陳小光

廣州血液中心，廣東廣州 510095

濃縮血小板的質(zhì)量會(huì)直接影響患者的血小板輸注效果，其質(zhì)量受到多方面的影響，包括全血量、血純度、含量等均會(huì)對(duì)治療效果有一定影響。以往應(yīng)用機(jī)采血小板較多，可制備高純度血小板，但成本高、采集時(shí)間過長(zhǎng)[1]，僅能滿足部分臨床所需，故臨床常輔以手工制備方法對(duì)其進(jìn)行補(bǔ)充。手工制備濃縮血小板可以從普通獻(xiàn)血者采集的全血中分離，成本低廉、資源豐富，但是由于技術(shù)參數(shù)、分離方法、保存環(huán)境等影響，導(dǎo)致相對(duì)質(zhì)量不高[2]。影響手工濃縮血小板數(shù)量的主要因素為離心條件和血液規(guī)格。其中離心條件包括懸掛法和分漿法，而血液規(guī)格方面目前主要采血規(guī)格為最低200mL，最高400mL，研究此兩種規(guī)格有利于更好的凸顯出研究結(jié)果的差異性。唐澤萍等[3]研究認(rèn)為離心條件與血液規(guī)格對(duì)收集血小板均有影響，且認(rèn)為400mL有利于制備濃縮血小板。本研究主要探討了手工制備濃縮血小板期間，不同血液規(guī)格、離心條件的影響作用，按照不同離心條件將采集血液（兩種規(guī)格）分為兩組，測(cè)定不同離心條件、不同規(guī)格下紅細(xì)胞混入量、白細(xì)胞混入量、血小板計(jì)數(shù)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2018年2月～2019年2月廣州血液中心愛心人士所獻(xiàn)血液共4212份。獻(xiàn)血者年齡18～55歲，平均（35.1±6.5）歲。按《獻(xiàn)血者健康檢查標(biāo)準(zhǔn)》[3]規(guī)定嚴(yán)格篩選符合標(biāo)準(zhǔn)的獻(xiàn)血者，其要求包括：男性體質(zhì)量需不小于50kg，女性體質(zhì)量需不小于45kg；營(yíng)養(yǎng)中等以上，發(fā)育正常，體溫正常；脈搏60～100次/min，脈壓差范圍4～5kPa，男性血壓12～20kPa，女性血壓8～12kPa；腹部無壓痛無腫塊、心肺正常；無大面積皮膚病、無創(chuàng)面感染、無皮膚黃染；經(jīng)血液初檢與體檢后，獻(xiàn)血者方能獻(xiàn)血。采血期間需嚴(yán)格按照《全血及成分血質(zhì)量要求》[4]進(jìn)行相應(yīng)操作，標(biāo)準(zhǔn)完整清楚，血袋封閉完好，血液需無脂肪血、無溶血及無凝塊問題。

本研究采用兩種分組方法，首先按照不同離心條件將4212份采集血液分為兩組，包括對(duì)照組（懸掛法，2106例）與觀察組（分漿夾，2106例）。對(duì)照組男1109例，女997例，平均年齡（35.1±6.2）歲；觀察組男1123例，女983例，平均年齡（35.0±6.4）歲。兩組一般資料比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。

其次，按照不同規(guī)格將4212份采集血液分為 兩 組，A組（400mL，2106例）與B組（200mL，2106例）。A組男1118例，女988例，平均年齡（35.3±6.4）歲；B組男1114例，女992例，平均年齡（35.0±6.4）歲。兩組一般資料比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 方法

儀器設(shè)備主要包括蘇州醫(yī)療儀器廠提供的血小板恒溫振蕩保存箱，廣州華南醫(yī)療用品有限公司提供的一次性專用血小板血袋（200mL、400mL），美國(guó)制造的SORVALL RC12BP離心機(jī)。此外還有開口夾子、止血鉗與分漿夾等。

使用富漿發(fā)制備濃縮血小板并將新鮮全血平衡后，分別對(duì)200mL與400mL全血進(jìn)行首次離心，200mL離心條件為2100×g離心力，維持10min，400mL全血離心條件為2100×g離心力，維持12min，兩者室溫需嚴(yán)格控制在22℃左右[5]。

離心完成后分別給予分漿夾分離作為觀察組和懸掛式分離作為對(duì)照組，制備富含血小板血漿與紅細(xì)胞，分離后將其血漿部分轉(zhuǎn)入“1”轉(zhuǎn)移袋，余留白膜層與血漿25～30mL/U。再由“2”轉(zhuǎn)移袋納入20mL/U左右的0.5～1.0cm的上層紅細(xì)胞，混勻“2”轉(zhuǎn)移袋后行二次離心，其條件為室溫22℃，400×g離心力，維持8min，結(jié)束后再將上層濃縮血小板進(jìn)行分離[6]。制備期間需備好形狀不同的血袋，包括上端普通方形與上端倒V型兩種。

