摘要：為明確抗黑脛病紅花大金元適宜采收成熟度，以抗黑脛病紅花大金元為材料，設(shè)置ST1（提前4 d采收）、ST2（當(dāng)?shù)卣２墒眨?、ST3（延遲4 d采收）、ST4（延遲8 d采收）4個成熟度處理，研究不同采收成熟度對田間鮮煙葉的外觀特征、SPAD值、化學(xué)成分、感官質(zhì)量及代謝組學(xué)的影響。結(jié)果表明，隨著采收期的延遲，煙葉外觀由綠變黃，成熟斑增多，SPAD值逐漸降低，在煙葉開始成熟落黃時，富集在植物激素信號轉(zhuǎn)導(dǎo)代謝通路的代謝物脫落酸含量顯著上調(diào)；煙葉淀粉、總糖和還原糖含量呈現(xiàn)出先增多后下降的趨勢，煙堿含量增多，延遲4 d采收富集在三羧酸循環(huán)等分解糖類物質(zhì)代謝通路的檸檬酸、琥珀酸和β-D-葡萄糖醛酸苷等代謝物呈上調(diào)表達(dá)，富集在氨?；?tRNA生物合成、精氨酸生物合成、ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白、苯丙氨酸代謝及煙酸鹽和煙酰胺代謝等代謝通路上的代謝產(chǎn)物，呈先上調(diào)后下調(diào)表達(dá)；煙葉中性香氣成分含量逐漸增加，感官質(zhì)量得到改善，L-異亮氨酸、L-精氨酸、L-苯丙氨酸、L-酪氨酸、檸檬酸和琥珀酸等代謝產(chǎn)物呈先上調(diào)后下調(diào)表達(dá)。綜合分析，抗黑脛病紅花大金適宜采收成熟度為當(dāng)?shù)卣２墒栈A(chǔ)上延遲4 d采收，此時煙葉化學(xué)成分較協(xié)調(diào)，香氣量充足、香氣質(zhì)好，感官質(zhì)量最佳；田間鮮煙的采收成熟特征為葉面淺黃，葉面落黃50%～59%，主脈變白50%～59%，支脈變白40%～49%，絨毛脫落40%～49%，成熟斑稍有，煙葉SPAD值為23.66～25.16。

關(guān)鍵詞：成熟度；代謝組學(xué)；差異代謝物；抗黑脛病紅花大金元；化學(xué)成分；感官品質(zhì)

中圖分類號：S572.04""文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號：1002-1302（2025）01-0237-12

成熟度是煙葉生產(chǎn)中重要一環(huán)，是烤煙重要的質(zhì)量要素，在烤煙國家標(biāo)準(zhǔn)中是第一品質(zhì)要素^［1］。保證和提高煙葉質(zhì)量的前提是采收真正成熟煙葉。云南省煙草農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院以紅花大金元為受體、抗黑脛病種質(zhì)RBST為供體，經(jīng)分子標(biāo)記選擇技術(shù)選育出抗黑脛病紅花大金元（以下簡稱抗性紅大）這一新品種。然而抗性紅大成熟特性不明確，使得工業(yè)需求得不到滿足，因此提升其采收質(zhì)量是十分有必要的。使用便攜式葉綠素儀可以在對煙葉葉片無損傷狀況下測定其SPAD值，進(jìn)而實(shí)時判斷葉片葉綠素的含量，從而客觀反映煙葉成熟程度^［2］。張冰濯等研究發(fā)現(xiàn)，隨著采收期延遲，煙葉成熟度增高，葉脈變白，成熟斑逐漸增多，煙葉顏色由綠變黃，煙葉SPAD值呈下降趨勢^［3-4］。賈中林等研究表明，隨著煙葉成熟度的增加，煙葉物質(zhì)積累速度下降，內(nèi)含物質(zhì)消耗增加，其內(nèi)部淀粉和糖含量增加，到達(dá)頂峰時含量下降^［5-6］。通過適當(dāng)提高煙葉成熟度的栽培措施，可以協(xié)調(diào)煙葉化學(xué)成分，改善感官質(zhì)量，但是煙葉成熟度過高，煙葉質(zhì)量將大幅下降^［7-8］。

