陳 彬，季葛振，楊 俊,*，朱 云

1南通市食品藥品監(jiān)督檢驗(yàn)中心 (南通 226006)2南通市經(jīng)濟(jì)技術(shù)開(kāi)發(fā)區(qū)市場(chǎng)監(jiān)督管理局 (南通 226009)

生濕面制品是指經(jīng)過(guò)壓延成型并未經(jīng)干燥處理的面制品，由于含水量高，若不進(jìn)行保鮮處理則極易生長(zhǎng)微生物，并腐敗變質(zhì)[1]，引起腐敗的主要微生物是細(xì)菌和霉菌[2-4]。單辛酸甘油酯作為一種新型無(wú)毒高效廣譜防腐劑，對(duì)細(xì)菌和霉菌均有抑制效果[5]。它在人體內(nèi)和脂肪一樣，能分解代謝，無(wú)任何積蓄和不良反應(yīng)。中國(guó)與世界各國(guó)和組織對(duì)于單甘油酯類的使用都有相關(guān)的規(guī)定，GB 2760—2011規(guī)定：“單辛酸甘油酯常用作面制品防腐劑用于濕切面，其最大使用量為1.0 g/kg”。

目前，單辛酸甘油酯的檢驗(yàn)方法主要有氣相色譜法[6]和單四級(jí)桿氣質(zhì)聯(lián)用法[7]，而三重四級(jí)桿氣質(zhì)聯(lián)用法檢測(cè)單辛酸甘油酯的方法未見(jiàn)報(bào)道。本文建立了氣相色譜-三重四極桿質(zhì)譜測(cè)定食品中單辛酸甘油酯的方法，處理方法簡(jiǎn)單高效，適用于生濕面制品中單辛酸甘油酯的測(cè)定。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

7890B型氣相色譜儀，7000D型三重四極桿質(zhì)譜儀，美國(guó)Agilent公司；乙腈，色譜純，德國(guó)Merk公司；氯化鈉，分析純，國(guó)藥集團(tuán)；無(wú)水硫酸鈉(使用前在650 ℃灼燒 4 h ，貯于干燥器中，冷卻后備用)，分析純，國(guó)藥集團(tuán)；單辛酸甘油酯標(biāo)準(zhǔn)品，99.0%，美國(guó)NU-CHEK-PREP公司；Milli-Q高純水，由Millipore純水儀制備。

單辛酸甘油酯標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：稱取單辛酸甘油酯標(biāo)準(zhǔn)品1 mg，用丙酮溶解并定容至10 mL，配制成100 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。

單辛酸甘油酯標(biāo)準(zhǔn)工作液：分別吸取單辛酸甘油酯標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液0.01 mL、0.05 mL、0.10 mL、0.50 mL、1.00 mL于10 mL容量瓶中，用空白基質(zhì)溶液定容至刻度，此工作液濃度為分別為0.1 μg/mL、0.5 μg/mL、1.0 μg/mL、5.0 μg/mL、10.0 μg/mL。

1.2 儀器條件

1.2.1氣相色譜條件

色譜柱1為HP-5石英毛細(xì)管柱(15 m×0.25 mm，0.25 μm)，色譜柱2為HP-5石英毛細(xì)管柱(15 m×0.25 mm，0.25 μm)，色譜柱1和色譜柱2串接，兩柱間連接反吹氣路；進(jìn)樣口溫度300 ℃；脈沖分流進(jìn)樣，脈沖壓力50 psi，脈沖時(shí)間為0.2 min，分流比為(5∶1)，進(jìn)樣量1 μL；載氣、反吹氣為高純氦氣；色譜柱1流量1.0 mL/min，色譜柱2流量1.2 mL/min；升溫程序?yàn)槌跏紲囟?50 ℃保持10 min，以20 ℃/min升至280 ℃，保持5 min。

1.2.2質(zhì)譜條件

離子源：電子轟擊源，70 eV；離子源溫度280 ℃，接口溫度280 ℃；淬滅氣(高純氦氣)流量為2.25 mL/min，碰撞氣(高純氮?dú)?流量為1.5 mL/min。掃描方式為MRM多反應(yīng)監(jiān)測(cè)，單辛酸甘油酯離子對(duì)及碰撞能量見(jiàn)表1。

表1 單辛酸甘油酯離子對(duì)和碰撞能量

1.3 樣品前處理

稱取2 g樣品，加入10 mL乙腈+水(1+1，v/v)溶液10 mL，10 000 r/min勻漿1 min，加入2 g氯化鈉，渦旋混合，6 000 r/min離心5 min，取上層清液，加入1 g無(wú)水硫酸鈉，渦旋1 min，經(jīng)0.22 μm有機(jī)濾膜過(guò)濾，按儀器工作條件進(jìn)行測(cè)定。

2 結(jié)果與討論

2.1 色譜條件的優(yōu)化

根據(jù)文獻(xiàn)資料，單辛酸甘油酯沸點(diǎn)較高，活性較大，在襯管中容易產(chǎn)生吸附。試驗(yàn)選擇UI超高惰性襯管，并設(shè)置進(jìn)樣口溫度為300 ℃，色譜柱起始溫度為150 ℃，降低單辛酸甘油酯在進(jìn)樣環(huán)節(jié)產(chǎn)生的吸附。

