陳丹　吳梅青　張廣寧　李金科　李柯

【摘 ?要】目的：對(duì)15份不同產(chǎn)地鐵皮石斛中柚皮素和石斛酚的含量進(jìn)行測(cè)定，為科學(xué)評(píng)價(jià)及有效控制其質(zhì)量提供參考。方法：采用WelchUltimateXB-C18色譜柱（4.6×250mm，5μm）;以乙腈-0.4%甲酸水溶液為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫，流速為1.0mL·min-1，檢測(cè)波長(zhǎng)269nm，柱溫25℃。結(jié)果：柚皮素和石斛酚質(zhì)量濃度分別在4.31～86.2μg（r=0.9998）、2.57～51.4μg（r=0.9997）范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系;平均加樣回收率（n=6）分別為96.74%、99.03%。結(jié)論：不同產(chǎn)地鐵皮石斛中柚皮素和石斛酚含量存在差異。

【關(guān)鍵詞】鐵皮石斛;柚皮素;石斛酚;高效液相色譜法

【中圖分類號(hào)】R284 ?????【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A ?????【文章編號(hào)】1672-3783（2020）06-0257-01

鐵皮石斛（DendrobiiOfficinalisCaulis）為蘭科植物鐵皮石斛Dendrobiumofficinale KimuraetMigo的干燥莖，《中國藥典》一部（2015年版）稱其性味甘，微寒，歸胃、腎經(jīng);具有益胃生津，滋陰清熱之功效，臨床上常用于緩解人體疲勞、增強(qiáng)免疫力、改善胃腸道功能、治療糖尿病與輔助抗腫瘤等[1-2]。文獻(xiàn)報(bào)道鐵皮石斛所含柚皮素具有明顯的抗炎、抑菌、鎮(zhèn)痛、抗氧化、抗腫瘤和免疫調(diào)節(jié)等作用[3]。聯(lián)芐類化合物石斛酚具有抗誘變活性，可阻滯由脂多糖誘導(dǎo)的誘導(dǎo)型的一氧化氮合酶和環(huán)氧合酶-2的表達(dá)[4]。近年來石斛的保健功能日趨受到重視，人工栽培得到較大的發(fā)展，在全國多個(gè)省區(qū)（浙江、云南、福建、江西、安徽等）形成了大規(guī)模的人工種植區(qū)域，產(chǎn)地的自然環(huán)境差異大，為考察不同產(chǎn)地鐵皮石斛的質(zhì)量，本試驗(yàn)以柚皮素和石斛酚為指標(biāo)成分，采用RP-HPLC法對(duì)來自于不同產(chǎn)地的15批鐵皮石斛樣品進(jìn)行質(zhì)量分析，為鐵皮石斛藥材質(zhì)量評(píng)價(jià)及合理利用該藥用植物資源提供參考。

1儀器、試劑與試藥

高效液相色譜儀（LC-20AT型，日本島津），紫外檢測(cè)器（SPD-20A型，日本島津），電

子分析天平（XPE105，瑞士MettlerToledo，十萬分之一），超聲波清洗器（HX-06，武漢

恒信世紀(jì)科技有限公司）。

石斛酚對(duì)照品（批號(hào)：111875-201202）由中國食品藥品檢定研究院提供;柚皮素對(duì)照品（批號(hào)：MUST-16032406，含量以99.18%計(jì)）由成都曼思特生物科技有限公司提供;乙腈為色譜純（Tedia公司），甲酸為色譜純（天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司）;蒸餾水（華潤(rùn)怡寶飲料（中國）有限公司）。

鐵皮石斛藥材，無限極（中國）有限公司提供，批號(hào)：201603007、201603009、201604009、201605007、20160525、201606009、20160613、20160625、201607007、201607009、20160725、20160825、201609007、201609009、201610009，經(jīng)湖南省中醫(yī)藥研究院李若存研究員鑒定為蘭科植物鐵皮石斛DendrobiumofficinaleKimuraetMigo的干燥莖。

2方法與結(jié)果

2.1色譜條件

WelchUltimateXB-C18色譜柱（4.6×250mm，5μm）;柱溫：25℃;流動(dòng)相：乙腈（A）-0.4%甲酸水溶液（B），梯度洗脫（Time：0→5→10→25→45→60min;B：75%→70%→70%→60%→45%→30%）;檢測(cè)波長(zhǎng)：269nm;流速：1.0ml/min;進(jìn)樣量10μL。色譜圖見圖1。

2.2對(duì)照品溶液的制備

取柚皮素、石斛酚對(duì)照品各適量，分別精密稱定，加甲醇制成每1mL分別含柚皮素86.2μg、石斛酚51.4μg的對(duì)照品溶液。

2.3供試品溶液的制備

取鐵皮石斛（批號(hào)：201603007）藥材粉末（過三號(hào)篩）約1.0g，精密稱定，置100ml圓底燒瓶中，加甲醇50ml，加熱回流提取2h，放冷，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，0.45μm微孔濾膜濾過，濾液作為供試品溶液。

