜儀器制造（上海）有限公司）；SCQ-7201E雙頻加熱型超聲波清洗機(jī)（上海聲彥超聲波儀器有限公司）；FR224CN奧豪斯電子天平（上海書培實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）；LC-5520高效液相色譜儀（北京東西分析儀器有限公司）。鹽酸小檗堿對(duì)照品由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供。乙腈（山東浩中化工科技有限公司）、乙醇（武漢市偉琪博星生物科技有限公司）、磷酸（武漢市偉琪博星生物科技有限公司）、甲醇（武漢市偉琪博星生物科技有限公司）、冰醋酸（濟(jì)南英出化工科技有限公司）、磷酸氫二鈉（武漢市偉琪博星生物科技有限公司）、十二烷基硫酸鈉（山東浩中化工科技有限公司）、磷酸二氫鉀（山東浩中化工科技有限公司）、三乙胺（山東浩中化工科技有限公司）。

2 含量測(cè)定

2.1 色譜條件：依據(jù)查閱文獻(xiàn)及考查的結(jié)果，確定色譜條件如下[3-5]。色譜柱為安捷倫Cl8規(guī)格為（4.6mm×250mm，5um）；乙腈-0.1磷酸溶液（53∶47）（每1000mL加十二烷基硫酸鈉0.1g）為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為265nm。理論板數(shù)按鹽酸小檗堿峰計(jì)算應(yīng)不得低于2000。

2.2 供試品溶液的制備

取芪黃顆粒，研細(xì)，精密稱取，加60毫升50%乙醇溶液超聲處理0.5小時(shí)，放冷，濾過(guò)，濾液置100ml量瓶中，用50%乙醇溶液分次洗滌容器和殘?jiān)?，洗液濾人同一量瓶中，加50%乙醇溶液至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.3 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取鹽酸小檗堿對(duì)照品約5mg，用流動(dòng)相溶解并稀釋成每1ml中含20μg的溶液，作為對(duì)照溶液。

2.4 陰性溶液的制備

依照處方取除黃連外等藥材和輔料，按樣品制備工藝制成陰性對(duì)照樣品，照供試品溶液的制備方法制成陰性液，依上述方法測(cè)定，結(jié)果在鹽酸小檗堿出峰處陰性液無(wú)色譜峰，結(jié)果陰性試驗(yàn)沒有干擾，表明本方法專屬性良好。

2.5 準(zhǔn)曲線的制備

制備濃度為5、10、15、20、25、30、35、40、45、50μg·mL-1的對(duì)照品溶液，分別精密吸取10μL注入HPLC，記錄色譜圖。以峰面積積分值A(chǔ)（μg）為橫坐標(biāo)，進(jìn)樣量為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程。試驗(yàn)表明，鹽酸小檗堿對(duì)照品在5～50μg·mL-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.6 精密度試驗(yàn)

依照2.3項(xiàng)下制備對(duì)照品溶液，精密吸取鹽酸小檗堿對(duì)照品溶液10μL重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積積分值，對(duì)照品峰面積積分值的RSD為0.81%。結(jié)果表明，本實(shí)驗(yàn)精密度良好。

2.7 重現(xiàn)性試驗(yàn)

稱取同一批的芪黃顆粒樣品6份，按測(cè)定方法項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，測(cè)定含量，并計(jì)算樣品的RSD值，結(jié)果RSD為0.73%，結(jié)果表明此方法的重現(xiàn)性良好。

2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn)

依照2.2項(xiàng)下供試品制備方法制備供試品溶液，分別在0，2，4小時(shí)精密吸取供試品溶液注入液相色譜儀，進(jìn)樣測(cè)定，供試品鹽酸小檗堿峰面積積分值的RSD為0.75%。結(jié)果表明鹽酸小檗堿至少在4小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。

2.9 回收率試驗(yàn)

采用加樣回收試驗(yàn)，取已知含量的同一批供試品各6份，精密稱定，分精密添加一定量的鹽酸小檗堿對(duì)照品，按供試品制備所述方法制備供試品溶液，測(cè)定含量（同時(shí)測(cè)定樣品含量），計(jì)算回收率。6次測(cè)定的平均回收率為99.5%，RSD為0.86%。

2.10 樣品含量測(cè)定

依照上述含量測(cè)定方法，測(cè)定芪黃顆粒三批樣品中鹽酸小檗堿的含量，含量為15.2mg/g、15.6mg/g、15.2mg/g。

3 討論

分別考察乙腈-0.1磷酸溶液（53∶47）（每1000mL加十二烷基硫酸鈉0.1g），乙腈-0.05mol.L-1磷酸二氫鉀溶液（用磷酸調(diào)節(jié)pH值至2.0）（30∶70），乙腈-0.08%磷酸溶液（20：80），乙腈-0.05mol·L-1磷酸二氫鉀緩沖液（含三乙胺0.5%，磷酸調(diào)pH至3.0）（40：60），磷酸鹽緩沖液一甲醇（70：30）不同比例的流動(dòng)相，結(jié)果以乙腈-0.1磷酸溶液（53∶47）（每1000mL加十二烷基硫酸鈉0.1g）為流動(dòng)相，供試品各峰分離效果最好，故選用乙腈-0.1磷酸溶液（53∶47）（每1000mL加十二烷基硫酸鈉0.1g）為流動(dòng)相。此方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，可用于芪黃顆粒中鹽酸小檗堿的含量測(cè)定。芪黃顆粒中鹽酸小檗堿的含量應(yīng)不少于15mg/g。

參考文獻(xiàn)

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