煙葉成熟過程需要經(jīng)過復(fù)雜的生理代謝變化，代謝產(chǎn)物的動態(tài)變化影響煙葉內(nèi)含物質(zhì)的變化，從而影響煙葉的外觀變化、化學(xué)成分及煙葉的感官質(zhì)量^［9-10］。通過分析不同時期煙葉樣品中的糖類、脂類和氨基酸等小分子代謝物的變化，可以從全局表征煙葉受到內(nèi)外環(huán)境干擾后代謝產(chǎn)物的變化^［11-12］。賈中林等在研究中發(fā)現(xiàn)，在煙葉成熟階段起重要調(diào)控作用的代謝通路為TCA循環(huán)與丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代謝，影響煙葉代謝產(chǎn)物的形成^［13］。彭翠云等在研究中發(fā)現(xiàn)，煙葉采收期的延遲，將引起富集在淀粉與蔗糖途徑中代謝物表達(dá)量先下調(diào)再上調(diào)的表達(dá)趨勢，并在延遲8 d采收時煙葉內(nèi)淀粉合成、積累量達(dá)到峰值；氮代謝途徑的關(guān)鍵代謝產(chǎn)物，隨采收期延遲表達(dá)量下調(diào)，氮代謝減弱^［14-15］。本研究采用液相色譜質(zhì)譜（LC-MS）聯(lián)用技術(shù)對烤煙抗性紅大進(jìn)行非靶向代謝組學(xué)分析，通過分析成熟過程中代謝物的動態(tài)變化，結(jié)合傳統(tǒng)生理指標(biāo)化學(xué)成分含量、中性香氣成分含量和感官質(zhì)量的變化，確定抗性紅大適宜采收時間，以期為生產(chǎn)優(yōu)質(zhì)抗性紅大煙葉提供理論依據(jù)和技術(shù)支持。

1"材料與方法

1.1"試驗(yàn)材料

試驗(yàn)于2022年在云南省大理白族自治州彌渡縣密祉鎮(zhèn)進(jìn)行，供試烤煙品種為抗黑脛病紅花大金元。試驗(yàn)田前作為貢菜。供試土壤肥力中等，有機(jī)質(zhì)含量適中。

1.2"試驗(yàn)設(shè)計

根據(jù)當(dāng)?shù)貧夂驐l件和煙葉耐熟性情況，采收成熟度設(shè)4個水平（表1），分別標(biāo)記為ST1（提前4 d采收）、ST2（當(dāng)?shù)卣２墒眨T3（延遲4 d采收）、ST4（延遲8 d采收）。本試驗(yàn)采用的試驗(yàn)設(shè)計為完全隨機(jī)區(qū)組試驗(yàn)，每個試驗(yàn)處理重復(fù)3次，株行距為0.5 m×1.2 m，種植密度為16 500株/hm²。

1.3"測定方法

1.3.1"煙葉SPAD值測定

在各試驗(yàn)小區(qū)挑選長勢均勻、代表性較強(qiáng)的15株煙株進(jìn)行測定，以葉片的主脈作為對稱軸，利用FK-YL01葉綠素儀（山東方科儀器有限公司）測定主脈兩側(cè)葉基、葉中以及葉尖6個點(diǎn)，以測定的6個SPAD值均值作為此葉片的SPAD值^［16］。

1.3.2"化學(xué)成分測定

使用AA-Ⅲ型連續(xù)流動化學(xué)分析儀（德國布朗盧比公司），按照煙草及煙草制品標(biāo)準(zhǔn)體系測定煙葉化學(xué)成分含量^［17］。

1.3.3"香氣成分測定

烤后煙香氣成分測定的方法為內(nèi)標(biāo)法內(nèi)標(biāo)為硝基苯^［18］。前處理通過水蒸氣蒸餾—二氯甲烷萃取法獲得有機(jī)相，并利用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀將有機(jī)相旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至1 mL左右，之后移至色譜瓶中，用氣質(zhì)聯(lián)用儀（GC/MS：Agilent 7890A-5975C，美國安捷倫科技有限公司）測定。

