劉振偉，張美燕

1.滿洲里海關(guān)技術(shù)中心 (滿洲里 021400)2.滿洲里市疾病預(yù)防控制中心 (滿洲里 021400)

糧食安全，是國家安全的同等大事。俄羅斯幅員遼闊，擁有豐富的農(nóng)業(yè)資源，其土地肥沃豐產(chǎn)，農(nóng)業(yè)條件優(yōu)良，糧食品質(zhì)較高。滿洲里被國家批準(zhǔn)為全國首批陸運(yùn)指定糧食進(jìn)口口岸，先后有俄羅斯油菜籽、亞麻籽、大麥、小麥等大宗糧食商品進(jìn)入國內(nèi)。針對這一工作，口岸檢驗檢疫部門開展了糧食中黃曲霉毒素的檢驗檢疫工作，為實現(xiàn)俄羅斯大宗糧食作物的順利進(jìn)境提供了技術(shù)保障。

黃曲霉毒素(Aflatoxin)主要由黃曲霉和寄生曲霉等真菌在代謝過程中產(chǎn)生，是一類結(jié)構(gòu)相似的化合物。黃曲霉毒素目前已分離出 12 種，其中黃曲霉毒素B1被國際腫瘤研究機(jī)構(gòu)(IARC)列為 I類致癌物質(zhì)，是迄今為止人類所知的毒性和致癌性最強(qiáng)的物質(zhì)之一，其急性毒性約為三氧化二砷的68倍、氰化鉀的10倍，食用后會對其肝臟產(chǎn)生傷害，容易引發(fā)肝炎、肝硬化、肝壞死等病癥[1]。黃曲霉毒素的發(fā)生受外界環(huán)境因素的作用，污染程度主要受農(nóng)業(yè)生產(chǎn)、儲藏與加工過程等環(huán)節(jié)影響。糧食在運(yùn)輸、貯藏過程中若管理不當(dāng)，如受淋、受潮、通氣不良、堆壓時間過長容易產(chǎn)生黃曲霉毒素。因此，世界各國對糧食中黃曲霉毒素的含量做出了嚴(yán)格的規(guī)定。

1 限量要求

日本進(jìn)口食品中黃曲霉毒素B1的限量標(biāo)準(zhǔn)要求最為嚴(yán)格，而歐盟標(biāo)準(zhǔn)不僅嚴(yán)格而且細(xì)致，可操作性較強(qiáng)。我國對糧食中黃曲霉毒素B1的限量標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定為黃曲霉毒素B1≤5 μg/kg[2]。各國對黃曲霉毒素的限量要求見表1。

表1 黃曲霉毒素限量要求

3 檢測方法研究進(jìn)展

當(dāng)前常用的黃曲霉毒素的檢測方法主要有薄層色譜法、免疫分析法、液相色譜法、液質(zhì)聯(lián)用法、電子鼻法等[3]。

3.1 薄層色譜法(TLC)

黃曲霉毒素在波長365 nm的紫外光照射下發(fā)出藍(lán)綠或藍(lán)紫色熒光，通過顏色特征和規(guī)律可以檢測出樣品中黃曲霉毒素的含量和濃度[4]。薄層色譜法所用設(shè)備簡單、費(fèi)用低、易于掌握，適合大批量樣品的篩選，一般實驗室均可開展。由于該方法的特異性不強(qiáng)，樣品中如果存在其他熒光物質(zhì)，則會對結(jié)果產(chǎn)生干擾，大大降低檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。另外該方法樣品前處理繁瑣，操作步驟多并且提取和凈化效果不夠理想，因此該方法已經(jīng)越來越不適應(yīng)現(xiàn)代分析的要求，通常只作為化學(xué)分析法的一般佐證法。

3.2 免疫分析法

3.2.1酶聯(lián)免疫吸附測定法(ELISA)

該方法具有特異性強(qiáng)、干擾小、靈敏度高、提取方法簡單、分析時間短、檢測成本低、操作安全無污染等特點(diǎn)，可以進(jìn)行定性和定量測定，大大節(jié)約了測試成本，因而能廣泛用于糧油中黃曲霉毒素的測定。但因酶促顯色反應(yīng)中酶的活性易受基質(zhì)組成和操作條件影響，導(dǎo)致該方法準(zhǔn)確度不高，可能出現(xiàn)重復(fù)性差、假陽性高等情況，還需要對鹽和脂肪含量高的樣品進(jìn)行額外處理。張寧等[5]運(yùn)用酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)結(jié)合間接競爭反應(yīng)機(jī)制,開展黃曲霉毒素快速檢測方法改進(jìn)的研究，通過對飼料等11種樣本的檢測，得出添加回收率在67%～116%，靈敏度達(dá)到0.03 μg/L，線性系數(shù)>0.99，板內(nèi)變異系數(shù)小于5%。

3.2.2膠體金免疫層析法(GICT)

