張斕，劉燦華

(吉安市中心人民醫(yī)院1、核醫(yī)學科2、輸血科，江西 吉安343000)

隨著輔助生殖技術的迅速發(fā)展，精液體外處理的方法也越來越多，每一種方法都有其優(yōu)缺點。洗滌法是精子經(jīng)過洗滌可有效去除精液中的前列腺素，去獲能因子，抗精子抗體等，使精子獲能，提高精子受精能力，但不能很好去除白細胞、細胞碎片、細菌及死精子等。標準上游法是利用精子具有主動游過液體界面進入不同培養(yǎng)液的能力，而達到自行與死精、凝集精子、畸形精子和細胞雜質(zhì)分離的目的。獲得的精子活力、活率較高，達90%以上。但卻存在精子回收率較低的缺點,僅適用于精子活動力、密度均正常的患者。而Isolate密度梯度離心法則是利用不同成熟階段的精子和各種細胞成分各自的密度差異，使之在不同濃度的溶液中，在離心力作用下停留在不同密度的界面上，達到較好的分離目的，處理后精子數(shù)回收較高，處理的時間短，但由于離心時間長，可能對精子造成物理損傷如頂體的松動或不完整等，處理后死精子相對標準上游法多，回收的精子活動率較標準上游法低，可能引起精子受精功能下降等[1]。

1 材料與方法

1.1 臨床資料 選取在本院2009年1月至2012年12月98例夫精宮腔內(nèi)人工受精 (IUI)患者，共162個周期為研究對象，年齡22～38歲，平均(26.5±4.5)歲，原發(fā)性不孕62例，繼發(fā)性不孕36例，不孕時間2～8年。不孕、不育原因：男性因素(少、弱精，心理因素，射精功能異常，液化異常，免疫性因素)70例，女性因素(輕、中度子宮內(nèi)膜異位癥，宮頸黏液分泌異常，排卵障礙，免疫性因素)26例，不明原因性不孕2例。根據(jù)患者精液質(zhì)量情況，接受IUI時選擇的精液處理方法分成三組。其中80個周期采用梯度離心法處理精液為一組，62個周期采用標準上游法處理精液為一組，20個周期采用兩次洗滌處理精液為另一組。

1.2 設備與試劑 WLJY-9000偉力彩色精子分析儀、超凈工作臺(蘇州凈化)、水平離心機、二氧化碳培養(yǎng)箱、HTF-HEEPS、10%SSS、Isolate 精子分離液等。

1.3 處理方法

1.3.1 精液的采集 禁欲3～5d，在IUI日手淫法留取整份精液在無毒性一次性取精杯中，放入37℃恒溫培養(yǎng)箱中等精液完全液化后處理。

1.3.2 精液的處理 兩次洗滌法：一份精液加一份10%SSSHTF-HEEPS 稀釋，200g×10min，去上清液，沉淀加2ml10%SSSHTF-HEEPS混勻，離心洗滌兩次后，沉淀加0.5ml10%SSSHTF-HEEPS混勻做受精用。標準上游法：取試管數(shù)支，每管加入2.0ml精子培養(yǎng)液。再分別將0.5ml液化精液慢慢加入試管底部，使其形成兩個界面。加蓋，45°傾斜，置于37℃、5%CO2孵箱中30～60min。收集各管上清液，離心200g×5min，棄上清液，加2ml培養(yǎng)液，打允后離心200g×5min。留沉淀物，加0.5ml培養(yǎng)液制成精子懸液，調(diào)整精子濃度 10×106～30×106/ml備用[2]。

Isolate密度梯度離心法：向錐底離心試管內(nèi)分別加入Lower phase和Upper phase各1ml、精液2 ml，300g×20min，棄上清液，留沉淀物，加 2ml洗精液，打勻后，離心200g×5min，重復洗滌2次后，棄上清液。留沉淀物，加0.5ml培養(yǎng)液制成精子懸液備用。

2 結(jié)果

精液處理前應取少許精液涂片在顯微鏡下觀查：精液的密度、活力、活率等，并根據(jù)檢驗結(jié)果選擇相應的精液處理方式。三組妊娠率比較見表1，三組精液處理方法在處理前、后精子密度、活率、活力比較見表2。標準上游法、密度梯度離心法兩組之間妊娠率無顯著差異 (P＞0.05),標準上游法、密度梯度離心法組與兩次洗滌法組之間妊娠率有顯著差異(P＜0.05)；標準上游法、密度梯度離心法組與兩次洗滌法組處理后精子密度、活率、活力有顯著差異(P＜0.05)。

表1 三種方法處理后妊娠率比較

表2 三種方法處理前、后精子密度、活率、活力比較

3 討論

影響宮腔內(nèi)人工受精的因素很多，而臨床提高人工受精的妊娠率的關鍵是適應癥的選擇，精子的處理方法，排卵的監(jiān)測，IUI的時機選擇等。因此，選擇相應的精液處理方法是人工受精取得成功的關鍵之一。綜上所述,筆者認為，女方因素引起的不孕(如多囊卵巢等)，排除男方因素，宜采用標準上游法優(yōu)選精子；男方因素引起的不育[3](如少精、弱精及精液量不足1ml)宜采用梯度離心法優(yōu)選精子較好；男方因素引起的不育[3](如活力、活率太低)排除女方因素，宜采用洗滌法。總之，根據(jù)患者精液情況，采用相應的處理方法，以提高臨床妊娠率，服務于更多的患者。

[1]劉燦華,張斕,陳銘,等.梯度離心法與標準上游法在宮腔內(nèi)人工授精(IUI)中應用比較[J].泰山醫(yī)學院學報,2010,31(6):469-470.

[2]鄧曉惠.生殖醫(yī)學技術及其彩色圖譜[M].濟南：山東科學技術出版社,2004:45.

[3]羅明,盧雪芳,饒研文.精漿鋅濃度檢測在不育癥患者中的臨床應用[J].實驗與檢驗醫(yī)學,2008,26(3):259-260.