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        肉制品中瘦肉精的檢測技術(shù)研究

        2020-10-21 21:37:01陳明星李靜
        關(guān)鍵詞:免疫瘦肉精氣相色譜

        陳明星 李靜

        摘 要:瘦肉精是一類能夠促進(jìn)瘦肉生長、抑制肥肉生長的動(dòng)物用藥。不法分子為了促進(jìn)家畜生長和提高瘦肉率將瘦肉精添加于飼料中,食用了含瘦肉精的動(dòng)物組織會(huì)產(chǎn)生嚴(yán)重的毒副作用。作者綜述了瘦肉精的危害以及肉制品中瘦肉精檢測方法研究的進(jìn)展。

        關(guān)鍵詞:瘦肉精;檢測;氣相色譜;免疫

        瘦肉精,學(xué)名鹽酸克倫特羅(Clenbuterol,簡稱CL),其化學(xué)結(jié)構(gòu)和理化性質(zhì)與腎上腺素相似,是一種β-興奮劑。臨床上用于治療支氣管哮喘和痙攣等,養(yǎng)殖業(yè)上主要用于提高動(dòng)物的胴體瘦肉率,國外也用于減肥。但是CL具有很高的殘留性,可引起急性中毒和慢性中毒。世界各國嚴(yán)禁CL用于禽畜的養(yǎng)殖,但因利潤驅(qū)使,仍存在非法使用情況,嚴(yán)重威脅人類的健康。

        由于瘦肉精主要?dú)埩粲趧?dòng)物內(nèi)臟中,而西方國家一般不消費(fèi)動(dòng)物內(nèi)臟,在合理控制添加量的前提下,其殘留量及其對人體的影響有限,故而在美國、加拿大、新西蘭及我國香港等地區(qū),瘦肉精這類物質(zhì)的使用是合法的。在我國大陸地區(qū),從國民的飲食習(xí)慣和我國具體國情出發(fā),中國農(nóng)業(yè)部早在 1997 年 3 月就發(fā)布了農(nóng)牧發(fā) [1997] 3 號令嚴(yán)禁 β- 腎上腺素能激動(dòng)劑在動(dòng)物生產(chǎn)中的應(yīng)用,而香港地區(qū)對克倫特羅的最大殘留量規(guī)定為小于10 μg/kg(2001.146號法律公告)

        1 瘦肉精的檢測方法

        1.1 高效液相色譜法

        Fredy Morales-Trejo采用高效液相色譜法(HPLC)對牛肝臟中的鹽酸克倫特羅進(jìn)行測定,檢出限為 0.42 ng/g,相對偏差<4.74%,該法快速、準(zhǔn)確、重復(fù)性高,可操作性強(qiáng),可用于動(dòng)物肝臟中克倫特羅殘留的測定。Pilar Gonzalez Gigosos采用高效液相色譜法對動(dòng)物視網(wǎng)膜中的鹽酸克倫特羅進(jìn)行了檢測,檢出限為0.5 ng/g,該法準(zhǔn)確、快速。

        1.2 氣相色譜法

        吳銀良等用有機(jī)混合溶劑來提取動(dòng)物肝組織樣品,條件是堿性環(huán)境,提取液先濃縮,然后用乙酸乙酯溶解,再用稀HCl反萃取,達(dá)到除去脂肪的目的,調(diào)節(jié)pH值之后用SCX固相萃取柱來凈化,洗脫液先用氮?dú)獯蹈?,再用雙三甲基硅基三氟乙酰氨衍生,采用外標(biāo)法來定量,選擇離子模式進(jìn)行測定。鹽酸克倫特羅的檢出限是0.30g/kg,添加濃度1.0~5.0ng/kg,回收率77.4%~88.3%,相對標(biāo)準(zhǔn)偏差3.1%~5.1%,衍生物的峰面積與被測物的濃度在 0.003~1.00mg/L 范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系,線性回歸系數(shù)大于0.999。

        1.3 膠體金免疫法

        姜艷彬等以膠體金標(biāo)記鹽酸克倫特羅單克隆抗體競爭性膜層析技術(shù)制成了豬尿液中鹽酸克倫特羅殘留檢測的快速檢測試紙,它能快速、簡便地檢測出豬尿中的鹽酸克倫特羅,如待測尿樣中無鹽酸克倫特羅,金標(biāo)抗體便能與固相載體結(jié)合,形成紅色帶,如待測尿樣中含鹽酸克倫特羅,它與金標(biāo)抗體一樣可以和固相載體結(jié)合,占去了金標(biāo)抗體和固相載體結(jié)合的可能性,導(dǎo)致金標(biāo)抗體和固相載體結(jié)合量大大減少,形成不了紅色帶;經(jīng)試驗(yàn)制成了可檢測出豬尿樣中鹽酸克倫特羅濃度為2ng/mL的試紙條,可在8min內(nèi)完成測試,肉眼便可判斷,試紙條使用不需任何的儀器設(shè)備,能在現(xiàn)場快速檢測和篩選,靈敏度滿足臨床使用要求。