該方法是一種將膠體金免疫技術(shù)與色譜層析技術(shù)相結(jié)合的固相膜免疫分析方法，具有簡便快速、靈敏度高、重現(xiàn)性好等特點(diǎn)，不需要任何儀器設(shè)備，可用于現(xiàn)場快速檢測和初篩。缺點(diǎn)是靈敏度低，通常用來做定性檢測[6]。王督等[7]研制出一種黃曲霉毒素B1膠體金免疫定量檢測卡，用于大米、小麥等糧油產(chǎn)品中黃曲霉毒素B1的定量分析，方法的定量限為1.0 μg/kg，線性范圍為1.0～20.0 μg/kg，該檢測卡適用于稻谷及其制品中黃曲霉毒素B1篩查，樣品檢測時間只需15 min，具有簡便、快速、靈敏度高、重現(xiàn)性好、檢測成本低等特點(diǎn)。

3.2.3免疫生物傳感器法(Mmune-Biosensor)

免疫生物傳感器是由一種抗體和一種轉(zhuǎn)導(dǎo)元件組成的一種分析裝置，其中光、電、熱等信號的變化是檢測的重要指標(biāo)，該方法不僅檢測速度快，且成本低、靈敏度高、便攜性高，使得生物傳感器得到廣泛應(yīng)用[8]。歐陽秀醞等[9]構(gòu)建了一種基于熒光共振能量轉(zhuǎn)移的免疫傳感器用于花生油樣品中黃曲霉毒素B1檢測，檢測限為0.02 ng/mL，回收率為106%～112%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差低于4.7%，該方法具有高特異性和高靈敏度的特點(diǎn)，可用于食品中黃曲霉毒素B1的快速定量檢測。

3.3 高效液相色譜法(HPLC)

該方法檢出限低、準(zhǔn)確性好、靈敏度高，是目前國際上普遍采用的定量篩選和確認(rèn)的分析方法[10]。隨著技術(shù)發(fā)展，對其進(jìn)行了許多優(yōu)化改進(jìn)，改進(jìn)主要集中在兩個方面：一是著眼于前期黃曲霉毒素的分離凈化，比如將免疫親和柱與高效液相色譜聯(lián)用，要比單一的高效液相色譜法更為安全、靈敏；另一方面采用液相色譜結(jié)合柱前或柱后衍生，熒光檢測器檢測，提高了靈敏度。GB 5009.22—2016《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中黃曲霉毒素B族和G族的測定》中第二法和第三法高效液相色譜柱前/柱后衍生法適用于谷物及其制品、豆類及其制品、堅果及籽類、油脂及其制品、調(diào)味品、嬰幼兒配方食品和嬰幼兒輔助食品中黃曲霉毒素B1、B2、G1、G2的測定，柱前衍生法黃曲霉毒素B1、B2、G1、G2的檢出限均為0.03 μg/kg，柱后衍生法黃曲霉毒素B1、B2、G1、G2的檢出限分別為0.03 μg/kg、0.01 μg/kg、0.03 μg/kg、0.01 μg/kg[11]。

3.4 液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)(LC-MS/MS)

質(zhì)譜是目前糧食制品中真菌毒素痕量分析檢測中使用最廣泛且最高效的檢測器，將液相與質(zhì)譜聯(lián)用，黃曲霉毒素的分析檢測靈敏度和可靠性大幅提高。缺點(diǎn)是設(shè)備成本高，儀器操作復(fù)雜，過程較為繁瑣、復(fù)雜，因此仍有較大提升空間。劉笑笑[12]等建立了一種同步檢測糧食中 15 種真菌毒素的雜質(zhì)吸附固相萃取-超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜方法，檢出限0.2～15 μg/kg，平均回收率76.9%～116.1%，該方法在多毒素同時檢測方面顯示出廣闊的應(yīng)用前景。GB 5009.22—2016《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中黃曲霉毒素B族和G族的測定》中第一法同位素稀釋液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法測定黃曲霉毒素B1、B2、G1、G2的檢出限均為0.03 μg/kg，定量限均為0.1 μg/kg。

3.5 電子鼻法

電子鼻是一種電子感官儀，是近年來新興的一種檢測技術(shù)，由兩大系統(tǒng)組成，傳感系統(tǒng)和自動化識別系統(tǒng)[13]。能夠快速的識別復(fù)雜氣味和氣體，建立氣味的數(shù)學(xué)模型，通過模型可以迅速檢測出霉變食物的特殊氣味。該方法不直接檢測黃曲霉毒素而是檢測受黃曲霉毒素污染后一些揮發(fā)性物質(zhì)的改變，是一種間接檢測黃曲霉毒素的方法。沈飛等[14]利用此法檢測糙米中黃曲霉毒素的污染，結(jié)果顯示電子鼻信號與黃曲霉毒素有緊密相關(guān)性，并且對黃曲霉毒素B1的檢測準(zhǔn)確度最高，為糧食真菌毒素的早期預(yù)警提供了一種新思路和新方法。