1.3.4"代謝組測定

稱取60 mg煙葉樣品，放入1.5 mL離心管中；加入2個小鋼珠和600 μL甲醇-水（體積比為7 ∶3，含L-2-氯苯丙氨酸，4 μg/mL）；放于-40 ℃冰箱中2 min進(jìn)行預(yù)冷，之后放入研磨機(jī)中進(jìn)行研磨（60 Hz，2 min）；冰水浴超聲提取30 min，-40 ℃過夜靜置；低溫離心10 min（13 000 r/min，4 ℃），使用注射器吸取150 μL的上清液，用0.22 μm有機(jī)相針孔過濾器過濾后，轉(zhuǎn)移到LC進(jìn)樣小瓶，-80 ℃下進(jìn)行保存，直至進(jìn)行 LC-MS分析。質(zhì)控樣本（QC）由所有樣本的提取液等體積混合制備而成。所有提取試劑在使用前均需在-20 ℃進(jìn)行預(yù)冷。本次試驗(yàn)的分析儀器為ACQUITY UPLC I-Class plus超高效液相串聯(lián)QE高分辨質(zhì)譜儀組成的液質(zhì)聯(lián)用系統(tǒng)。色譜柱為ACQUITY UPLC HSS T3 （100 mm×2.1 mm，1.8 μm）；柱溫為45 ℃；流動相A為水（含0.1%甲酸），B為乙腈（含0.1%甲酸）；流速為0.35 mL/min；進(jìn)樣體積為2 μL。離子源為ESI，樣品質(zhì)譜信號采集分別采用正負(fù)離子掃描模式。

1.4"數(shù)據(jù)分析

采用Microsoft Excel 2020對進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和SPSS 17.0進(jìn)行統(tǒng)計分析，使用R語言進(jìn)行OPLS-DA分析和熱圖、顯著性氣泡圖繪制。

2"結(jié)果與分析

2.1"不同采收成熟度田間鮮煙外觀特征及SPAD值

由圖1可知，隨著采收成熟度的提高，不同處理的煙葉成熟特征有明顯改變，煙葉從葉尖開始逐漸變黃，葉脈變白，成熟斑增加。

SPAD值可以用來判斷煙葉的成熟度（圖2）可知，隨著采收成熟度的增加，煙葉SPAD值逐漸降低，各處理間存在顯著差異。由SPAD值和采收成熟度趨勢線方程可以看出，r²gt;0.990 0，方程擬合程度較高，因此可以利用采收成熟度趨勢線方程找出煙葉適宜采收成熟度的SPAD值，在煙葉生產(chǎn)中進(jìn)行指導(dǎo)。

2.2"不同采收成熟度對抗性紅大代謝組學(xué)的影響

2.2.1"正交-偏最小二乘判別分析

正交-偏最小二乘判別分析能夠?qū)δＰ徒忉屇芰M(jìn)行增強(qiáng)，從而將組間差異最大程度展現(xiàn)出來。4個不同采收時間之間的OPLS-DA模型見圖3。OPLS-DA-ST2_ST1、OPLS-DA-ST3_ST1、OPLS-DA-ST4_ST1、OPLS-DA-ST3_ST2、OPLS-DA-ST4_ST2和OPLS-DA-ST4_ST3模型的R²Y均為0.999，Q²分別為0.879、0.956、0.978、0.928、0.972、0.768，表明模型預(yù)測能力較好。OPLS-DA得分圖（圖3-A）用于描述樣本的聚類結(jié)果，4組樣本兩兩之間顯著分離，說明煙葉之間存在代謝差異。