試驗(yàn)考察了脈沖分流(5∶1)和脈沖不分流兩種進(jìn)樣方式對(duì)單辛酸甘油酯峰形的影響，結(jié)果表明：脈沖不分流進(jìn)樣方式，響應(yīng)值高，但峰形較差，容易產(chǎn)生拖尾。脈沖分流(5∶1)進(jìn)樣加快單辛酸甘油酯進(jìn)入色譜柱的速度，同時(shí)減少該物質(zhì)進(jìn)入色譜柱的量，所得峰形對(duì)稱，響應(yīng)值適中，見(jiàn)圖1。試驗(yàn)選擇脈沖分流(5:1)進(jìn)樣，脈沖壓力50 psi，脈沖時(shí)間0.2 min。

圖1 單辛酸甘油酯總離子流圖

2.2 質(zhì)譜條件的優(yōu)化

采用全掃描采集方式掃描50～300 amu范圍內(nèi)單辛酸甘油酯質(zhì)譜圖，見(jiàn)圖2。根據(jù)質(zhì)譜圖中離子的豐度和質(zhì)量數(shù)，為提高方法的靈敏度和選擇性，確定特征離子m/z 127.2、m/z 145.2作為前級(jí)離子。

圖2 單辛酸甘油酯全掃描質(zhì)譜圖

選擇高純氮?dú)庾鳛榕鲎矚狻⒏呒兒庾鳛榇銣鐨?，并分別設(shè)置氣流量為1.5 mL/min和2.25 mL/min，采用產(chǎn)物離子掃描方式，選擇并豐度較大的離子對(duì)m/z 127.2～57.2作為定量離子，m/z 145.2～89.1和m/z 145.2～103.1作為定性離子，見(jiàn)圖3、圖4。按照歐盟的法規(guī)，試驗(yàn)選擇了兩個(gè)母離子和三個(gè)子離子，滿足4點(diǎn)鑒定法要求。

圖3 前級(jí)離子m/z 127.2二級(jí)全掃描質(zhì)譜圖

圖4 前級(jí)離子m/z 145.2二級(jí)全掃描質(zhì)譜圖

根據(jù)選擇的離子對(duì)，試驗(yàn)考察了碰撞能量為5、10、15、20 eV下，m/z 127.2～57.2、m/z 145.2～89.1和m/z 145.2～103.1三組離子對(duì)的響應(yīng)值。結(jié)果表明：m/z 127.2～57.2在10 eV下有較好的響應(yīng)，m/z 145.2～89.1和m/z 145.2～103.1在5 eV下有較好的響應(yīng)。因此，在上述碰撞能量下，以m/z 127.2～57.2作為基峰，m/z 145.2～89.1和m/z 145.2～103.1相對(duì)于基峰的比率分別為13.2%和4.2%，輔助定性，見(jiàn)圖5。

圖5 單辛酸甘油酯定量和定性離子對(duì)

2.3 樣品前處理?xiàng)l件的優(yōu)化

單辛酸甘油酯極性較強(qiáng)[6]，根據(jù)相似相溶原理，選擇強(qiáng)極性溶劑乙腈、水作為提取溶劑。試驗(yàn)比較了乙腈、乙腈+水((1+1，v/v)的提取效果，結(jié)果表明：乙腈+水(1+1，v/v)滲透性能好，能進(jìn)入生濕面制品內(nèi)部，有利于充分提取樣品中的單辛酸甘油酯。

2.4 線性范圍和檢出限

試驗(yàn)考察了樣品的基質(zhì)效應(yīng)，結(jié)果表明：生濕面制品有較強(qiáng)的基質(zhì)增強(qiáng)效應(yīng)，且能較好地改善峰形，提高靈敏度。使用空白基質(zhì)溶液配制標(biāo)準(zhǔn)曲線：0.1、0.5、1.0、5.0、10.0 μg/mL。以m/z 127.2～57.2離子對(duì)峰面積為縱坐標(biāo)，基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，得出線性方程和相關(guān)系數(shù)，單辛酸甘油酯在該濃度范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系，其相關(guān)系數(shù)不小于0.998。在空白生濕面制品中加入將一定質(zhì)量濃度的標(biāo)準(zhǔn)品，使樣品中的加標(biāo)量為25 μg/kg。經(jīng)過(guò)前處理，經(jīng)儀器分析后，單辛酸甘油酯m/z 127.2～57.2定量離子信噪比大于3，因此，本試驗(yàn)檢出限為25 μg/kg。

2.5 回收率和精密度

選擇餃子皮空白樣品，以10、25、50 mg/kg 3個(gè)水平進(jìn)行添加回收試驗(yàn)。每個(gè)水平做6次平行試驗(yàn)，計(jì)算方法的回收率和精密度。平均回收率分別為108.2%、92.1%、80.5%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)分別為5.2%、3.3%、7.8%。結(jié)果表明：該方法回收率穩(wěn)定，數(shù)據(jù)精密度高，能滿足日常檢驗(yàn)中單辛酸甘油酯準(zhǔn)確定量的要求。

3 結(jié)論

本文建立了生濕面制品中單辛酸甘油酯的檢測(cè)方法，選用乙腈+水(1+1，v/v)混合溶劑高速勻漿提取樣品中單辛酸甘油酯，優(yōu)化了氣相色譜、三重四級(jí)桿質(zhì)譜儀的各項(xiàng)參數(shù)，采用脈沖分流(5:1)進(jìn)樣方式，選擇m/z 127.2～57.2作為定量離子，m/z 145.2～89.1和m/z 145.2～103.1作為定性離子，兩對(duì)定性離子對(duì)相對(duì)于m/z 127.2～57.2的比率分別為13.2%和4.2%。本方法處理方法簡(jiǎn)單高效，定性定量準(zhǔn)確，靈敏度高，回收率高，重現(xiàn)性好，適用于生濕面制品中單辛酸甘油酯的測(cè)定。