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        柚皮素脂質(zhì)體對非酒精性脂肪性肝病大鼠脂質(zhì)代謝的影響及機(jī)制研究*

        2020-05-28 09:35:14唐曉飛鐘夢菊沈海娟
        實(shí)用肝臟病雜志 2020年3期
        關(guān)鍵詞:柚皮素脂質(zhì)體肝細(xì)胞

        唐曉飛,鐘夢菊,沈海娟

        本研究觀察了柚皮素脂質(zhì)體對非酒精性脂肪性肝病(nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)大鼠脂質(zhì)代謝和肝組織病理學(xué)變化的影響,以期為NAFLD的治療提供幫助,現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

        1 材料與方法

        1.1 動(dòng)物、儀器、藥品與試劑 SPF級雄性SD大鼠50只,購自武漢華聯(lián)科生物科技有限公司【動(dòng)物生產(chǎn)許可證號:SCXK(鄂)2015-0019】,晝夜交替周期為12 h,給予充足水和普通飼料,適應(yīng)性飼養(yǎng)1 w。全自動(dòng)生化分析儀(日本日立公司)、紫外分光光度計(jì)(上海光學(xué)儀器五廠有限公司)、酶標(biāo)儀(上海閃譜生物科技有限公司)、電泳儀(武漢純度生物科技有限公司)。柚皮素及相應(yīng)的柚皮素脂質(zhì)體由上海機(jī)純實(shí)業(yè)有限公司提供。檢測試劑盒均購自上海閃譜生物科技有限公司。Nrf2 mRNA和β-actin均購自瑞士Roche公司,Nrf2 mRNA:正向TGAAGCTCAGCTCGCATTGA,反向TGCTCCAGCTCGACAATGTT;β-acton:正向TGAGCTGCGTTTTACACCCT,反向GCCTTCACCGTTCCAGTTTT。

        1.2 模型構(gòu)建 隨機(jī)將大鼠分為5組,即對照組、模型組、柚皮素組、柚皮素脂質(zhì)體Ⅰ組和柚皮素脂質(zhì)體Ⅱ組。除對照組大鼠不予特殊處理外,其余4組大鼠均采用高糖高脂飼料飼養(yǎng)12 w。在柚皮素組、柚皮素脂質(zhì)體Ⅰ組和柚皮素脂質(zhì)體Ⅱ組,分別給予柚皮素30 mg·kg-1.d-1、柚皮素脂質(zhì)體20 mg·kg-1.d-1和柚皮素脂質(zhì)體30 mg·kg-1.d-1腹腔注射;給予模型組大鼠等量生理鹽水腹腔注射。在12 w末,處死大鼠,取肝組織稱質(zhì)量及行病理學(xué)檢查。

        1.3 指標(biāo)檢測 使用全自動(dòng)生化分析儀檢測血生化指標(biāo);采用ELISA法檢測血清超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、過氧化氫酶(catalase,CAT)和丙二醛(malonaldehyde,MDA)水平;采用Western blot法檢測肝組織Nrf2蛋白表達(dá),并采用RT-PCR法檢測肝組織Nrf2 mRNA水平。

        2 結(jié)果

        2.1 各組大鼠體質(zhì)量和肝質(zhì)量比較 在12 w末,柚皮素組、柚皮素脂質(zhì)體Ⅰ組和柚皮素脂質(zhì)體Ⅱ組大鼠體質(zhì)量和肝質(zhì)量均顯著低于模型組(P<0.05);柚皮素脂質(zhì)體Ⅱ組大鼠體質(zhì)量和肝質(zhì)量均顯著低于柚皮素組和柚皮素脂質(zhì)體Ⅰ組(P<0.05,表1)。

        表1 各組大鼠體質(zhì)量和肝質(zhì)量比較

        與對照組比,①P<0.05;與模型組比,②P<0.05;與柚皮素組比,③P<0.05;與柚皮素脂質(zhì)體Ⅰ組比,④P<0.05

        2.2 各組肝組織學(xué)變化 對照組大鼠肝細(xì)胞排列緊密,細(xì)胞內(nèi)未見脂肪顆粒;模型組大鼠肝細(xì)胞大小不一,有大量脂肪顆粒沉積,且伴有炎性細(xì)胞浸潤;柚皮素組和柚皮素脂質(zhì)體Ⅰ組大鼠肝細(xì)胞脂肪顆粒較小,存在較輕的炎性細(xì)胞浸潤;柚皮素脂質(zhì)體Ⅱ組大鼠肝細(xì)胞排列緊密,細(xì)胞大小均一,與對照組大鼠肝組織學(xué)表現(xiàn)相近(圖1)。

