植愛萍，何秋霞，羅 楠

（湯臣倍健股份有限公司，廣東珠海 519040）

0 引言

一般而言，酸價是指中和油脂中的游離脂肪酸所需要的氫氧化鉀的毫克數(shù)，酸價并不是油脂固有的值，而是隨著油脂的精制程度、保存時的水解程度、油炸時的加熱程度等因素而變化[1]。油脂的穩(wěn)定性[2-4]是保證油脂及富含油脂食品衛(wèi)生質(zhì)量的重要因素，酸價是評價油脂穩(wěn)定性和加工工藝合理與否的重要指標之一。在食品中添加油脂不僅能改變其感官性質(zhì)，還能增加食品的熱量，同時促使食品中脂溶性維生素的吸收[5]。油脂在存儲過程中，由于光、熱、空氣中的氧，以及油脂中的水和酶的作用，會發(fā)生變質(zhì)腐敗的復(fù)雜變化，這種變化稱為酸敗[6-10]。酸價是判斷油脂變質(zhì)程度的評價指標，通過對油脂中酸價的檢測可以保證油脂的安全[11-12]。

目前，國家規(guī)定的酸價檢測方法主要有國標GB 5009.229—2016，此國標包括冷溶劑滴定法、冷溶劑自動電位滴定法、熱乙醇指示劑滴定法等3 種方法[13]，均要求且樣品油脂的提取時間室溫浸提12 h以上，用提取出來的油脂做成樣品溶液進行測定[14-15]。另外，冷溶劑自動電位滴定法[16-18]中要求測定滴定過程中樣品溶液pH 值的變化并繪制相應(yīng)的pH 值-滴定體積實時變化曲線及其一階微分曲線，以游離脂肪酸發(fā)生中和反應(yīng)所引起的“pH 值突躍”為依據(jù)判定滴定終點，最后通過滴定終點消耗的標準溶液的體積計算油脂試樣的酸價[13]，但在實際檢測過程中可以用儀器自動讀取溶液mv-滴定體積實時變化曲線及其一階微分曲線的變化并自動繪制相應(yīng)的電動勢MV-滴定體積（V） 實時變化曲線及其一階微分曲線。在行業(yè)中，軟膠囊酸價項目制定標準時會遵循該國標要求進行酸價檢測。但由于軟膠囊品種繁多，且軟膠囊的配方及合成工藝不是很復(fù)雜，提取過程較固體、半固體樣品簡單。另外，該國標里面的檢測方法及樣品前處理方法比較籠統(tǒng)，根據(jù)公司生產(chǎn)的11 類軟膠囊產(chǎn)品的酸價測定方法進行探究，通過精密度進行比對，為實驗室及檢測機構(gòu)在進行保健食品軟膠囊酸價檢測時提供參考方法。

1 材料與方法

1.1 主要儀器

AL204 型電子天平（精確至0.1 mg），G20 型自動電位滴定儀，DGi113-SC 型復(fù)合pH 玻璃電極，瑞士梅特勒-托利多公司產(chǎn)品；RE-2010 型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，鄭州予達儀器科技有限公司產(chǎn)品；250 mL 平底燒瓶。

1.2 試劑

石油醚（I）、丙醇異、乙醚、無水硫酸鈉（分析純），廣州化學(xué)試劑廠提供；氫氧化鈉滴定液（0.1 mol/L）、氫氧化鈉滴定液（0.02 mol/L）、氫氧化鉀- 乙醇滴定液（0.05 mol/L） 酚酞指示劑（1%，95%乙醇）、中性乙醚-異丙醇混合液（1∶1）、三級水，湯臣倍健股份有限公司提供。

1.3 樣品

魚油軟膠囊、天然維E 軟膠囊、角鯊烯軟膠囊、靈芝孢子油軟膠囊、維A 維D 軟膠囊、越橘葉黃素酯、β -胡蘿卜素軟膠囊、魚油牛磺酸軟膠囊、蜂膠軟膠囊、β - 胡蘿卜素軟膠囊、DHA 藻油軟膠囊、輔酶Q10 維E 軟膠囊，湯臣倍健股份有限公司提供。

