孫澤兵

河北省清河縣中心醫(yī)院藥劑科，河北 邢臺 054800

1 材料與方法

1.1 受試物 固元酒以人參10 g、枸杞子25 g、淫羊藿25 g、覆盆子20 g，加8倍量50%vol的白酒浸泡30天，每周攪拌2次，加白酒調(diào)配至36%vol，制成1,000 mL。每日服用100 mL。按100 mL濃縮至6 mL的比例濃縮，取分別取6 mL、2 mL、1 mL濃縮液加入6 mL 50%vol的白酒配置成20 mL的灌胃液，灌胃劑量為10 mL/kg，即高、中、低劑量組（3、1、0.5 mL/kg），為人體推薦劑量的30、10和5倍。同時用50%vol的白酒配置15%vol酒精液作為酒精對照。

1.2 儀器 電子秤、電子天平、酶標(biāo)儀、紫外分光光度計

1.3 試劑 小牛血清、1640培養(yǎng)液；LDH基質(zhì)液。

1.4 實(shí)驗(yàn)動物 SPF級昆明種小鼠50只隨機(jī)分為5組，每組10只，即對照組、酒精對照組、高、中、低劑量組。灌胃1次/d，連續(xù)30 d。給藥結(jié)束后，頸椎脫臼處死小鼠，取脾臟稱重，后制成脾細(xì)胞混懸液。

1.5 方法[1]

1.5.1 脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)（MTT法） 將脾細(xì)胞混懸液調(diào)整為3×106個/mL，分兩孔加入24孔培養(yǎng)板中，一孔加ConA液，另一孔做對照。置5%CO2，37 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72 h。培養(yǎng)結(jié)束前4 h，每孔吸去上清液0.7 mL，加入0.7 mL不含小牛血清的1640培養(yǎng)液，同時加入MTT 50 μl/孔，繼續(xù)培養(yǎng)4 h。結(jié)束后，每孔加入1 mL酸性異丙醇，使紫色結(jié)晶完全溶解。測定OD值。

1.5.2 NK細(xì)胞活性測定（LDH法） 將脾細(xì)胞混懸液調(diào)整為2×107個/mL（效應(yīng)細(xì)胞），傳代后的YAC-1細(xì)胞調(diào)整為4×105個/mL（靶細(xì)胞），效靶比50:1，加入U型96孔培養(yǎng)板；最大釋放孔加靶細(xì)胞和1%NP40各100 μL，另設(shè)靶細(xì)胞，各設(shè)3個重復(fù)孔，于37 ℃、5%CO2條件下培養(yǎng)4 h，離心，每孔吸取上清液置平底96孔培養(yǎng)板中，加入LDH基質(zhì)液，反應(yīng)3 min，每孔加入1 mol/L的HC1終止反應(yīng)。測定OD值。

1.5.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計 （1）MTT法：用加ConA孔的OD值減去不加ConA孔的OD值代表淋巴細(xì)胞的增殖能力。（2）LDH法：NK細(xì)胞活性%=（反應(yīng)孔OD-自然釋放孔OD）/（最大釋放孔OD-自然釋放孔OD）。P＜0.05有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 對小鼠體重的影響 酒精對照組及三個劑量給藥組小鼠的實(shí)驗(yàn)前后體重與對照組比較均無顯著性差異（P＞0.05）。

表1 小鼠實(shí)驗(yàn)前后體重的變化（Mean±SD, g）

2.2 對小鼠淋巴細(xì)胞增殖能力和NK細(xì)胞的影響 中、高劑量組淋巴細(xì)胞增殖能力明顯高于空白對照組（P＜0.05）；中、高劑量組NK細(xì)胞活性率相較于對照組顯著增加（P＜0.05）。

表2 對小鼠淋巴細(xì)胞增殖能力和NK細(xì)胞的影響（Mean±SD）

3 討論

中醫(yī)自古有元?dú)庹?，養(yǎng)本固元，為養(yǎng)生之根本。本品采用人參、枸杞子、淫羊藿、覆盆子制成固元酒，取之大補(bǔ)元?dú)?、滋陰添精，補(bǔ)腎固本之效。研究結(jié)果表明，固元酒通過Con A誘導(dǎo)脾淋巴細(xì)胞的增殖來刺激免疫活性細(xì)胞的增殖，并能提高NK細(xì)胞的轉(zhuǎn)化率，從而提高機(jī)體的細(xì)胞免疫能力。