方宗華, 何 勇, 高永好, 吳宗好

(合肥華方醫(yī)藥科技有限公司，安徽 合肥 230088)

甲磺酸多沙唑嗪控釋片是一種長效的選擇性α1腎上腺素能受體阻滯劑，具有降低血壓和改善良性前列腺增生患者的癥狀并對血脂產(chǎn)生有利影響的喹唑啉類衍生物[1-3]。本文采用高效液相色譜法對研制的甲磺酸多沙唑嗪控釋片的含量進行測定并對其方法進行驗證，通過樣品的前處理和色譜條件的優(yōu)化，消除了高分子輔料PEO等對含量測定的干擾，實驗證明該法用于甲磺酸多沙唑嗪控釋片的質量控制專屬可行。

1 儀器與試藥

日本島津高效液相色譜儀(20AD,紫外檢測器)；日本GL Sciences lnc WondaSil?C18色譜柱(150×4.6 mm，5μm)；日本紫外可見分光光度計(UV-1700)；METTLER TOLEDO分析天平(AG135)；甲磺酸多沙唑嗪控釋片(實驗室自制)；甲磺酸多沙唑嗪對照品(中國藥品生物制品檢定所) ；乙腈(色譜純) ；水為純化水；其它試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：C18；流動相：水(每1000 mL水中含冰醋酸6 mL與三乙胺3 mL)-乙腈(68∶32)；檢測波長：246nm；流速：1.0 mL/mL；柱溫:室溫；進樣量為10μL。理論板數(shù)：按多沙唑嗪峰計算不得小于2000，分離度：多沙唑嗪峰與相鄰雜質峰的分離度應大于2.0。

2.2 專屬性試驗

2.2.1 對照品溶液的制備

取甲磺酸多沙唑嗪對照品10.81 mg，置100 mL量瓶中，加甲醇適量溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取5 mL置25 mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2.2 供試品溶液的制備

取甲磺酸多沙唑嗪控釋片1片，用刀片切碎，全量轉移至100mL量瓶中，加甲醇75mL，放置過夜，超聲振搖使溶解，放冷，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，離心(必要時濾過)，精密量取上清液10mL，置25mL量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2.3 空白輔料溶液的制備

取空白輔料混合粉末約291.89 mg，精密稱定，置100 mL量瓶中，加入75 mL甲醇，超聲使溶散，放冷，用流動相稀釋至刻度，搖勻，離心，精密量取上清液10 mL，置25 mL量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，濾過，即得。

2.2.4 測定法

精密量取上述3種溶液各10μL，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖。各色譜圖見圖1～3。

圖1 空白輔料色譜圖

圖2 供試品色譜圖

圖3 對照品色譜圖

2.2.5 結論

空白輔料在此條件下無干擾，多沙唑嗪峰前后無其他雜質峰影響。由以上試驗結果可知，本法專屬性強、操作簡便，適合本品含量測定。

2.3 線性關系與線性范圍

精密稱取甲磺酸多沙唑嗪對照品10.81 mg，置100 mL量瓶中，加甲醇溶解并用流動相稀釋至刻度，搖勻，精密量取上清液5 mL，置25 mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。精密量取該對照品溶液1、5、10、15、20、30μL，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以進樣量(ng) 對峰面積(A)進行線性回歸，得回歸方程。結果見表1及圖4。

表1 甲磺酸多沙唑嗪線性回歸方程

圖4 甲磺酸多沙唑嗪含量測定標準曲線圖

結果表明：甲磺酸多沙唑嗪進樣量在21.62 ng～648.60 ng的范圍內(nèi)，線性關系良好。

2.4 精密度試驗

精密量取上述同一甲磺酸多沙唑嗪對照品溶液(21.62μg/mL)10μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，重復進樣6次，以峰面積計算相對標準偏差RSD值(%)，結果見表2。

表2 精密度試驗結果(n=6)

結果表明，本法精密度良好。RSD(%)=0.30%<2.0%。

2.5 溶液穩(wěn)定性試驗

取甲磺酸多沙唑嗪控釋片1片，用刀片切碎，置100 mL量瓶中，加甲醇75 mL，密塞，放置過夜，超聲振搖使溶解，放冷，加流動相至刻度，搖勻，離心(必要時濾過)，精密量取上清液10 mL，置25 mL量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，濾過，即得。

精密量取上述供試品溶液10μL立即進樣，并在2、6、10、24、36 h后，分別進樣10μL測定，以峰面積計算RSD(%)，結果見表3。

表3 供試品溶液穩(wěn)定性試驗結果

結果表明，供試品溶液在36 h內(nèi)穩(wěn)定，RSD(%)=0.64%<2.0%。

2.6 中間精密度試驗

2.6.1 供試品溶液的制備

取同一批號(170801)甲磺酸多沙唑嗪控釋片10片(共6份)，分別將每片用刀片切碎，置1000 mL量瓶中，加甲醇750 mL，密塞，放置過夜，超聲振搖使溶解，放冷，用流動相稀釋至刻度，搖勻，離心，精密量取上清液10 mL，置25 mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，濾過，即得。

2.6.2 對照品溶液的制備

取甲磺酸多沙唑嗪對照品約21 mg，精密稱定，置100 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取5 mL置50 mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。

2.6.3 測定法

精密量取對照品溶液和供試品溶液各10μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標法以峰面積計算各份樣品的含量，即得。分別由不同的人，不同儀器，不同時間，依法測定含量，試驗結果見表4。

