汪 茜 龍艷艷 李冬萍 陳廷速

（廣西壯族自治區(qū)農(nóng)業(yè)科學院微生物研究所，廣西南寧530007）

廣西地處亞勢帶季風氣候區(qū)，溫和多雨，年平均氣溫在16～23℃，特別適宜中、高溫型食用菌的栽培，多數(shù)地區(qū)四季均可栽培多種食用菌。另外，廣西多喀斯特地貌，在桂西和桂北有許多溫度穩(wěn)定的天然溶洞，可常年栽培恒溫型食用菌。特別是冬季氣溫較高，具有食用菌生產(chǎn)的適宜氣候條件，可充分利用大量冬季閑置的土地資源和勞力資源發(fā)展食用菌生產(chǎn)。廣西秋冬季生產(chǎn)的食用菌比北方地區(qū)提早2至3個月上市，具有明顯的市場競爭優(yōu)勢。

在廣西地區(qū)食用菌周年化生產(chǎn)中同樣也存在著雜菌污染問題，雜菌污染嚴重影響食用菌產(chǎn)業(yè)的發(fā)展，因此必須將防治工作提到日程上來。目前，國內(nèi)食用菌生產(chǎn)中雜菌污染調(diào)查研究較少。為此，筆者采用形態(tài)學方法，對廣西地區(qū)主要食用菌栽培品種平菇污染雜菌的種類進行調(diào)查，并對主要污染菌的分布進行分析，并探討了主要雜菌的綜合防治技術(shù)，旨在為廣西地區(qū)食用菌生產(chǎn)中制訂有效的防治措施提供理論依據(jù)和實踐基礎。

1 材料與方法

1.1 樣品采集樣品采集時間為2014年5月-2015年10月，采集地點包括廣西南寧、隆安、龍州、北海、柳州等地，樣品主要包括污染菌袋、污染菌種、霉變子實體和栽培原料，如稻草、棉子殼、甘蔗渣、雜木屑、麩皮等。釆集樣品的同時注意觀察受污染的菌筒和子實體，描述為害癥狀并進行拍照。記錄雜菌種類、發(fā)生時期、危害情況等。用無菌塑料袋裝好樣品，帶回實驗室進行常規(guī)分離。

1.2 培養(yǎng)基PDA培養(yǎng)基：馬鈴薯200 g，葡萄糖20 g，瓊脂20 g，加水1000 mL。NA培養(yǎng)基：牛肉浸膏3 g，蛋白胨10 g，氯化鈉5 g，瓊脂20 g，加水1000 mL，pH 7.0～7.2。

1.3 污染雜菌的分離與純化真菌的分離純化：將所采集的被真菌污染的培養(yǎng)料、污染菌包、污染菌種和霉變子實體樣品在無菌條件下取一小塊置于PDA平板上，在25℃下培養(yǎng)至長出菌落后挑取菌落邊緣的菌絲進行純化或在產(chǎn)孢后挑取孢子進行單孢分離，將純化好的菌株接種在PDA斜面上培養(yǎng)一周，然后置4℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

細菌的分離純化：將采集的被細菌污染的培養(yǎng)料用無菌水稀釋后在NA平板上劃線，28℃培養(yǎng)2～3 d，挑取細菌單菌落，純化培養(yǎng)，最后置于4℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

1.4 污染雜菌的鑒定真菌鑒定方法：用直徑為5 mm的打孔器無菌操作打取菌餅，反置于PDA平板中間，倒置于28°C恒溫箱培養(yǎng)1～2 d，觀察描述菌落特征。與此同時，進行插片培養(yǎng)，待菌落長出時無菌操作斜插上滅菌蓋片（角度為30°～40°）。注意蓋片位置應插在菌落生長的稍前側(cè)，經(jīng)培養(yǎng)后蓋片內(nèi)側(cè)見到長有一薄菌絲體。用鑷子取下輕輕蓋在滴有乳酸酴溶液的載玻片上，即可在光學顯微鏡下觀察、測量霉菌的分生孢子、產(chǎn)孢結(jié)構(gòu)等形態(tài)并拍照。參照相關資料進行形態(tài)學鑒定。若形態(tài)上難以鑒定的，再結(jié)合分子生物學鑒定。