1.4 試驗方法

1.4.1 方法一GB 5009.229-2016 第一法 冷溶劑滴定法

稱取軟膠囊內(nèi)容物適量置于250 mL 錐形瓶中，加入50～100 mL 中性乙醚-異丙醇混合液（1∶1），充分振搖使樣品完全溶解。用氫氧化鉀-乙醇滴定液（0.1 mol/L） 進行手動滴定至溶液初顯微紅色，且15 s 內(nèi)不褪色，即為滴定終點，記錄下消耗的滴定液體積（V）。

1.4.2 方法二 GB 5009.229—2016 第二法 冷溶劑自動電位滴定法

稱取軟膠囊內(nèi)容物適量置于與自動電位滴定儀配套的杯子中，加入50～100 mL 中性乙醚-異丙醇混合液（1∶1），利用儀器攪拌功能充分攪拌使樣品充分溶解。用氫氧化鈉滴定液（0.02 mol/L） 進行自動電位滴定，滴定結(jié)束后直接讀取滴定體積V。同時做空白試驗，消耗體積為V0。

1.4.3 方法三

取軟膠囊內(nèi)容物約30 g，置于250 mL 平底燒瓶中，加入樣品體積3～5 倍體積的石油醚（I） 在常溫下靜置浸提12 h 以上。慢慢把上清液經(jīng)過裝有約10 g 無水硫酸鈉的三角漏斗中（加入上清液前先用石油醚（I） 潤濕無水硫酸鈉），上清液濾完后，用石油醚少量多次潤洗碘量瓶和無水硫酸鈉，濾液和洗液收集于干燥的平底燒瓶中，用水浴溫度低于45 ℃的旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀將溶劑旋干。按軟膠囊酸價大小，稱取所得油脂樣品2～3 g，加入50～100 mL 中性乙醚-異丙醇混合液（1∶1），充分振搖使樣品完全溶解。若提取所得油脂為淺色液體油脂，則按方法一進行手工滴定；若提取所得油脂為深色液體油脂，則按方法二用電位滴定法進行測定。

1.4.4 方法四

精密稱取軟膠囊2～3 g，(精確至0.1 mg），其質(zhì)量（m） 單位為克，置于50 mL 離心管中，加入石油醚（I） 20～40 mL，振搖提取1 min（80～100 次/ min），將離心管置于用離心機中以轉(zhuǎn)速8 000 r/min 離心5 min。將全部上清液緩緩轉(zhuǎn)移至與自動電位滴定儀配套的杯子中，加入調(diào)中性后的乙醚-異丙醇混合液（1∶1） 至50 mL，用自定電位滴定儀器進行測定。

1.5 計算公式

式中：X——酸價，mg/g；

V——試樣消耗的標準滴定液體積，mL；

V0——空白消耗的標準滴定液體積，mL；

c——滴定溶液的的濃度，mol/L；56.1——氫氧化鉀的摩爾質(zhì)量，g/mol；

m——滴定用供試品的稱樣量，g。

2 結(jié)果與分析

2.1 方法一適用樣品范圍

以魚油軟膠囊、天然維E 軟膠囊、角鯊烯軟膠囊、靈芝孢子油軟膠囊、維A 維D 軟膠囊為研究對象，其內(nèi)容物幾乎為無色液體油脂，且滴定過程中無過渡顏色變化，當?shù)竭_滴定終點時產(chǎn)生明顯的顏色變化，可以用方法一進行測定。由于氫氧化鉀-乙醇滴定液（0.05 mol/L） 溶劑容易揮發(fā)，濃度不穩(wěn)定，且有效期較短[19]，因此選用氫氧化鈉滴定液進行滴定。經(jīng)對比研究，方法二：稱樣量為20 g，滴定液為氫氧化鈉（0.02 mol/L） 時測定結(jié)果的相對標準偏差比方法一：稱樣量為20 g，滴定液為氫氧化鉀-乙醇滴定液（0.05 mol/L） 時測定結(jié)果的相對標準偏差小，因此方法二最優(yōu)，后面檢測方法所用的滴定液均為氫氧化鈉滴定液（0.02 mol/L）。

方法一測定結(jié)果見表1，方法二測定結(jié)果見表2。

表1 方法一測定結(jié)果

表2 方法二測定結(jié)果

2.2 方法二適用樣品范圍

以β -胡蘿卜素軟膠囊、藻油軟膠囊、輔酶Q10維E 軟膠囊為研究對象，其內(nèi)容物能直接溶解于混合溶劑或石油醚（I） 中的油脂，可選用自動電位滴定儀直接進行滴定。由于滴定杯子容量為100 mL，20 g 內(nèi)容物在小于100 mL 溶劑中溶解不完全，且不溶的樣品容易包裹電極表面，導(dǎo)致檢測結(jié)果重現(xiàn)性差。為了使消耗體積能達到0.5 mL 以上，檢測結(jié)果獲得良好的重現(xiàn)性，使用稱樣量為5 g，滴定液為氫氧化鈉（0.02 mol/L） 的方案最優(yōu)。