為進(jìn)一步驗(yàn)證OPLS-DA模型的可靠性，對模型進(jìn)行了交叉驗(yàn)證和置換檢驗(yàn)，結(jié)果見圖3-B。平面直角坐標(biāo)系虛線經(jīng)過的最右側(cè)2點(diǎn)（x=1.0）為原始模型的R²和Q²，左側(cè)的所有點(diǎn)是Y置換后模型的R²′和Q²′，圖中Q²點(diǎn)的回歸線在縱坐標(biāo)上的交點(diǎn)＜0，說明模型預(yù)測的結(jié)果具有可靠性，模型沒有過擬合問題，可用于分析ST1、ST2、ST3、ST4之間的差異代謝物。

2.2.2"差異代謝物篩選及分析

將4個處理的差異代謝物進(jìn)行兩兩比較， 得到不同分組間差異代謝物情況（表2和圖4）。提前4 d采收（ST1）和正常采收（ST2）之間共同的顯著差異代謝物有250個，其中上調(diào)的差異代謝物有150個，下調(diào)的有100個。提前4 d采收（ST1）和延遲4 d采收（ST3）之間共同的顯著差異代謝物有459個，其中上調(diào)的差異代謝物有230個，下調(diào)的有229個。提前4 d采收（ST1）和延遲8 d采收（ST4）之間共同的顯著差異代謝物有539個，其中上調(diào)的差異代謝物有302個，下調(diào)的有237個。正常采收（ST2）和延遲4 d采收（ST3）之間共同的顯著差異代謝物有372個，其中上調(diào)的差異代謝物有159個，下調(diào)的有213個。正常采收（ST2）和延遲8 d采收（ST4）之間共同的顯著差異代謝物有620個，其中上調(diào)的差異代謝物有320個，下調(diào)的有300個。延遲4 d采收（ST3）和延遲8 d采收（ST4）之間共同的顯著差異代謝物有239個，其中上調(diào)的差異代謝物有130個，下調(diào)的有109個。

為了直觀地將樣本間的關(guān)系和差異代謝物在樣本間的表達(dá)差異展現(xiàn)出來，本研究對顯著差異代謝物進(jìn)行了VIP排序，篩選出排序前20的差異代謝物，并利用它們的表達(dá)量分別進(jìn)行層次聚類，結(jié)果見圖5。相比于提前4 d采收（ST1），正常采收（ST2）中2，4，7，10，13，16，19-二十二碳庚酰輔酶A、10-乙酰氧基毒素、乙酰輔酶A、升麻素苷、牛痘苷、5-羥基-7，8，2′-三甲氧基黃酮-5-葡萄糖苷、3-（1，1-二甲基烯丙基）東莨菪素-7-葡萄糖苷等13種差異代謝物上調(diào)，山柰酚-3-［葡萄糖基-（1-gt;3）-鼠李糖基-（1-gt;6）-半乳糖苷］、3′-葡萄糖基-2′，4′，6′-三羥基苯乙酮、1，3-雙（二苯基膦）丙烷、12-氧代-20-二羥基白三烯B4等7種差異代謝物下調(diào)。相比于正常采收（ST2），延遲4 d（ST3）中10，12，13，16-雙表二氧基-9-氫過氧基-14-十八烯酸甲酯、二氫薔薇苷和13，14-二氫-16，16-二氟前列腺素J2等13個差異代謝物下調(diào)，檸檬酸、L-脯氨酸和馬比奧苷C（一種二萜苷）等7個差異代謝物上調(diào)。相比于延遲4 d（ST3）、延遲8 d（ST4）中澤多阿龍二醇、3，11，12-三羥基-1（10）-螺替芬-2-酮、6R，8Z-6-羥基-3-氧代-8-四氫苯腺烯酸、三丁酸甘油酯、地奧球苷D、8-丙?；虑汛?、{（2-羥基-3-甲基-5-氧代-2H-呋喃-4-基）-（3-甲氧基-5，6-二甲基-2-氧雜雙環(huán)［2.2.2］辛烷-5-基）甲基}2-甲基丁烯酸酯、3′-羥基-HT-2毒素、芐基O-［阿拉伯呋喃糖基-（1-gt;6）-葡萄糖苷］、15-乙酰氧基西吡啶-3，4-二醇4-O-α-D-吡喃葡萄糖苷等11種差異代謝物上調(diào)，（3S，7E，9S）-9-羥基-4，7-巨柱二烯-3-酮-9-葡萄糖苷、13，14-二氫-16，16-二氟前列腺素J2、葫蘆巴堿、（R）-（+）-2-吡咯烷酮-5-羧酸、3，4-二氫-2H-1-苯并吡喃-2-酮等9種差異代謝物下調(diào)。