2.4線性關(guān)系考察

分別精密吸取上述2種對(duì)照品溶液0.5、1、2、5、10mL，每種對(duì)照品溶液?jiǎn)为?dú)按濃度由低至高的次序加入至5個(gè)10mL量瓶中，分別加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。進(jìn)樣10μL，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣檢測(cè)，記錄峰面積。以對(duì)照品溶液濃度為橫坐標(biāo)、峰面積為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸計(jì)算，得回歸方程，柚皮素：回歸方程y=4814x-478.19，r=0.9998;石斛酚：回歸方程y=9495.5x+1764.9，r=0.9997，結(jié)果說明柚皮素和石斛酚質(zhì)量濃度分別在4.31～86.2μg/ml、2.57～51.4μg/ml范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.5精密度試驗(yàn)

取同一供試品溶液連續(xù)進(jìn)樣測(cè)定6次，以柚皮素、石斛酚峰面積計(jì)，結(jié)果：RSD分別為1.28%、1.52%，表明儀器精密度良好。

2.6穩(wěn)定性試驗(yàn)

取供試品溶液（201603007），分別于放置0、2、4、8、12、24h進(jìn)樣測(cè)定，以柚皮素、石斛酚峰面積計(jì)，結(jié)果：RSD分別為1.32%、1.75%，表明供試品溶液在24h內(nèi)保持穩(wěn)定。

2.7重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批樣品（201603007）適量，按供試品溶液制備方法制備6份溶液，測(cè)定，記錄峰面積，計(jì)算。結(jié)果，柚皮素、石斛酚含量平均值分別為0.1081mg·g-1、0.0275mg·g-1，RSD分別為1.67%、2.39%，表明本方法重復(fù)性良好。

2.8加樣回收率試驗(yàn)

精密稱取同一批已知含量樣品（201603007）6份，分別加入與供試液中柚皮素、石斛酚約成1∶1對(duì)照品量，按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算樣品含量，并計(jì)算加樣回收率，結(jié)果柚皮素和石斛酚的平均加樣回收率分別為96.74%（RSD=1.76%）、99.03%（RSD=2.65%），說明本方法準(zhǔn)確度良好。

2.9樣品含量測(cè)定

取15批鐵皮石斛，分別測(cè)定石斛酚、柚皮素含量，結(jié)果見表1。

3討論

查閱文獻(xiàn)，柚皮素的最大吸收波長(zhǎng)有290nm，280nm，310nm，270nm，226nm等[5-9]，石斛酚的最大吸收波長(zhǎng)有230nm，270nm等[10-11]。采用紫外分光光度法對(duì)柚皮素及石斛酚的甲醇溶液進(jìn)行掃描，結(jié)果柚皮素在290nm處有最大吸收，石斛酚在269nm處有最大吸收，采用290nm和269nm對(duì)2種成分進(jìn)行測(cè)定，柚皮素含量相差不大，但石斛酚在269nm下含量更高，因此選擇269nm作為2種成分的測(cè)定波長(zhǎng)。

不同產(chǎn)地鐵皮石斛含量測(cè)定結(jié)果顯示，安徽霍山產(chǎn)柚皮素及石斛酚均可檢出，且含量高于其它3個(gè)產(chǎn)地，其它3個(gè)產(chǎn)地鐵皮石斛只能檢出柚皮素，石斛酚在鐵皮石斛中的含量很低，與文獻(xiàn)報(bào)道[11]相符。安徽藿山產(chǎn)鐵皮石斛為野生條件下生長(zhǎng)，其它產(chǎn)地均為種植基地栽培，石斛酚含量高低與產(chǎn)地、種植方式的關(guān)系還有待進(jìn)一步研究。

參考文獻(xiàn)

[1] 國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典：第一部[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2015：282.

[2] 楊竹雅，董秋穎，周禮彬，等.云南產(chǎn)主要藥用石斛資源調(diào)查研究[J].云南中醫(yī)中藥雜志，2016，37（8）：45-47.

[3] 楊宏亮，田珩，李沛波，等.柚皮苷及柚皮素的生物活性研究[J].中藥材，2007，30（6）：752.

[4] WonJH，KimJY，YunKJ，etal.PlantaMed，2006，72（13）：1181.

[5] 周桂芬，陳素紅，呂圭源，等.高效液相色譜法測(cè)定鐵皮石斛中柚皮素的含量[J].中國中藥雜志，2013，38（4）：520-523.

[6] 周天策.高效液相色譜法測(cè)定鐵皮石斛中柚皮素的含量[J].黑龍江科技信息，2016（22）：129.

[7] 王少平，孫乙銘，姜艷，等.基于指紋圖譜及柚皮素含量對(duì)鐵皮石斛及偽品的鑒定[J].浙江農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2015，27（12）：2199-2205

[8] 謝魯靈楓，史明敏，貢小輝，等.不同產(chǎn)地鐵皮石斛主要成分及甲醇提取物HPLC指紋圖譜研究[J].天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，2018，30：1181-1187.

[9] 葉子，盧葉，薛亞甫，等.鐵皮石斛專屬性成分的分離制備及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J].中國中藥雜志，2016，41（13）：2481-2486.

[10] 謝誼，彭艷梅，王實(shí)強(qiáng)，等.HPLC法測(cè)定流蘇石斛精制飲片中石斛酚的含量[J].湖南中醫(yī)雜志，2014，30（12）：144-146.

[11] 周婧，許志良，孔宏偉，等.不同石斛楓斗中酚酸類活性成分的比較及杓唇石斛素和石斛酚含量的測(cè)定[J].色譜，2010，28（6）：566-571.

作者簡(jiǎn)介：

陳丹（1982-），女，漢族，副教授，碩士。主要研究方向：中藥制劑開發(fā)及中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究。