由上述試驗結果可知：同一供試品(170801)，由不同的人，不同儀器，不同時間，依法測定含量，最低含量為104.13%，最高含量為105.30%，平均含量為104.65%， RSD=0.45%<2.0%，表明用該法測定甲磺酸多沙唑嗪控釋片含量，中間精密度良好。

表4 中間精密度試驗試驗結果

2.7 準確度試驗

采用加樣回收法，精密稱取甲磺酸多沙唑嗪對照品8.17、8.36、8.51、10.02、10.15、10.07、12.41、12.09、12.03 mg共9份，分別置250 mL量瓶中，再精密稱處方量的空白輔料約589 mg(共9份)分別置同一250 mL量瓶中，加185mL甲醇，超聲振搖使溶解，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，離心，精密量取上清液10 mL，置25 mL量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，濾過，作為供試品溶液。另精密稱取甲磺酸多沙唑嗪對照品適量(約相當于多沙唑嗪16 mg，甲磺酸多沙唑嗪與多沙唑嗪的換算因子為0.8245)，置100 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取5 mL置50 mL量瓶中，加流動相至刻度，搖勻，作為對照品溶液。

分別精密量取對照品溶液與供試品溶液(9份)各10μL，注入液相色譜儀，測定，即得。結果見表5。

表5 準確度試驗結果

結果表明，平均回收率為99.59%，RSD(%)=0.58%<2.0%。說明本方測定甲磺酸多沙唑嗪控釋片含量準確度高。

2.8 耐用性試驗

為了考察變動因素對含量測定的影響，選擇調(diào)節(jié)不同波長、不同流動相比例及不同柱溫，來考察在不同的色譜條件下測定的含量數(shù)據(jù)。耐用性試驗結果見表6。

表6 甲磺酸多沙唑嗪控釋片在不同條件下試驗結果

試驗結果：在不同的色譜條件下測定，平均含量為105.52， RSD(%)=0.60%<2.0%。試驗結果表明，流動相的比例在(73∶27)～(63∶37)范圍內(nèi)變化、柱溫在25～35℃范圍內(nèi)變化、檢測波長在244～248 nm范圍內(nèi)變化，對供試品溶液含量測定影響不大，表明本方法耐用性良好。

2.9 重復性試驗

2.9.1 供試品溶液的制備

取同一批號(170801)甲磺酸多沙唑嗪控釋片10片(共6份)，分別將每片用刀片切碎，置1000 mL量瓶中，加甲醇750 mL，密塞，放置過夜，超聲振搖使溶解，放冷，用流動相稀釋至刻度，搖勻，離心(必要時濾過)，精密量取上清液10 mL，置25 mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，濾過，即得。

2.9.2 對照品溶液的制備

取甲磺酸多沙唑嗪對照品約10.19 mg，精密稱定，置50 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取5 mL置50 mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。

2.9.3 測定法

精密量取對照品溶液和供試品溶液各10μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標法以峰面積計算各份樣品的含量，即得。試驗結果見表7。

表7 重復性試驗試驗結果

由上述試驗結果可知：同一供試品(170801)重復測定6次，最低含量為102.50%，最高含量為106.33%%，平均含量為104.15%， RSD=1.58%<2.0%，表明用該法測定甲磺酸多沙唑嗪控釋片含量重復性良好。

2.10 三批樣品的含量測定

取本品10片，分別將每片用刀片切碎，各全量轉移至100 mL量瓶中，加甲醇75 mL，密塞，放置過夜，超聲振搖使溶解，放冷，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，離心(必要時濾過)，精密量取上清液10 mL置25 mL量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，精密量取10μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另精密稱取甲磺酸多沙唑嗪對照品適量(約相當于多沙唑嗪16 mg，甲磺酸多沙唑嗪與多沙唑嗪的換算因子為0.8245)，置100 mL量瓶中，加甲醇適量溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取5 mL置50 mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，同法測定。按外標法以峰面積計算每片中C23H25N5O5的含量并計算10片的平均含量，即得。結果見表8。

表8 三批樣品的含量測定結果

3 結果與討論

3.1 流動相的選擇

參照有關文獻[2-3]中HPLC法測定甲磺酸多沙唑嗪含量選用的流動相為，經(jīng)試驗摸索，我們選用以水(每1000 mL水中含冰醋酸6 mL與三乙胺3 mL)-乙腈(68∶32)為流動相，所得峰形較好，專屬性強，溶劑、輔料無干擾。

3.2 檢測波長的選擇

取甲磺酸多沙唑嗪對照品約12.32 mg，置100 mL量瓶中，加流動性適量，超聲使溶解，放冷，用流動相稀釋至刻度，搖勻，精密量取5 mL，置50 mL量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，照紫外-可見分光光度法(中國藥典2015年版四部通則0401)，以流動相為空白溶劑，在200～400 nm波長范圍內(nèi)掃描，結果甲磺酸多沙唑嗪溶液在246.5nm波長處有最大吸收，故選用246 nm作為甲磺酸多沙唑嗪控釋片含量測定(HPLC法)的檢測波長。。

3.3 色譜填充柱的選擇[2-3]

參考有關文獻[2-3]，其HPLC法測定甲磺酸多沙唑嗪含量，色譜柱均選用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑。本方法所用的色譜柱為GL Sciences公司生產(chǎn)的(150 mm×4.6 mm，5μm)WondaSil?C18色譜柱。