2.2.3"差異代謝物KEGG富集

為明確提前4 d采收和正常采收（ST1和ST2）、正常采收和延遲4 d采收（ST2和ST3）、延遲4 d和延遲8 d（ST3和ST4）3個比較組之間差異代謝物代謝途徑的變化機(jī)制，分別對3個比較組進(jìn)行KEGG通路富集分析，篩選出31、40、37條代謝通路，其中差異顯著的分別有4、7、13條。

ST1和ST2中差異明顯的代謝通路（圖6）為氨?；?tRNA生物合成、精氨酸生物合成、ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白、植物激素信號轉(zhuǎn)導(dǎo)。

如表3所示，富集在氨酰基-tRNA生物合成代謝通路的差異代謝物（均上調(diào)）有L-谷氨酰胺、L-精氨酸、L-苯丙氨酸；富集在精氨酸生物合成代謝通路的差異代謝物（均上調(diào)）有L-谷氨酰胺、L-精氨酸；富集在ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白代謝通路的差異代謝物（均上調(diào)）有L-谷氨酰胺、L-精氨酸、殼二糖；富集在植物激素信號轉(zhuǎn)導(dǎo)代謝通路的差異代謝物有脫落酸（下調(diào)）。

ST2和ST3差異顯著的代謝通路是花生四烯酸代謝，三羧酸循環(huán)，丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代謝，磷脂酰肌醇信號通路，甘油磷脂代謝，氨?；?tRNA生物合成，戊糖和葡萄糖醛酸酯相互轉(zhuǎn)化（圖7）。

如表4所示， 富集到花生四烯酸代謝通路的差基-tRNA生物合成，苯丙氨酸代謝，苯丙烷類生物合成，花生四烯酸代謝，酪氨酸代謝，氰基氨基酸代謝，煙酸鹽和煙酰胺代謝，硫代葡萄糖苷生物合成，各種抗生素的生物合成-第二部分，苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸的生物合成，單巴坦生物合成，α-亞麻酸代謝，賴氨酸降解。

如表5所示，富集到氨?；?tRNA生物合成代謝通路的差異代謝物（均下調(diào)）有L-異亮氨酸、L-精氨酸、L-苯丙氨酸、L-酪氨酸。富集到苯丙氨酸代謝代謝通路的差異代謝物（均下調(diào)）有L-酪氨酸、L-苯丙氨酸、2-羥基-3-苯基丙烯酸酯、琥珀酸。富集到苯丙烷類生物合成代謝通路的差異代謝物（均下調(diào)）有L-苯丙氨酸、L-酪氨酸、4-香豆酸鹽、香豆素。富集到花生四烯酸代謝通路的差異代謝物（均下調(diào)）有6-酮-前列腺素F1α、20-羥基-白三烯B4、11，14，15-三羥基二十碳三烯酸、8-異前列腺素F2α。富集到酪氨酸代謝通路的差異代謝物（均下調(diào)）有L-酪氨酸、4-香豆酸鹽、3，4-二羥基苯基丙酸酯、琥珀酸。富集到氰基氨基酸代謝通路的差異代謝物（均下調(diào)）有L-酪氨酸、L-異亮氨酸、L-苯丙氨酸。富集到煙酸鹽和煙酰胺代謝通路的差異代謝物（均下調(diào)）有煙酸D-核糖核苷、N-甲基煙酸酯、琥珀酸。富集到硫代葡萄糖苷生物合成代謝通路的差異代謝物（均下調(diào)）有 L-異亮氨酸、L-苯丙氨酸、L-酪氨酸。富集到各種抗生素的生物合成-第二部分代謝通路的差異代謝物（均下調(diào)）有L-苯丙氨酸、L-酪氨酸、4-香豆酸鹽。富集到苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸的生物合成代謝通路的差異代謝物（均下調(diào)）有L-苯丙氨酸、L-酪氨酸。富集到單巴坦生物合成代謝通路的差異代謝物（均下調(diào)）有L-酪氨酸、L-精氨酸。富集到α-亞麻酸代謝通路的差異代謝物（均下調(diào)）有（3Z）-己-3-烯-1-乙酸酯、十七碳三烯醛。富集到賴氨酸降解代謝通路的差異代謝物（均下調(diào)）有琥珀酸、N6，N6，N6-三甲基-L-賴氨酸。