20 g 稱樣量檢測結(jié)果見表3，10 g 稱樣量檢測結(jié)果見表4，5 g 稱樣量檢測結(jié)果見表5。

表3 20 g 稱樣量檢測結(jié)果

表4 10 g 稱樣量檢測結(jié)果

表5 5 g 稱樣量檢測結(jié)果

2.3 方法三適用樣品范圍

以越橘葉黃素酯β - 胡蘿卜素軟膠囊、魚油牛磺酸軟膠囊、蜂膠軟膠囊為研究對象。經(jīng)分析測定可知，魚油?；撬彳浤z囊內(nèi)容物中?；撬岢煞直旧頌樗嵝晕镔|(zhì)[20]，能部分溶解于混合溶劑中，會消耗一定量氫氧化鈉滴定液，因此直接滴定的酸價結(jié)果嚴重偏高；越橘葉黃素酯β -胡蘿卜素軟膠囊、蜂膠軟膠囊等軟膠囊內(nèi)容物顏色較深，且內(nèi)容物中含有不溶于乙醚-異丙醇混合液（1∶1） 或石油醚（I）中的成分，此不溶性成分會干擾電極的穩(wěn)定性[21]，使檢測結(jié)果的重現(xiàn)性較差。因此，這3 種膠囊的內(nèi)容物需要經(jīng)提取油脂進行測定。魚油?；撬彳浤z囊內(nèi)容物提取所得油脂為淺色油脂，可按稱取油脂后按方法一直接手動滴定；蜂膠軟膠囊內(nèi)容物提取所得油脂雖然為淺色油脂，但滴定過程中有橙黃色的過渡顏色變化，影響肉眼判斷滴定終點，因此用自動電位滴定法進行測定。葉黃素酯β -胡蘿卜素軟膠囊用石油醚（I） 提取所得油脂溶液為紫紅色，因此用自動電位滴定法進行測定。經(jīng)過對比試驗，樣品提取時間為1 h 即可提取到足量油脂進行試驗，不需進行12 h 的提取過程。以上稱樣量為2～3 g、滴定液為氫氧化鈉（0.02 mol/L）。

浸提時間對油脂提取效果的影響見表6，方法三檢測結(jié)果見表7。

表6 浸提時間對油脂提取效果的影響/mg·g-1

表7 方法三檢測結(jié)果

2.4 方法四適用樣品范圍

在實際工作中，考慮的往往只是油脂的酸敗導(dǎo)致軟膠囊酸敗變質(zhì)的原因，卻忽視了軟膠囊內(nèi)容物中除了油脂之外的物質(zhì)帶入的游離羧酸基團引起軟膠囊酸敗變質(zhì)的作用，因此方法四以越橘葉黃素酯β -胡蘿卜素軟膠囊、魚油牛磺酸軟膠囊、蜂膠軟膠囊為研究對象，以軟膠囊內(nèi)容物稱樣量為m 值[16]。

方法四檢測結(jié)果見表8。

表8 方法四檢測結(jié)果

3 結(jié)論

通過對4 種測定方法具體測定條件及適用范圍的研究，方法一是對國標GB 5009.229—2016《第一法 冷溶劑滴定法》的細化，適用于單純淺色油類混合配制而成的淺色內(nèi)容物軟膠囊樣品。方法二是對國標GB 5009.229—2016 第二法 冷溶劑自定電位滴定法的細化，適用于能全部溶解于混合溶劑或石油醚（I） 中的深色內(nèi)容物軟膠囊樣品。方法三是對不能全部溶于混合溶劑或石油醚（I） 中的深色內(nèi)容物軟膠囊，或本身含酸性物質(zhì)的軟膠囊樣品提取方法及測定條件的細化。方法四是根據(jù)實際情況考慮樣品整體性質(zhì)對軟膠囊酸敗的影響而開發(fā)的方法，測定的是定量內(nèi)容物中所含油脂的酸價。企業(yè)可根據(jù)自身樣品的特性選擇準確可靠的方法。