劉清銀，涂斌

1.解放軍第一五0中心醫(yī)院檢驗(yàn)科，河南洛陽(yáng)471031；2.洛陽(yáng)出入境檢驗(yàn)檢疫局，河南洛陽(yáng)471003

間接免疫熒光法檢測(cè)抗核抗體的結(jié)果分析

劉清銀1，涂斌2

1.解放軍第一五0中心醫(yī)院檢驗(yàn)科，河南洛陽(yáng)471031；2.洛陽(yáng)出入境檢驗(yàn)檢疫局，河南洛陽(yáng)471003

目的探討間接免疫熒光法（IIFA）檢測(cè)抗核抗體在自身免疫性疾病（AID）患者中的結(jié)果應(yīng)用分析。方法分別采用IIFA和膠乳法檢測(cè)50例自身免疫性疾病患者血清樣本抗核抗體（ANA）。結(jié)果IIFA法檢測(cè)血清ANA的靈敏度為76%，膠乳法檢測(cè)血清ANA的靈敏度為58%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。結(jié)論IIFA法檢測(cè)ANA的敏感度明顯高于膠乳法，提高了臨床的陽(yáng)性檢出率。IIFA法用于ANA的篩查，陽(yáng)性標(biāo)本在進(jìn)行滴度檢測(cè)，有助于臨床診斷。

抗核抗體；間接免疫熒光法；膠乳法

抗核抗體（ANA）包括細(xì)胞核的自身抗體和細(xì)胞質(zhì)內(nèi)的核酸和核蛋白的所有成分的自身抗體，是指哺乳動(dòng)物的細(xì)胞中以細(xì)胞核為靶抗原的自身抗體的總稱［1］。ANA在系統(tǒng)性紅斑狼瘡、干燥綜合征、硬皮病、慢性活動(dòng)性肝炎等自身免疫疾病中均呈不同程度的陽(yáng)性。因此在自身免疫性疾病的臨床診斷、鑒別以及評(píng)價(jià)預(yù)后中，ANA檢測(cè)已成為重要的篩查指標(biāo)［2］。臨床上ANA檢測(cè)方法較多，現(xiàn)階段最常用、最有效的檢測(cè)方法是IIFA法。由于不同檢測(cè)方法檢測(cè)靈敏性、準(zhǔn)確性不同，往往影響到檢測(cè)結(jié)果，使檢測(cè)結(jié)果存在一定的差異，尤其在ANA呈弱陽(yáng)性的標(biāo)本中，不同檢測(cè)方法的檢測(cè)成為爭(zhēng)議的焦點(diǎn)。為進(jìn)一步確認(rèn)IIFA法和乳膠法檢測(cè)ANA的效果，進(jìn)而客觀評(píng)價(jià)該兩種檢測(cè)方法差異性，該文2015年10—12月間選取該院確診或疑似為AID的患者50例作為觀察對(duì)象，同時(shí)采用IIFA法和乳膠法檢測(cè)，報(bào)道如下。

1　資料與方法

1.1一般資料

所有標(biāo)本均來(lái)自2015年10—12月到該院確診或疑似AID的門診和住院患者50例，男性15例，女性35例，年齡15～65歲。

1.2儀器和試劑

IIFA法采用北京和杰創(chuàng)新公司試劑盒；膠乳法采用Santa Monica U.S.A試劑盒。試劑均在有效期內(nèi)使用。儀器設(shè)備Olympus BX60型熒光顯微鏡，TS-1型轉(zhuǎn)移脫色搖床。