2.3nbsp;不同采收成熟度對抗性紅大烤后煙葉質(zhì)量的影響

2.3.1"不同采收成熟度對煙葉化學(xué)成分的影響

由表6可以看出，隨著煙葉采收成熟度逐漸增加，葉片中淀粉、總糖和還原糖含量呈現(xiàn)出先增加后減少的變化趨勢。這是由于隨著成熟度的提高，干物質(zhì)積累量增加，在達(dá)到最高點(diǎn)后，煙葉的干物質(zhì)合成能力減弱，但消耗量增加，因此淀粉、總糖及還原糖含量先升后降。隨著煙葉采收成熟度提高，煙堿含量上升，總氮含量先減少后上升，鉀含量呈現(xiàn)先增后減的趨勢，氯含量呈現(xiàn)下降趨勢。成熟度對煙葉化學(xué)成分的影響顯著，適當(dāng)提升成熟度可以改善煙葉品質(zhì)。

2.3.2"不同采收成熟度對煙葉中性香氣成分的影響

按照香氣前體物可將中性香氣成分分為5類，即類胡蘿卜素降解產(chǎn)物、芳香族氨基酸降解產(chǎn)物、棕色化反應(yīng)產(chǎn)物、西柏烷類降解產(chǎn)物和葉綠素降解產(chǎn)物（新植二烯）。隨著煙葉采收成熟度不斷提高，烤后煙中芳香族氨基酸降解產(chǎn)物和棕色化反應(yīng)產(chǎn)物含量先增加后減少，新植二烯含量與中性香氣成分總量不斷增加。在試驗(yàn)成熟度范圍內(nèi)，類胡蘿卜素降解產(chǎn)物與除新植二烯外其他香氣成分總量在延遲8 d采收時達(dá)到最高。在成熟度范圍內(nèi)，隨著成熟度的增加中性香氣成分總量持續(xù)增加（表7）。

2.3.3"不同采收成熟度煙葉感官質(zhì)量的變化

由表8可以看出，隨著成熟度提高，中部煙葉的香氣質(zhì)、香氣量、煙氣濃度、細(xì)膩性、雜氣、刺激性、余味和甜潤感得分呈先升高后降低趨勢，透發(fā)性先增加后趨于穩(wěn)定，勁頭增強(qiáng)；上部葉煙葉香氣質(zhì)、濃度、細(xì)膩性、雜氣、余味和甜潤感得分呈先升高后降低趨勢，香氣量和透發(fā)性得分先增加后趨于穩(wěn)定，勁頭增強(qiáng)，刺激性得分下降。綜合分析，延遲4 d采收，煙葉香氣質(zhì)好，香氣量足，煙氣濃郁、細(xì)膩且透發(fā)性好，雜氣較少，刺激性較小，余味更加舒適，感官品質(zhì)總分最高。