        2.3 各組血生化指標(biāo)比較 柚皮素組、柚皮素脂質(zhì)體Ⅰ組和柚皮素脂質(zhì)體Ⅱ組大鼠血清TC、TG、ALT和AST水平均顯著低于模型組(P<0.05);柚皮素脂質(zhì)體Ⅱ組大鼠血清TC、TG、ALT和AST水平均顯著低于柚皮素組(P<0.05,表2)。

        圖1 各組大鼠肝組織病理學(xué)表現(xiàn) (HE,400×)

        例數(shù)TC(mmol/L)TG(mmol/L)ALT(U/L)AST(U/L)對照組100.8±0.11.8±0.240.0±6.3133.4±8.4模型組101.2±0.2①2.6±0.2①69.8±5.3①229.6±18.2①柚皮素組101.0±0.1①②2.2±0.1①②52.6±5.2①②156.8±11.2①②柚皮素脂質(zhì)體Ⅰ組100.9±0.1①②2.1±0.2①②③51.5±4.8①②149.4±9.9①②柚皮素脂質(zhì)體Ⅱ組100.8±0.1②③1.9±0.1②③④45.4±4.3①②③④143.6±6.5②③

        與對照組比,①P<0.05;與模型組比,②P<0.05;與柚皮素組比,③P<0.05;與柚皮素脂質(zhì)體Ⅰ組比,④P<0.05

        2.4 各組血清SOD、CAT和MDA水平比較 柚皮素組、柚皮素脂質(zhì)體Ⅰ組和柚皮素脂質(zhì)體Ⅱ組大鼠血清SOD和CAT水平顯著高于,而MDA水平顯著低于模型組(P<0.05);柚皮素脂質(zhì)體Ⅱ組大鼠血清SOD和CAT水平顯著高于,而MDA水平顯著低于柚皮素組和柚皮素脂質(zhì)體Ⅰ組(P<0.05,表3)。

        表3 各組大鼠血清SOD、CAT和MDA水平比較

        與對照組比,①P<0.05;與模型組比,②P<0.05;與柚皮素組比,③P<0.05;與柚皮素脂質(zhì)體Ⅰ組比,④P<0.05

        2.5 各組大鼠肝組織Nrf2蛋白表達(dá)情況比較 對照組、模型組、柚皮素組、柚皮素脂質(zhì)體Ⅰ組和柚皮素脂質(zhì)體Ⅱ組大鼠肝組織Nrf2蛋白表達(dá)水平分別為(1.4±0.3)、(0.4±0.1)、(0.8±0.1)、(0.8±0.2)和(1.3±0.2),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);柚皮素組、柚皮素脂質(zhì)體Ⅰ組和柚皮素脂質(zhì)體Ⅱ組大鼠肝組織Nrf2蛋白水平均顯著高于模型組(P<0.05),柚皮素脂質(zhì)體Ⅱ組大鼠肝組織Nrf2蛋白水平顯著高于柚皮素組和柚皮素脂質(zhì)體Ⅰ組(P<0.05,圖2)。

        圖2 各組大鼠肝組織Nrf2蛋白表達(dá)情況

        2.6 各組大鼠肝組織Nrf2 mRNA水平變化比較 對照組、模型組、柚皮素組、柚皮素脂質(zhì)體Ⅰ組和柚皮素脂質(zhì)體Ⅱ組大鼠肝組織Nrf2 mRNA水平分別為(1.0±0.1)、(0.4±0.1)、(0.7±0.1)、(0.7±0.1)和(0.9±0.1),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。柚皮素組、柚皮素脂質(zhì)體Ⅰ組和柚皮素脂質(zhì)體Ⅱ組大鼠肝組織Nrf2 mRNA水平均顯著高于模型組(P<0.05),柚皮素脂質(zhì)體Ⅱ組大鼠肝組織Nrf2 mRNA水平顯著高于柚皮素組和柚皮素脂質(zhì)體Ⅰ組(P<0.05)。