        1.4 酶聯(lián)免疫法

        ELISA法檢測“瘦肉精”是目前國內(nèi)普遍使用的檢測方法之一。其原理是利用抗原抗體反應(yīng):加入特定的“瘦肉精”抗體之后,它會(huì)與捕獲抗體結(jié)合,如果樣品中有 -興奮劑,將與特定“瘦肉精”的酶連接物相互競爭捕獲抗體的連接位點(diǎn),在洗板過程中,沒有連接的酶連接物會(huì)被除去,加入標(biāo)準(zhǔn)品、樣品溶液、酶連接物之后,經(jīng)過孵育、洗板,將底物(發(fā)色劑)轉(zhuǎn)變?yōu)樗{(lán)色的產(chǎn)物,加入終止液后,顏色從藍(lán)色變?yōu)辄S色。顯示的顏色越淺,“瘦肉精”含量越高,測量在450nm 處進(jìn)行,樣品中-興奮劑的濃度與吸光度成反比。

        1.5 綜合化學(xué)法

        根據(jù)“瘦肉精”的化學(xué)結(jié)構(gòu)與性質(zhì)進(jìn)行綜合鑒別主要是參照國家藥典標(biāo)準(zhǔn)方法。由于“瘦肉精”溶于水、乙醇,可以用水對其進(jìn)行提取?!笆萑饩笨梢燥@示芳香第一胺類、氯化物的鑒別反應(yīng),用分光光度計(jì)檢測,最大吸收波長244~295nm。綜合分析能定性確定肉制品中是否存在“瘦肉精”類物質(zhì),它不需要昂貴的試劑、儀器,操作簡單,沒有復(fù)雜處理過程,是基層動(dòng)物檢疫工作者初查“瘦肉精”類物質(zhì)殘留的有效方法,但靈敏度和最低檢測限不是很理想。

        2 展望

        當(dāng)前,造成鹽酸克倫特羅屢禁不止的原因之一就是國內(nèi)外檢測方法、手段還不完善,還沒有建立宰前(毛、尿液)監(jiān)測體系和準(zhǔn)確、迅速、方便、精確的檢測方法,從成本現(xiàn)場檢測設(shè)備簡便基層同步篩選法檢測(試紙條法、試劑盒法)優(yōu)點(diǎn)是操作簡單、時(shí)間短、成本低,適合在現(xiàn)場進(jìn)行大量樣品的快速篩查,但結(jié)果受環(huán)境、溫度等因素影響大,容易出現(xiàn)“假陽性”,因此試紙條法和試劑盒法檢測結(jié)果不能直接作為執(zhí)法依據(jù)。確證法檢測采用液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀等大型高精尖儀器設(shè)備,優(yōu)點(diǎn)是靈敏度高、準(zhǔn)確性好,結(jié)果可作為執(zhí)法依據(jù),但此類儀器設(shè)備非常昂貴,環(huán)境要求極高,檢測周期較長,不適用于基層和現(xiàn)場檢測。因此,國內(nèi)外檢測鹽酸克倫特羅等“瘦肉精”藥物通行做法是“先篩選后確證”,以確證法的結(jié)果作為監(jiān)管執(zhí)法的依據(jù),這樣既節(jié)約了成本,又不會(huì)誤判。

        參考文獻(xiàn)

        [1] 史建國,邵秀芝.競爭酶聯(lián)免疫吸附法測定豬肉中的鹽酸克倫特羅的研究[J].肉類工業(yè),2005,25(8):20-22.

        [2] 農(nóng)業(yè)部.動(dòng)物性食品中獸藥最高殘留限量[Z].農(nóng)牧發(fā)[1997]7 號.北京:農(nóng)業(yè)部,1997-09-04.

        [3] 農(nóng)業(yè)部. 中華人民共和國動(dòng)物及動(dòng)物源食品中殘留物質(zhì)監(jiān)控計(jì)劃[Z].農(nóng)牧發(fā)[1998]8 號.北京:農(nóng)業(yè)部,1998-05-11.

        作者簡介:陳明星,男,漢族,副教授,碩士學(xué)位,研究方向:食品科學(xué)。

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