盧 燕，張曉紅

乙型肝炎患者血清大蛋白與多項肝硬化指標聯(lián)合檢測分析

盧 燕1，張曉紅2

目的 研究乙型肝炎病毒表面抗原大蛋白與甲胎蛋白，I型前膠原羧基末端肽，腫瘤壞死因子ɑ聯(lián)合檢測在乙型肝炎診斷中的意義。方法 采用酶聯(lián)免疫吸附試驗測定192例不同血清標志乙型肝炎患者血清中LHBs與AFP、CTx、TNF的含量，并對相關(guān)性及這些指標的陽性率進行比較分析。結(jié)果 192例乙型肝炎患者血清LHBs的陽性率顯著高于PreS1陽性率，89例“大三陽”組患者血清ALT、CTx顯著高于89例“小三陽”組；2組比較有顯著差異性(P<0.05)；“小三陽”組LHBs、AFP、TNF顯著高于“大三陽”組，2組有顯著差異性(P<0.05)。結(jié)論 乙肝患者血清LHBs比PreS1更靈敏,其含量顯著升高,與AFP、CTx、TNF具有一定的相關(guān)性,聯(lián)合檢測能動態(tài)監(jiān)測患者的病情和發(fā)展趨勢。

乙型肝炎，肝硬化； 乙肝病毒表面抗原大蛋白； 甲胎蛋白； 腫瘤壞死因子； I型前膠原羧基末端肽

乙肝病毒S基因編碼的表面抗原大蛋白包括前S1區(qū)和前S2區(qū)，在空間上具有兩種不同的跨膜構(gòu)象，作為HBV的包膜蛋白，內(nèi)側(cè)可以和HBV核殼體膜結(jié)合，是HBV成熟包裝的關(guān)鍵因為大蛋白包括PreS1,而PreS1是不能單獨游離于血液中，檢測PreS1無法闡述大蛋白的臨床意義，而且PreS1所用抗原為簡單多肽線性表位而LHBs用的是立體構(gòu)象型抗原，使得單獨用PreS1檢出率偏低。目前血清中III型前膠原肽(PCIII)，IV型膠原(CIV)，甲胎蛋白(AFP)，透明質(zhì)酸(HA)及層粘蛋白(LN)的測定在肝硬化中的研究和臨床應(yīng)用已有較多的報道。關(guān)于LHBs在乙型肝病患者肝硬化指標中的研究較少，為了解LHBs在乙型肝病患者與多項肝硬化指標聯(lián)合測定的意義，我們對182例乙型肝病患者血清中LHBs、AFP、CTx、TNF及ALT的含量進行了測定并對其結(jié)果進行了分析，現(xiàn)報告如下。

1 對象與方法

1.1 對象 乙型肝炎患者182例，其中“大三陽”91例，年齡3～67歲，平均年齡25.36歲；“小三陽”91例，年齡10～58歲，平均年齡30.82歲。

1.2 方法 試劑：乙型肝炎血清標志物檢測試劑盒；LHBs定量檢測試劑盒；CTx TNF試劑盒；AFP定量試劑盒。ALT采用貝克曼DXC-800全自動生化分析儀及配套試劑檢測。

1.3 統(tǒng)計學方法 采用SPSS14.0軟件處理，各組數(shù)據(jù)均用±s表示,組間差異采用t檢驗及相關(guān)分析，四格表比較采用χ2檢驗。P<0.05認為差異顯著，有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 LHB與PreS1陽性率比較 91例乙型肝炎“大三陽”血清模式中PreS1抗原陽性41例，LHBs陽性89例，差異有顯著性(χ2=46.02>3.84,P<0.05)。見表1；91例乙型肝炎“小三陽”模式中PreS1抗原陽性23例，LHBs陽性86例，差異有顯著性(χ2=61.06>3.84,P<0.05)。見表1。

2.2 “大三陽”組與“小三陽”組各指標比較 89例“大三陽”組患者ALT、CTx含量分別為(28.132±16.435)ng/L,(239±0.387)ng/L；顯著高于“小三陽”組1(4.588±6.171)ng/L,(0.866±0.303)ng/L；2組比較有顯著差異性(P<0.001); “小三陽”組，LHBs、AFP、TNF含量分別為(19.295±6.741)、(7.495±1.536)、(14.454±3.252)；顯著高于“大三陽”組(11.740±1.378)、(4.973±2.154)、(5.889±1.140)；2組比較有顯著差異性。見表3。

表1 大三陽組LHBs與PreS1陽性率比較

表2 小三陽組LHBs與 PreS1陽性率比較

表3 “大三陽”組與“小三陽”組各指標比較

2.3 ALT正常組與ALT異常組乙型肝炎患者各指標之間的比較 ALT正常組與ALT異常組乙型肝炎患者血清中LHBs，AFP， TNF及ALT含量均有顯著性差異；而血清中CTx含量2組無顯著性差異。見表4。

2.4 AFP正常組與AFP異常組乙型肝炎患者各指標比較 2組乙型肝炎患者血清中AFP，TNF及ALT含量差異均有顯著性；LHBs、CTx 含量差異均無顯著性，見表5。

2.5 “大三陽”組與“小三陽”組中LHBs含量升高與AFP，TNF含量相關(guān)性比較 均有一定的相關(guān)性，相關(guān)系數(shù)分別為0.194；0.399；AFP與TNF含量亦有一定的相關(guān)性，相關(guān)系數(shù)為0.193。

表4 ALT正常組與ALT異常組各指標比較

表5 AFP正常組與AFP異常組各指標比較

3 討論

據(jù)統(tǒng)計，我國肝硬化患者中，80%-90%的患者是乙型肝炎病毒攜帶者或乙肝患者，故此類患者血清中肝硬化指標的聯(lián)合檢測有著重要意義。長期以來，臨床上常以兩對半模式結(jié)合前S1檢測判斷乙型肝炎的病情發(fā)展，而乙型表面抗原大蛋白(LHBs)在乙肝患者病情判斷及肝硬化中的報道尚少。