1.3方法

將HEp-2細(xì)胞進(jìn)行第1次溫育，并固定在載片反應(yīng)區(qū)上，使用1：100稀釋的血清加入，觀察兩者反應(yīng)，如果特異性IgA、IgG和IgM抗體與相應(yīng)抗原結(jié)合，則表示標(biāo)本呈陽(yáng)性。在繼續(xù)進(jìn)行第二次溫育時(shí)，使用顯微鏡觀察HEp-2細(xì)胞的特異性的熒光模型，結(jié)合抗體和熒光素標(biāo)記的抗核抗體反應(yīng)進(jìn)行判斷，如果顯微鏡下HEp-2細(xì)胞顯示無(wú)特異性熒光或極弱且均勻的熒光，則表示標(biāo)本為陰性；如果顯微鏡下HEp-2細(xì)胞顯示顯著特異性熒光，則表示標(biāo)本為陽(yáng)性。并根據(jù)靶抗原在細(xì)胞內(nèi)所處位置的不同區(qū)分熒光核型，并按1∶100、1∶320、1∶100 0、1∶320 0滴度系統(tǒng)報(bào)告抗體最終滴度。熒光較弱型不易區(qū)分者，為弱陽(yáng)性，即滴度為1：100。膠乳法在黑色反應(yīng)卡上各滴加50 uL的血清和反應(yīng)液，攪拌均勻，80～100 rpm旋轉(zhuǎn)搖勻2 min，立即讀取結(jié)果。出現(xiàn)凝集顆粒為陽(yáng)性，沒(méi)有出現(xiàn)凝集顆粒為陰性，對(duì)陽(yáng)性標(biāo)本，可按1∶2、1∶4…進(jìn)行倍比稀釋作半定量試驗(yàn)，抗ANA的滴度為呈陽(yáng)性反應(yīng)的血清最高稀釋度。

2　結(jié)果

IIFA和膠乳法檢測(cè)結(jié)果比較以IIFA和膠乳法檢測(cè)50例臨床確診或疑似為AID的患者血清ANA，IIFA法檢測(cè)陽(yáng)性、弱陽(yáng)性及陰性例數(shù)分別為34，4及12例，陽(yáng)性率為76%，乳膠法檢測(cè)陽(yáng)性、弱陽(yáng)性及陰性例數(shù)分別為28，1及21例，陽(yáng)性率為58%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），見(jiàn)表1。

表1　IIFA法和膠乳法檢測(cè)ANA結(jié)果（n=50）

3　討論

抗核抗體是最常出現(xiàn)于自身免疫性風(fēng)濕?。ńY(jié)締組織病）患者血清中的一組自身抗體的總稱。在各類型的自身免疫性疾病患者的細(xì)胞中，ANA均顯示不同程度的陽(yáng)性。在風(fēng)濕性疾病中，ANA檢測(cè)是臨床鑒別和診斷的重要依據(jù)。ANA的檢測(cè)在臨床上作為自身免疫疾病的篩查檢測(cè)項(xiàng)目早已得到公認(rèn)。大量文獻(xiàn)報(bào)道間接免疫熒光法是檢測(cè)總的抗核抗體的經(jīng)典實(shí)驗(yàn)方法［3-5］，由于ANA的靶分子是細(xì)胞內(nèi)特有的抗原性物質(zhì)，因目前技術(shù)水平所限，這些抗原成分依然難以實(shí)現(xiàn)人工復(fù)制，因此在人工提純過(guò)程中可避免其他核抗原所引起的假陰性。而Hep-2細(xì)胞核質(zhì)豐富，經(jīng)過(guò)提純可以提高ANA檢測(cè)的靈敏性［6-7］，此外抗核抗體的熒光模型對(duì)AID的臨床分類有密切關(guān)系，滴度的高低與臨床癥狀有關(guān)，可用于臨床治療的動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)。但在實(shí)際操作中，由于缺乏適合的參考標(biāo)準(zhǔn)物，造成實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)缺乏參考標(biāo)準(zhǔn)，尤其對(duì)臨界滴度標(biāo)本的檢測(cè)最具爭(zhēng)議。另外，且受到閱片人的知識(shí)技術(shù)的影響，使檢測(cè)結(jié)果的正確性和精確度產(chǎn)生差異。膠乳法簡(jiǎn)便快速，便于觀察，但敏感性差。從表中可以證實(shí)，膠乳法與IIFA法在檢測(cè)滴度為1∶100ANA時(shí)檢測(cè)的結(jié)果符合率較低。說(shuō)明IIFA法的敏感性明顯高于膠乳法，很大程度上提高了檢出陽(yáng)性率，可以作為主要幾種ANA成分的篩查方法，在獲得熒光核型信息同時(shí)觀察抗體滴度的變化情況，指導(dǎo)臨床治療。