1.3 觀察指標(biāo)

觀察評(píng)測(cè)觀察組、對(duì)照組的紅細(xì)胞混入量、白細(xì)胞混入量、血小板計(jì)數(shù)指標(biāo)數(shù)據(jù)及A組、B組的紅細(xì)胞混入量、白細(xì)胞混入量、血小板計(jì)數(shù)指標(biāo)數(shù)據(jù)[7]。所有數(shù)據(jù)均準(zhǔn)確錄入避免誤差發(fā)生。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 兩組不同離心條件下制備手工濃縮血小板情況比較

觀察組與對(duì)照組各2106袋。觀察組紅細(xì) 胞 混 入 量（0.69±0.58）×108/U、白 細(xì) 胞 混入 量（0.72±0.54）×108/U指 標(biāo) 均 低 于 對(duì) 照 組（1.87±0.95）×108/U、（1.03±0.79）×108/U且 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=248.359、14.762，P＜0.05）；觀察組血小板計(jì)數(shù)指標(biāo)（6.58±0.57）×1010/U高于對(duì)照組（6.01±0.28）×1010/U且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=40.468，P＜0.05）。見表1。

表1 兩組不同離心條件下制備手工濃縮血小板情況比較

表2 不同規(guī)格條件下制備濃縮血小板情況比較

2.2 不同規(guī)格條件下制備濃縮血小板情況比較

采用觀察組分離方法、離心條件比較200mL、400mL規(guī)格血小板的紅細(xì)胞混入量、白細(xì)胞混入量與血小板計(jì)數(shù)情況，200mL規(guī)格作為B組，400mL規(guī)格作為A組，A組紅細(xì)胞混入量（0.77±0.35）×108/U低 于B組（1.79±0.76）×108/U且 差 異有 統(tǒng) 計(jì) 學(xué) 意 義（t=55.726，P＜0.05）；A組 白細(xì) 胞 混 入 量（1.09±0.54）×108/U、血 小 板 計(jì) 數(shù)（6.61±0.57）×1010/U均 高 于B組（0.66±1.03）×108/U、（5.98±0.73）×1010/U且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=16.887、30.955，P＜0.05）。見表2。

3 討論

近年來隨著我國(guó)無償獻(xiàn)血事業(yè)的發(fā)展，臨床用血基本上絕大部分來自于無償獻(xiàn)血。無償獻(xiàn)血量主要以400mL為主，而符合獻(xiàn)血法的健康體檢標(biāo)準(zhǔn)的獻(xiàn)血人員，是保證血小板制備質(zhì)量的一個(gè)最主要條件，其次為設(shè)備、儀器、采血袋、離心機(jī)的質(zhì)量。采血袋的光滑程度會(huì)直接影響血小板的質(zhì)量，而采血時(shí)間過長(zhǎng)也會(huì)導(dǎo)致分離出的血小板的數(shù)量有明顯的不足，并可能在血袋內(nèi)出現(xiàn)凝血塊，并影響血小板質(zhì)量，此外在血液運(yùn)輸過程中，尤其需要防治震蕩，避免全血中血小板聚集影響血小板的制備質(zhì)量，且研究還發(fā)現(xiàn)，血液采集到血小板制備完成時(shí)間超過6h也會(huì)引起血小板質(zhì)量過低。而手工制備血小板可以節(jié)約全血中的血小板資源，并為臨床反復(fù)輸注血小板發(fā)生血小板輸注無需等患者提供了新的治療途徑。使用手工制備洗滌血小板為一種安全且有效的血小板制劑，

濃縮血小板手工制備的影響因素較多，其血小板制品的整體質(zhì)量與離心制備、采血順暢情況、血袋表面光滑度、血液保存液、全血量、輸注過程有關(guān)[8]，且亦會(huì)受血小板采集前后的運(yùn)輸、保存影響[9]。一旦血小板質(zhì)量出現(xiàn)問題，易會(huì)造成患者輸注血小板無效。有研究表示血小板收集過程中除獻(xiàn)血者自身影響因素外，還受血袋質(zhì)量、溫度、離心時(shí)間、離心速度的限制[10]。