        3 討論

        隨著人們生活水平的改善、不良飲食習(xí)慣的盛行及生活節(jié)奏的加快,我國NAFLD的發(fā)病率逐年攀升,且有向年輕化趨勢發(fā)展,嚴(yán)重影響著人們的健康[1-4]。目前,關(guān)于NAFLD的預(yù)防、治療和發(fā)病機(jī)制的研究已成為近年來研究的熱點(diǎn)[5-7]。但至今,有關(guān)NAFLD的發(fā)病機(jī)制仍未完全闡明[8-10]。多數(shù)學(xué)者認(rèn)同“二次打擊”學(xué)說,認(rèn)為肝細(xì)胞內(nèi)脂肪顆粒堆積,超出肝臟清除脂肪的能力時(shí),肝臟細(xì)胞會發(fā)生氧化應(yīng)激反應(yīng),進(jìn)而出現(xiàn)胰島素抵抗、脂質(zhì)過氧化及糖脂代謝紊亂等[11-13]。本文通過探討柚皮素脂質(zhì)體對NAFLD大鼠的保護(hù)作用,以期為NAFLD的治療做出新的研究。

        本研究用高糖高脂飼料飼養(yǎng)大鼠,經(jīng)過12周飼養(yǎng),檢測各組大鼠體質(zhì)量、肝質(zhì)量和血清TC、TG、ALT、AST水平,結(jié)果發(fā)現(xiàn)模型組大鼠體質(zhì)量、肝質(zhì)量和血清TC、TG、ALT、AST水平均顯著高于對照組,且經(jīng)病理學(xué)檢查觀察肝組織結(jié)構(gòu),發(fā)現(xiàn)模型組大鼠肝細(xì)胞內(nèi)有大小不等的脂肪顆粒堆積,炎性細(xì)胞浸潤,以上結(jié)果均表明NAFLD大鼠模型構(gòu)建成功。通過腹腔注射柚皮素和柚皮素脂質(zhì)體,發(fā)現(xiàn)柚皮素組、柚皮素脂質(zhì)體Ⅰ組和柚皮素脂質(zhì)體Ⅱ組大鼠體質(zhì)量、肝質(zhì)量和血清TC、TG、ALT、AST水平均較模型組大鼠大幅降低,表明柚皮素可有效調(diào)節(jié)大鼠脂質(zhì)代謝,保護(hù)肝臟,且柚皮素脂質(zhì)體劑型效果更好,隨著給藥劑量的增加,其效果越明顯。近年來,有研究[14-16]發(fā)現(xiàn)Nrf2與NAFLD發(fā)病密切相關(guān),其在NAFLD發(fā)病及疾病進(jìn)展過程中發(fā)揮著重要的作用。

        Nrf2是亮氨酸拉鏈轉(zhuǎn)錄因子家族成員之一,在機(jī)體內(nèi)普遍存在,主要負(fù)責(zé)調(diào)控組織或細(xì)胞防御氧化應(yīng)激,促進(jìn)SOD和CAT等抗氧化因子的生成[17-20]。本研究結(jié)果表明模型組大鼠肝組織Nrf2蛋白表達(dá)較對照組降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。經(jīng)腹腔注射柚皮素和柚皮素脂質(zhì)體后,大鼠肝組織Nrf2蛋白表達(dá)有不同程度的升高,以柚皮素脂質(zhì)體Ⅱ組升高更為明顯。進(jìn)一步采用RT-PCR法檢測大鼠肝臟Nrf2 mRNA水平,結(jié)果顯示模型組大鼠肝組織Nrf2 mRNA水平最低,而柚皮素組、柚皮素脂質(zhì)體Ⅰ組和柚皮素脂質(zhì)體Ⅱ組大鼠肝組織Nrf2 mRNA水平均有不同程度的升高,且以柚皮素脂質(zhì)體Ⅱ組升高更為明顯。通過檢測5組大鼠血清SOD、CAT和MDA水平,我們發(fā)現(xiàn)柚皮素組、柚皮素脂質(zhì)體Ⅰ組和柚皮素脂質(zhì)體Ⅱ組大鼠血清SOD和CAT水平均顯著高于模型組,而血清MDA水平顯著低于模型組。以上結(jié)果提示,柚皮素可能通過激活Nrf2表達(dá),促進(jìn)SOD和CAT的生成,進(jìn)而抑制肝細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷,發(fā)揮了保護(hù)肝臟的作用。

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