2 結(jié)果與分析

2.1 廣西地區(qū)平菇污染雜菌情況2014年5月至2016年8月對南寧、隆安、龍州、北海、柳州等地的菌種廠進行污染雜菌調(diào)查，發(fā)現(xiàn)競爭性真菌病害普遍發(fā)生，危害嚴重。通過本次調(diào)查，在廣西共發(fā)現(xiàn)6種主要污染雜菌（表1），主要表現(xiàn)為平菇菌袋或培養(yǎng)料受到病原菌的污染從而造成平菇菌絲不能正常生長（圖1）。這6種雜菌分別為木霉、曲霉、毛霉、青霉、細菌、酵母菌。

圖1 平菇主要雜菌為害癥狀

圖2 雜菌的菌落形態(tài)

表1 平菇主要病害癥狀及分布情況

2.2 污染雜菌的鑒定經(jīng)過形態(tài)學鑒定出6種雜菌（圖2），分別為：側(cè)耳木霉、煙曲霉、黃曲霉、黑曲霉、桔青霉、毛霉、哈茨木霉和一個未知種。

2.3 綜合防治措施（1）木霉類：接種室、培養(yǎng)室要密封熏蒸，保持清潔衛(wèi)生；選料要新鮮無霉變，調(diào)節(jié)好培養(yǎng)料的pH，培養(yǎng)料滅菌要徹底；菌種生產(chǎn)要滅菌徹底，嚴格遵守無菌操作規(guī)程，如有污染即刻棄除；防制菌種試管棉塞受潮，菌瓶、菌袋搬運過程中避免破損，嚴防污染；生長期控制適宜的環(huán)境條件，加強通風，避免高溫高濕；要及時清除污染的培養(yǎng)料，用0.2%多菌靈或克霉靈、3%～5%石灰水噴被感染部位，也可以在患處撒石灰粉覆蓋，要把污染的料運往遠離菇房處深埋。

（2）曲霉類：在夏季潮濕季節(jié)，要防止棉花塞受潮；在高溫季節(jié)，最好不用麥粒、玉米粒等菌種，避免菌種上生長黃曲霉。無菌操作，環(huán)境消毒。栽培場所要干燥、通風。處理好污染料。

（3）青霉類：防治方法同木霉。

（4）毛霉類：栽培原料要新鮮、干燥。滅菌要徹底。接種環(huán)境要認真消毒，接種前用0.25%新潔爾滅液或0.1%多菌靈液噴灑消毒，或用氣霧消毒盒殺菌。培養(yǎng)室要干燥、清潔衛(wèi)生，培養(yǎng)期間經(jīng)常通風換氣，避免高溫高濕。

（5）細菌類：培養(yǎng)料及器皿要徹底滅菌，嚴格無菌操作，保證菌種純正、無污染，培養(yǎng)基內(nèi)可加入抗生素抑制細菌生長，一般以每毫升含100～200單位為宜。

（6）酵母菌類：保證菌種純正、無污染。培養(yǎng)料堆積發(fā)酵，控制培養(yǎng)料含水量，出現(xiàn)癥狀時噴灑2%石灰水，并保持菇房通風干燥。

3 小結(jié)

通過調(diào)查發(fā)現(xiàn)，平菇感染雜菌與氣候條件、設備、菇場環(huán)境衛(wèi)生以及菇農(nóng)的操作管理經(jīng)驗等密切相關。在調(diào)查中發(fā)現(xiàn)，菇場的環(huán)境條件較差的，木霉污染和毛霉發(fā)生嚴重；菇農(nóng)管理經(jīng)驗不足，木霉污染普遍發(fā)生；滅菌設備及管理條件相對較好，木霉污染發(fā)生較少，未發(fā)現(xiàn)鏈孢霉污染。從氣候條件看，在連續(xù)陰雨的3-4月及夏季，高溫高濕的環(huán)境為病原菌孢子的萌發(fā)及生長提供了良好的環(huán)境條件，重復侵染頻繁，為害嚴重。在調(diào)查過程中發(fā)現(xiàn)，對于污染的菌袋大部分菇農(nóng)采取就近丟棄的辦法，將污染袋隨手扔到棚外，或干脆丟到棚內(nèi)一邊，不能及時清走，勢必造成棚周圍及棚內(nèi)的雜菌基數(shù)上升，造成更大的污染。