現(xiàn)已證實(shí)抗核抗體（ANA）的檢測(cè)在自身免疫性疾病的臨床診斷中具有一定的價(jià)值。但由于自身免疫性疾病類型不同，因此ANA的靈敏度和特異度存在差異，因此在臨床中也具有不同的應(yīng)用價(jià)值。在不同自身免疫性疾病中，特別是風(fēng)濕性疾病，其抗體譜有一定的特征性。幾乎所有的SLE患者抗核抗體呈陽(yáng)性［8］，故ANA常作為SLE診斷的一項(xiàng)實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)；藥物性SLE、混合性結(jié)締組織病（MCTD）ANA陽(yáng)性率為95%～100%；干燥綜合癥（SS）陽(yáng)性率為70%～80%；進(jìn)行性全身性硬化癥（PSS）陽(yáng)性率為85%～95%；其他如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、皮肌炎及多發(fā)性肌炎、慢性活動(dòng)性肝炎、潰瘍性結(jié)腸炎等也有20%～50%的檢出率，常在其他的如兒童慢性關(guān)節(jié)炎、抗心磷脂抗體綜合征等自身免疫性疾病中，臨床上病情監(jiān)測(cè)以及預(yù)后判斷均將ANA檢測(cè)作為重要指標(biāo)［9］。但需注意的是，在這些疾病中，ANA檢測(cè)并非作為臨床診斷依據(jù)，ANA陽(yáng)性僅提示預(yù)后較差，對(duì)于病情監(jiān)測(cè)和預(yù)后具有重要價(jià)值。而甲狀腺疾病、盤狀紅斑狼瘡、RA、多發(fā)性硬化癥、ITP及部分感染性疾病、惡性腫瘤等疾病以及乳房硅膠填充術(shù)者中，ANA也呈較高的陽(yáng)性率，明顯高于普通人群。

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Analysis of Results of Indirect Immunofluorescence in Detecting the Antinuclear Antibodies

LIU Qing-yin1，TU Bing2
1.Department of Clinical Laboratory，PLA 150th Central Hospital，Luoyang，Henan Province，471031 China；2.Luoyang Entry Exit Inspection and Quarantine Bureau，Luoyang，Henan Province，471031 China

Objective To discuss the results of indirect immunofluorescence in detecting the antinuclear antibodies in patients with autoimmune diseases.Methods The antinuclear antibodies of serum samples of 50 cases of patients with autoimmune diseases were detected respectively by the IIFA and emulsion method.Results The difference in the sensitivity degree of ANA detected by IIFA method and emulsion method had statistical significance（76%vs 58%）（P＜0.01）.Conclusion The sensitivity degree of ANA detected by IIFA method is obviously higher than that detected by the emulsion method，which improves the positive detection rate in clinic，the application of IIFA method for ANA screening and the application of positive specimens for titer detection contribute to clinical diagnosis.

Antinuclear antibodies；Indirect immunofluorescence；Emulsion method

R446.61

A

1672-5654（2016）09（c）-0090-02

10.16659/j.cnki.1672-5654.2016.27.090

劉清銀（1979.9-），女，河南駐馬店人，本科，主管技師，主要從事免疫診斷學(xué)研究。

涂斌（1978.1-），男，江西宜春人，本科，主管技師，主要從事免疫診斷學(xué)研究，E-mail：438061016@qq.com。

（2016-06-26）