本研究顯示，在192例乙型肝炎患者血清中，乙肝病毒S基因編碼的表面大蛋白在乙型肝炎“大三陽”和“小三陽”血清模式中的含量有顯著性差別，“小三陽”組含量明顯高于“大三陽”組，P值<0.001，具有高度統(tǒng)計學意義；而LHBs的陽性率和這兩組PreS1陽性率相比較也與有顯著性差異，P<0.05，有統(tǒng)計學意義。提示檢測乙型肝炎患者血清中含前S區(qū)的LHBs更能準確的反映患者的病情,是一個較PreS1敏感且更有意義的指標。

本研究還顯示，在47例ALT正常組與29例ALT異常組乙型肝炎患者血清中LHBs含量有顯著性差異(P=0.005)，提示在乙型肝炎患者病程不同的發(fā)展時期，LHBs含量有所不同，結(jié)合其他肝功能指標更利于我們判斷患者的病情及向肝硬化發(fā)展的趨勢。

現(xiàn)有研究顯示，對肝細胞有直接毒性作用的HBV表達抗原中，只有LHBs有直接的肝細胞毒性。毛玻璃樣變是感染HBV晚期非復(fù)制狀態(tài)肝細胞典型形態(tài)學特征，Hsieh等發(fā)現(xiàn)，PreS1和PreS2區(qū)突變導致HBsAg在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)滯留并誘導內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激。LHBs對HBV復(fù)制過程具有反式激活作用，并與病毒顆粒從細胞內(nèi)釋放調(diào)節(jié)有關(guān)。過量LHBs在肝細胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)積聚是導致內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的關(guān)鍵因素。Ngee-Chih Foo證明LHBs是導致肝細胞損失，死亡和纖維化病變的主要原因。因此檢測LHBs對于反映病毒持續(xù)復(fù)制和肝纖維化趨勢有重要意義。

在乙型肝炎病程中，如肝纖維化時，伴隨肝臟的修復(fù)和肝細胞的再生，可產(chǎn)生和分泌AFP，血清中AFP亦會升高。在肝炎及肝硬化組織中，AFP存在于具有卵圓細胞或者過度增生的細胞漿內(nèi)，血清AFP水平可以反映肝臟炎癥活動的程度。但是當AFP持續(xù)陽性且血清中濃度居高不降者，肝損害程度較輕時，則要高度警惕肝癌的發(fā)生。許多報道顯示，AFP在病毒性肝炎中可以升高，尤其在明顯壞死性炎癥的慢性肝炎和活動性肝硬化時而出現(xiàn)較高滴度的AFP。因此AFP不僅可以作為診斷肝癌的指標，還可以作為了解病毒性乙型肝炎肝臟損害和硬化的程度，并作為判斷預(yù)后的一項指標。尤其是動態(tài)測定AFP對于病毒性乙型肝炎，肝硬化與肝癌的鑒別診斷有較大意義。在我們測定的89 例“大三陽”組與89“小三陽”組乙型肝炎患者血清中AFP含量有顯著性差異(P<0.001)，與以上觀點相符合。

血清I型前膠原羧基末端肽(CTx)是成骨細胞合成膠原時的中間產(chǎn)物，是反映肝細胞活動狀態(tài)的敏感指標。近來的研究發(fā)現(xiàn)肝纖維化時肝組織中主要是I型和III型膠原含量明顯增多，隨著病情發(fā)展逐漸發(fā)展為肝硬化，血清CTx含量顯著升高 。 CTx形成粗大的纖維束分布于門脈及肝靜脈管壁，III型膠原則構(gòu)成網(wǎng)質(zhì)纖維普遍分布于肝小葉內(nèi)。由于CTx在檢測中受干擾因素少，測定CTx能減少與其他膠原的交叉反應(yīng)，準確的反映體內(nèi)CTx的量從而有助于了解肝硬化的情況。

I型膠原在膠原形成細胞內(nèi)產(chǎn)生，然后分泌到外基質(zhì)。此后在內(nèi)切肽酶作用下成為原膠原繼而形成膠原纖維，再在單安氧化酶作用下成為穩(wěn)定的不溶性膠原。CTx可隨體液到達全身，其血清濃度增加反映了膠原代謝的增強。有肝功能減退的患者，血清CTx濃度會相應(yīng)升高，該研究發(fā)現(xiàn)慢性肝炎組，肝硬化組血清較正常對照組CTx含量明顯升高，同時慢性肝炎血清含量明顯高于肝硬化組。而在我們的研究中，在乙型肝炎患者不同病程期，CTx含量差異有顯著性(P<0.001)，“大三陽”組含量顯著高于“小三陽”組，與報道結(jié)果相符。說明了血清CTx可以反映肝纖維化的程度和乙型肝病的活動度，是臨床上判斷肝病進展及預(yù)后的一項參考指標。

[1] 閔福援，孫桂珍，王 健，等.前S1蛋白在乙型肝炎診斷及判斷預(yù)后中的作用[J]．中華檢驗醫(yī)學雜志，2004，27(4)：224-226．

[2] 郝建華.系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者血清I型膠原交聯(lián)羧基末端肽的測定[J].中國國際醫(yī)學雜志,2001，1(4)：310．

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1.安徽省蚌埠市第二人民醫(yī)院 檢驗科，233000；2.廣東省深圳市第六人民醫(yī)院 檢驗科， 518052

盧 燕(1970-)，女，安徽蚌埠市人，檢驗師，大專。

R512.62

A

1008-7044(2014)04-0353-02

2014-03-31)