4 防控措施

近年來，滿洲里口岸進(jìn)境俄羅斯糧食的品類和數(shù)量逐年增加，以加工貿(mào)易居主導(dǎo)地位，主要通過鐵路運(yùn)輸運(yùn)抵滿洲里口岸進(jìn)行加工。對進(jìn)境俄羅斯糧食中黃曲霉毒素采用免疫親和柱凈化-液相色譜柱后衍生方法進(jìn)行實驗室檢測，效果良好，保障了進(jìn)境糧食安全。黃曲霉毒素的發(fā)生受外界環(huán)境因素的作用，污染程度主要受地理環(huán)境、農(nóng)業(yè)生產(chǎn)栽培及收獲后儲藏、運(yùn)輸與加工過程等環(huán)節(jié)影響。為確保進(jìn)境糧食不受黃曲霉毒素的污染，應(yīng)從企業(yè)注冊登記到貯藏、運(yùn)輸實施全鏈條監(jiān)管并輔以實驗室檢測手段。

4.1 注冊登記

對進(jìn)境糧食境外生產(chǎn)、加工、存放企業(yè)實施注冊登記制度。境外生產(chǎn)加工企業(yè)應(yīng)當(dāng)符合輸出國家或者地區(qū)法律法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)的相關(guān)要求，并達(dá)到中國有關(guān)法律法規(guī)和強(qiáng)制性標(biāo)準(zhǔn)的要求。必要時可以派專家赴境外開展實地考察、生產(chǎn)加工存放企業(yè)檢查、預(yù)檢、監(jiān)裝等工作。有條件的進(jìn)口俄羅斯糧食，按照WTO的規(guī)則，將俄羅斯輸華糧食國際貿(mào)易的檢疫風(fēng)險影響降低到最低水平。進(jìn)境糧食應(yīng)納入審批范圍，控制進(jìn)口數(shù)量，指定進(jìn)口口岸，定點(diǎn)加工。

4.2 加強(qiáng)田間管理

糧食作物的抗霉能力與遺傳因素有關(guān)，通過人工手段培育和選用抗侵染或抗產(chǎn)毒的品種，可以利用其自身的抗性來控制和提高抗黃曲霉侵染能力。實行輪作制度，科學(xué)栽培，合理施肥，做好病蟲害防治工作。做好調(diào)查監(jiān)測記錄及農(nóng)業(yè)化學(xué)品使用記錄。合理排灌，確保生長期間對水分的需求，避免生長期間干旱。要準(zhǔn)確把握種子的成熟度，一般成熟期前后一周內(nèi)收獲最佳，不要時間過長。

4.3 收獲倉儲運(yùn)輸過程控制

糧食收獲儲運(yùn)過程中，相關(guān)企業(yè)應(yīng)采取適當(dāng)?shù)倪^篩等清雜措施，以最大程度地去除土壤、雜草種子和植物秸稈、豆莢等殘體，降低有害生物傳帶的可能性。收獲后要及時在陽光下曬晾風(fēng)干或烘干，使糧食含水量減至13%以下。倉儲過程應(yīng)采取防疫、防鼠等措施，并與其他糧食分開存儲。理想的貯存條件是將糧食貯存于干燥低溫狀態(tài)，糧庫要保持通風(fēng)，相對濕度不超過70%，儲存溫度降至10 ℃以下[15]。采取袋裝方式或?qū)Ｓ眠\(yùn)糧車運(yùn)輸，并采取必要措施防止雨水滲漏和撒漏。運(yùn)輸工具應(yīng)符合安全衛(wèi)生要求，防止有害生物隨運(yùn)輸工具傳播。

4.4 檢驗檢疫監(jiān)管

海關(guān)部門對進(jìn)境糧食接卸、運(yùn)輸、倉儲、加工等過程實施監(jiān)督管理。應(yīng)當(dāng)對進(jìn)境糧食實施現(xiàn)場檢驗檢疫及實驗室檢測鑒定。經(jīng)檢驗檢疫合格的進(jìn)境糧食，應(yīng)在經(jīng)所在地主管海關(guān)考核合格的加工企業(yè)監(jiān)管加工使用，不得直接進(jìn)入流通市場，嚴(yán)禁用作種用。從事進(jìn)境糧食儲運(yùn)、加工的企業(yè)，應(yīng)當(dāng)具備有效的質(zhì)量安全及溯源管理體系，應(yīng)制定安全質(zhì)量控制及防疫管理制度，包括防疫制度、疫情監(jiān)測、應(yīng)急處置等，對接卸、運(yùn)輸、存放、加工等全過程實施防疫安全控制措施，防止糧食撒漏，防止疫情擴(kuò)散進(jìn)入農(nóng)業(yè)生產(chǎn)生態(tài)系統(tǒng)。糧食加工工藝須能有效殺滅雜草、病原菌等有害生物，加工過程產(chǎn)生的下腳料須集中焚燒處理。進(jìn)境糧食裝卸、儲存、加工涉及不同海關(guān)的，各相關(guān)海關(guān)應(yīng)當(dāng)加強(qiáng)溝通協(xié)作，建立相應(yīng)工作機(jī)制，及時互相通報檢驗檢疫情況及監(jiān)管信息。