3"討論與結(jié)論

煙葉成熟時期是一個動態(tài)的過程，這一時期的生理指標(biāo)和代謝組學(xué)存在顯著差異。通過研究分析發(fā)現(xiàn)，隨著煙葉采收成熟度的提高，葉片葉綠素降解，類胡蘿卜素在葉片中的比例上升，葉片由綠向黃變化，煙葉SPAD值呈下降趨勢，這與武圣江等的研究結(jié)果^［19］一致。同時，通過代謝組學(xué)的分析發(fā)現(xiàn)，正常采收時富集在植物激素信號轉(zhuǎn)導(dǎo)代謝通路的脫落酸和提前4 d采收相比呈下調(diào)表達(dá)。煙葉成熟時期是葉片逐漸衰老的過程，在葉片衰老前期（提前 4 d 采收）脫落酸大量增加，葉片衰老，煙葉成熟落黃，葉片衰老加劇，但脫落酸含量相比于提前4 d采收時含量下降。

糖類物質(zhì)是植物能量代謝中的核心要素，是植物光合作用和呼吸作用相互作用的積累產(chǎn)物，在烤煙成熟階段快速合成、積累，葉片內(nèi)部淀粉和總糖含量逐漸增多，到達(dá)最高點(diǎn)后降低。研究中延遲4 d采收富集在三羧酸循環(huán)等代謝通路的檸檬酸、琥珀酸和β-D-葡萄糖醛酸苷等代謝物呈上調(diào)表達(dá)，說明正常采收時煙葉的總糖含量合成和積累量達(dá)到最高，之后代謝減慢，煙葉葉片衰老，糖類物質(zhì)被大量消耗，因此含量下降，這和闞洪贏等的研究結(jié)果^［20-21］相似。

煙葉生長發(fā)育離不開氮代謝，氨基酸是植物氮代謝的重要產(chǎn)物^［22］。在本試驗(yàn)中，煙葉成熟階段富集于氨?；?tRNA生物合成、精氨酸生物合成、ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白、苯丙氨酸代謝與煙酸鹽和煙酰胺代謝等代謝通路的差異代謝物，其表達(dá)呈先上調(diào)后下調(diào)表達(dá)趨勢。說明隨著成熟度提高，氮代謝逐漸減弱，煙堿含量逐漸增加，煙葉刺激性增加，延遲到4 d采收時，煙葉化學(xué)成分趨于協(xié)調(diào)。富集到氨酰基-tRNA生物合成代謝通路的差異代謝物L(fēng)-谷氨酰胺、L-精氨酸、L-苯丙氨酸，與中性香氣成分的合成密切相關(guān)，其表達(dá)先上調(diào)后下調(diào)。說明隨著成熟度提高，煙葉中香氣成分含量先快速增加，之后增加速度降低，因此研究中隨著成熟度提高中香氣成分含量增加，但增幅減慢。非揮發(fā)性有機(jī)酸與香氣質(zhì)和香氣量等感官指標(biāo)具有不同程度的相關(guān)性，隨著成熟度提高，檸檬酸和琥珀酸等非揮發(fā)性有機(jī)酸代謝產(chǎn)物表達(dá)呈先增加后下降的趨勢，煙葉感官質(zhì)量得到改善，在延遲4 d采收時感官質(zhì)量最好^［23］。

為優(yōu)化抗性紅大可用性，通過生理指標(biāo)和代謝組學(xué)對不同采收成熟度煙葉進(jìn)行評價分析發(fā)現(xiàn)，煙葉成熟度提高，抗性紅大煙葉糖代謝和氮代謝先增強(qiáng)后減弱，煙葉化學(xué)成分更為協(xié)調(diào)，中性香氣成分含量增加，感官質(zhì)量不斷改善，但成熟度過高則煙葉質(zhì)量下降。在本試驗(yàn)中，抗性紅大延遲4 d采收時，煙葉化學(xué)成分更為協(xié)調(diào)，香氣量充足、香氣質(zhì)好，感官質(zhì)量最優(yōu)，此時煙葉達(dá)到采收的最佳時期。因此，抗黑脛病紅花大金元應(yīng)在當(dāng)?shù)卣２墒栈A(chǔ)上延遲4 d，煙葉SPAD值在23.66～25.16時采收，此時煙葉葉面淺黃，葉面落黃50%～59%，主脈變白50%～59%，支脈變白40%～49%，絨毛脫落40%～49%，成熟斑稍有。

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