本研究主要分析了不同全血量、離心速度、離心時(shí)間在血小板收集期間的效果。如表1所示，觀察組紅細(xì)胞混入量（0.69±0.58）×108/U、白細(xì)胞混入量（0.72±0.54）×108/U指標(biāo)均低于對(duì)照組（1.87±0.95）×108/U、（1.03±0.79）×108/U且 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=248.359、14.762，P＜0.05）；觀察組血小板計(jì)數(shù)指標(biāo)（6.58±0.57）×1010/U高于對(duì)照組（6.01±0.28）×1010/U且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=40.468，P＜0.05），可知分漿法制濃縮血小板數(shù)量較多且WBC、RBC混入量較低[11]，加之二次離心速度不高，血小板無需重新解聚懸浮即可應(yīng)用，在無特殊設(shè)備、不貯存的條件下效果同樣良好，操作簡(jiǎn)便優(yōu)點(diǎn)明顯[12]。利用分漿法是將全血離心后，將主袋放置在分漿夾進(jìn)行固定，隨后打開止血夾，使止血鉗控制流速，并利用分漿夾前后的擠壓力將白膜層及血漿擠入到空袋內(nèi)，且由于血袋的固定較好，界面穩(wěn)定不容易被破壞，且流速均勻，因此對(duì)濃縮血小板的回收率更高，紅細(xì)胞及白細(xì)胞的混入量較少。懸掛式分離則是利用虹吸原理，將離心后全血主袋懸掛在分漿夾，由于會(huì)受到血液自身重量的影響，產(chǎn)生一定的搖擺，導(dǎo)致分離界面容易被破壞，進(jìn)而影響濃縮血小板的收集量。

而如表2所示，A組紅細(xì)胞混入量（0.77±0.35）×108/U低 于B組（1.79±0.76）×108/U且 差 異有 統(tǒng) 計(jì) 學(xué) 意 義（t=55.726，P＜0.05）；A組 白細(xì) 胞 混 入 量（1.09±0.54）×108/U、血 小 板 計(jì) 數(shù)（6.61±0.57）×1010/U均 高 于B組（0.66±1.03）×108/U、（5.98±0.73）×1010/U且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=16.887、30.955，P＜0.05）。可 知400mL全血制備濃縮血小板紅細(xì)胞混入量較少，制備效果較佳。而白細(xì)胞相對(duì)較多的情況可能與制備時(shí)徹底收集其白膜層有一定關(guān)聯(lián)[13]。且本研究從兩方面進(jìn)行了分析，探究了不同分離方法和不同規(guī)格對(duì)手工濃縮血小板制備產(chǎn)生的影響，樣本量大，可借鑒性較強(qiáng)。研究還認(rèn)為，400mL的血袋制備相對(duì)比200mL血袋更佳，200mL全血在離心后分離界面相對(duì)較小，從離心機(jī)內(nèi)移除到分離的過程中，界面容易被破壞，同時(shí)在富漿內(nèi)含有大量的血小板粘附在血袋內(nèi)，導(dǎo)致消耗現(xiàn)象。雖然400mL全血液具備相似的因素，但是由于體積較大，且分離界面更為清楚，血小板的收集效果更好。

同時(shí)在分離血小板期間為保證血小板濃縮質(zhì)量，操作者需注意：（1）首次離心后，操作者需控制分離血漿時(shí)間，維持流速正常值，自然排放分漿夾內(nèi)血液[14]；（2）二次離心期間，墊好水包并豎直血袋，維持血袋上部充盈，可以使用止血鉗輕輕敲打主袋內(nèi)阻塞管，并使其無殘留紅細(xì)胞，可減少其血袋折疊、緊貼問題；（3）由于二次離心時(shí)間較短且速度較低，血液紅細(xì)胞層易泛起且疏松程度較高[15]，需保證動(dòng)作的輕放輕拿，動(dòng)作輕柔，平穩(wěn)放置，分離過程中動(dòng)作輕，制備后于室溫下半小時(shí)解聚，并將制備后的手工濃縮血小板放置在血小板的震蕩儀內(nèi)，完全解聚后24h內(nèi)完成輸注。此外，分離時(shí)操作者需將分漿管維持半開放狀態(tài)，且不可完全打開止血鉗，可有效保證血小板的濃縮質(zhì)量。同時(shí)，需要加強(qiáng)對(duì)相關(guān)人員的操培訓(xùn)，降低由于人工不熟練等導(dǎo)致的血小板制備效果不佳。

綜上所述，血液規(guī)格與離心條件的不同均會(huì)對(duì)手工制備濃縮血小板過程中的血小板收集質(zhì)量造成影響，為保證濃縮血小板的質(zhì)量，采用分漿法與400mL升的血液規(guī)格為宜。