司馬義江·阿布都熱西提，阿依努爾·阿木提

(新疆維吾爾自治區(qū)喀什地區(qū)藥品檢驗所，新疆 喀什 844000)

西帕依固齦液是由新疆維吾爾族習用單味藥材沒食子經(jīng)提取精制而成的漱口液，具有健齒固齦、清血止痛之功效，臨床上用于牙周疾病的治療。部頒標準僅采用定性鑒別試驗來控制該制劑的質(zhì)量。沒食子酸是西帕依固齦液的主要有效成分之一，研究測定該成分含量的方法可以更好地反映和控制西帕依固齦液的內(nèi)在質(zhì)量。

1 儀器與試藥

島津高效液相色譜系統(tǒng)，包括LC 20AT型雙泵，SIL 20AC型自動進樣器，SPD-M 20A型PDA檢測器;島津uv-2450型紫外可見分光光度計;BP211D型分析天平(德國Sartorius公司)。沒食子酸對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號為0831-9501);西帕依固齦液(新疆奇康哈博維藥有限公司，批號分別為090401，100136，101018);甲醇為色譜純(美國TEDIA試劑公司)，磷酸為分析純(天津市永大化學試劑開發(fā)中心)，所有色譜用試劑均用0.45 gm微孔濾膜過濾;水為重蒸餾水;其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗

色譜柱:VP-ODS柱(250 mm×4.6 mm，5μm);流動相:甲醇-0.025%磷酸溶液(4∶96);流速:1 mL/min;檢測波長:270 nm;柱溫:25℃;進樣量:10μL;分析方法:外標法[1]。取對照品溶液及供試品溶液，按上述色譜條件各進樣10μL，同時采集270 nm光譜數(shù)據(jù)。結(jié)果供試品溶液色譜峰與對照品沒食子酸一致，沒食子酸對照品保留時間為16.2 min，理論板數(shù)大于5 000。高效液相色譜圖見圖1。

圖1 高效液相色譜圖

2.2 溶液配制

精密稱取沒食子酸對照品，加流動相溶解制成0.106 0 g/L的溶液，作為對照品貯備液，精密量取該溶液5 mL，置50 mL量瓶中加流動相稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。精密吸取樣品1 mL，置100 mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度搖勻即得供試品溶液。微孔濾膜濾過，備用。

2.3 方法學考察

線性關(guān)系考察:精密量取對照品貯備液(0.106 0 g/L)1.0，2.0，4.0，6.0，8.0，10.0 mL，置 10 mL 量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，分別取10μL，按2.1項下色譜條件操作，以6次測定的峰面積平均值考察線性范圍。線性回歸方程為 Y=2.4×104X-1.4 ×103，r=0.999 6(n=6)。結(jié)果表明，沒食子酸質(zhì)量濃度在10.6～106.0μg/mL范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

精密度試驗:精密量取對照品貯備液(0.106 0 g/L)5 mL，置50 mL量瓶中加流動相稀釋至刻度，搖勻，取10μL，重復(fù)進樣5次。結(jié)果峰面積的 RSD為0.42%(n=5)，表明方法有較高的精密度。

穩(wěn)定性試驗:取同一溶液，分別于 0，1，2，4，6 h 時進樣，進樣量為10μL，測定沒食子酸的峰面積。結(jié)果的 RSD為1.24%。

重復(fù)性試驗:取同一批號樣品(批號為100136)，平行制備5份供試品溶液并依法測定。結(jié)果沒食子酸含量的 RSD為0.89%。

加樣回收試驗:精密量取已知含量的樣品(批號為090401，含量為34.94μg/mL)6份，各1.0 mL，分別置100 mL量瓶中，再分別加入對照品溶液 1.0，1.0，2.0，4.0，6.0，8.0，10.0 mL，加流動相稀釋至刻度，進樣測定，計算回收率。結(jié)果見表1。

表1 沒食子酸加樣回收試驗結(jié)果(n=6)

2.4 樣品含量測定

取3批樣品，依法制備供試品溶液，按擬訂的色譜條件進樣測定，按外標法計算沒食子酸含量。結(jié)果批號分別為090401，100136，101018的樣品中沒食子酸含量分別為0.03494，0.03718，0.032 56 g/L。

3 討論

取沒食子酸對照品適量，用流動相溶解并稀釋成0.1 g/L溶液，用紫外可見分光光度計于200～400 nm波長范圍進行掃描，可見其在220，270 nm波長處有最大吸收，但在220 nm檢測波長下，流動相中甲醇及樣品中其他物質(zhì)的紫外吸收干擾較大，基線不穩(wěn)，故選擇270 nm為檢測波長。

采用文獻[2]的方法試驗，流動相用甲醇-水(5∶95)、水-乙酸(98∶2)、甲醇-0.5%冰醋酸(15∶85)，在該制劑中沒食子酸的分離效果均不佳?？紤]到?jīng)]食子酸顯酸性，故流動相的pH對沒食子酸的分離影響較大，通過不斷改變甲醇與磷酸水溶液的比例及流速，選定甲醇-0.025%磷酸水溶液(4∶96)及流速1mL/min比較合適，分離度好且保留時間適宜。

本試驗測定了不同批號的西帕依固齦液，結(jié)果均能檢出沒食子酸，但含量有所差異。筆者通過試驗研究，建立了測定西帕依固齦液中沒食子酸含量的高效液相色譜法，取樣量少，方法簡單，重現(xiàn)性好，結(jié)果準確，可作為質(zhì)量控制分析方法，為沒食子酸的含量測定提供有效方法。

[1]WS3-BW-0123-98，衛(wèi)生部藥品標準·維吾爾藥分冊[S].

[2]徐小平，王 曙.HPLC測定4種藏藥中沒食子酸的含量[J].華西藥學雜志，2003，18(6):448.