張春燕

【摘要】 目的 對(duì)比分析濃縮集菌法、直接涂片法、Xpert MTB/RIF法、羅氏培養(yǎng)法檢測(cè)痰樣本中結(jié)核分枝桿菌陽性率。方法 選擇2018年5月至2019年5月我院185例疑似肺結(jié)核患者的痰樣本為試驗(yàn)對(duì)象，均采用濃縮集菌法、直接涂片法、Xpert MTB/RIF法、羅氏培養(yǎng)法進(jìn)行檢測(cè)，比較各種方法的結(jié)核分枝桿菌陽性率。結(jié)果 濃縮集菌法的陽性檢出率31.35%，較直接涂片法的17.84%明顯升高（P<0.05），但濃縮集菌法（31.35%）與Xpert MTB/RIF法（34.05%）、羅氏培養(yǎng)法（33.51%）的陽性檢出率對(duì)比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。結(jié)論 應(yīng)用濃縮集菌法檢測(cè)痰樣本結(jié)核分枝桿菌具有操作簡易、報(bào)告迅速、陽性檢出率高等優(yōu)點(diǎn)，可為臨床診治提供可靠的參考依據(jù)，值得在基層中推廣應(yīng)用。

【關(guān)鍵詞】 結(jié)核分枝桿菌;濃縮集菌法;直接涂片法;Xpert MTB/RIF法;羅氏培養(yǎng)法

結(jié)核病主要是由于感染結(jié)核分枝桿菌所導(dǎo)致的傳染性疾病。相關(guān)調(diào)查數(shù)據(jù)顯示[1]，當(dāng)前全球約有20億人患有結(jié)核病，且每年有接近300萬結(jié)核病患者死亡。我國為結(jié)核病高發(fā)的國家之一，其中約有1/3人口感染結(jié)核分枝桿菌，嚴(yán)重威脅人們身心健康。目前在臨床上，實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌的方法有很多種，如羅氏細(xì)菌培養(yǎng)法、Xpert MTB/RIF法、直接涂片法、濃縮集菌法等。本文為比較上述各項(xiàng)方法檢測(cè)痰樣本中結(jié)核分枝桿菌的陽性率，探討其臨床價(jià)值，特作如下研究。

1 資料和方法

1.1 臨床資料

選擇2018年5月至2019年5月我院185例疑似肺結(jié)核患者的痰樣本為試驗(yàn)對(duì)象，其中有127例男性，58例女性，年齡21～80歲，平均（56.31±6.58）歲。

1.2 方法

1.2.1儀器與試劑：LDZX-75KBS立式壓力蒸汽滅菌器;HC-3618R高速冷凍離心機(jī); XW-80A旋渦混合器/振蕩器;美國SHELLAB SCO6WE-2 CO2培養(yǎng)箱;酸性羅氏培養(yǎng)基（鄭州貝瑞特生物技術(shù)公司）;奧林巴斯的CX21生物顯微鏡;美國賽沛Gene Xpert分子診斷系統(tǒng)及其配套試劑;抗酸染液（上海遠(yuǎn)慕生物科技公司）。

1.2.2檢測(cè)方法：（1）樣本采集：采集晨痰，指導(dǎo)患者先進(jìn)行幾次深呼吸，隨后用力咳出痰液作為痰樣本，取4份痰樣本，存于一次性塑料瓶中送檢。（2）羅氏細(xì)菌培養(yǎng)法：取0.1ml經(jīng)過消化處理的痰樣本，將其接種于酸性羅氏培養(yǎng)基中，于37℃環(huán)境中溫育。于樣本接種后的第3d、第7d進(jìn)行觀察，若有菌落生長的予以抗酸染色處理作進(jìn)一步證實(shí)。以后仍每周察看1次，記錄菌落生長狀況，并采用抗酸染色證實(shí)。如果8周后仍無菌落生長則報(bào)告陰性。（3）Xpert MTB/RIF法：取1ml痰樣本，加入2mlSR標(biāo)本處理液，置于振蕩器中劇烈搖動(dòng)樣本15s，在室溫靜置15min，再于振蕩器中劇烈搖動(dòng)15s，要求樣本中無痰塊存在。然后用無菌吸管吸取適量已溶化的樣本2ml于檢測(cè)盒中，放進(jìn)檢測(cè)模塊打開儀器進(jìn)行自動(dòng)監(jiān)測(cè)，結(jié)束后直接讀取結(jié)果;（4）直接涂片法：選擇痰樣本中含有干酪樣、膿樣變化的痰液0.1ml，均勻涂抹于無菌玻璃片表面，使其形成1cm*2cm的卵圓形痰膜。用黑色記號(hào)筆在載玻片的背面編號(hào)做標(biāo)志，隨后進(jìn)行固定、抗酸染色處理，鏡檢觀察結(jié)果;（5）濃縮集菌法：痰樣本進(jìn)行消化處理，并加入適量的0.5%氫氧化鈉溶液，將樣本置于振蕩器中劇烈搖動(dòng)3min，以讓痰樣本能夠充分消化。隨后，將樣本進(jìn)行121℃高壓處理20min，取出樣本管以2500r/min的速率離心處理30min，促使結(jié)核桿菌集中沉淀。最后取沉渣制片，進(jìn)行抗酸染色、鏡檢。

1.3 觀察項(xiàng)目

比較濃縮集菌法與羅氏細(xì)菌培養(yǎng)法、Xpert MTB/RIF法、直接涂片法檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌的陽性率。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

選用SPSS20.0軟件，計(jì)數(shù)資料以百分比描述，予以χ2檢驗(yàn)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義為p<0.05。

2 結(jié)果

濃縮集菌法檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌陽性率31.35%（58/185）、直接涂片法檢測(cè)陽性率17.84%（33/185）、Xpert MTB/RIF法檢測(cè)陽性率34.05%（63/185）、羅氏培養(yǎng)法檢測(cè)陽性率33.51%（62/185）。濃縮集菌法的陽性檢出率顯著高于直接涂片法（χ2=9.108，p=0.003），但濃縮集菌法分別與Xpert MTB/RIF法、羅氏培養(yǎng)法的陽性檢出率比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2Xpert MTB/RIF法=0.307，p=0.580;χ2羅氏培養(yǎng)法=0.197，p=0.657）。

3 討論

肺結(jié)核的確診依據(jù)是在痰樣本中檢測(cè)出結(jié)核分枝桿菌。因此，如何快速、有效準(zhǔn)確地檢出結(jié)核分枝桿菌為臨床疾病診治提供可靠的依據(jù)是實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)的主要課題之一。羅氏細(xì)菌培養(yǎng)法為結(jié)核桿菌檢測(cè)的“金標(biāo)準(zhǔn)”，但培養(yǎng)周期較長，往往需要8周，而且培養(yǎng)的痰樣本需至少有100個(gè)/ml細(xì)菌數(shù)，否則難以及時(shí)發(fā)現(xiàn)到結(jié)核桿菌，影響疾病診治速度[2]。Xpert MTB/RIF法是一種新型的結(jié)核桿菌檢測(cè)技術(shù)，其具有操作簡單、快速診斷、敏感度高等優(yōu)點(diǎn)，對(duì)于結(jié)核病的早期診治具有重要的意義[3]。但是目前臨床中該項(xiàng)檢測(cè)技術(shù)仍未納入到醫(yī)保范疇，檢測(cè)費(fèi)用較高，且對(duì)檢測(cè)儀器要求高，難以在基層醫(yī)院中推廣應(yīng)用。直接涂片鏡檢操作簡單，對(duì)檢測(cè)設(shè)備要求不高，是基層醫(yī)療機(jī)構(gòu)檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌的主要手段。但是該檢測(cè)方法的敏感度相對(duì)較低，而且在檢測(cè)過程中痰液粘稠性、痰樣本涂抹不均勻、制片過厚等因素均會(huì)影響結(jié)核桿菌的檢出率，故其檢測(cè)效果并不太理想[4]。而濃縮集菌法可彌補(bǔ)直接涂片鏡檢的不足，其主要通過離心沉淀，盡量將樣本中的結(jié)核桿菌濃縮集中于一張載玻片上，隨后按照直接涂片鏡檢的步驟進(jìn)行檢測(cè)，這可以顯著提高結(jié)核桿菌檢測(cè)的陽性率[5]。本研究結(jié)果也顯示，濃縮集菌法的陽性檢出率顯著高于直接涂片法，但濃縮集菌法與Xpert MTB/RIF法、羅氏培養(yǎng)法的陽性檢出率比較無明顯的差異。由此可見，應(yīng)用濃縮集菌法檢測(cè)痰樣本結(jié)核分枝桿菌陽性檢出率高，可為臨床診治提供可靠的參考依據(jù)，值得在基層中推廣應(yīng)用。

參考文獻(xiàn)

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