□ 吉偉佳 易路遙 虞雪軍 章 紅 熊 雯 楊婷婷 晏 亮 江西省藥品檢驗檢測研究院江西省藥品與醫(yī)療器械質量工程技術研究中心

氟蟲腈是廣譜殺蟲劑，英文通用名為FIPRONIL，商品名為銳勁特，是一種苯基吡唑類殺蟲劑[1]，用于防治跳蚤、虱子、蟑螂、螨蟲等昆蟲，被世界衛(wèi)生組織列為對人類有中度毒性的化學品，大劑量食用可導致肝功能、甲狀腺、腎臟損傷，歐盟法律規(guī)定氟蟲腈不得用于人類食品產(chǎn)業(yè)鏈中的畜禽。2017年7月，荷蘭被爆出“毒雞蛋”事件，事件影響到歐洲多國，中國臺灣也受到波及。雖然我國大陸市場沒有歐洲毒雞蛋流入，但氟蟲腈的使用和檢測也已經(jīng)引起了關注。

禽類養(yǎng)殖過程中一般不使用氟蟲腈，但在飼料的原料玉米、麥麩等儲存過程中，存在使用氟蟲腈殺蟲的可能性。氟蟲腈穩(wěn)定性較差，在動物、植物、環(huán)境中代謝生成毒性與氟蟲腈相當，甚至更高的砜化物或亞砜化合物，對環(huán)境極其不友好。研究表明作為代謝物之一的氟蟲腈砜的毒性比氟蟲腈高6倍以上，氟甲腈的毒性則是氟蟲腈原藥的9倍[2]，因此從安全角度考慮，同時分析氟蟲腈及其代謝物的藥物殘留更有意義。

目前，我國對于氟蟲腈的檢測主要在水果、蔬菜等領域，例如，現(xiàn)行有效的國家標準和行業(yè)標準SN/T 1982—2007[3]主要針對水果、蔬菜、茶葉等樣品，雞肉樣品也只檢測了氟蟲腈原藥，缺少對氟蟲腈代謝物的檢測；GB 23200.115-2018[4]中規(guī)定了雞蛋中氟蟲腈及其代謝物殘留量的液相色譜-質譜聯(lián)用測定方法，卻未見氣質聯(lián)用技術檢測鮮蛋中氟蟲腈及其代謝物的方法；GB 2763.1-2018[5]已經(jīng)對鮮蛋中氟蟲腈最大藥物殘留量做出規(guī)定。作為補充方法，建立雞蛋等動物源性食品中氟蟲腈及其代謝產(chǎn)物殘留的氣相色譜串聯(lián)質譜儀檢測方法，可以完善檢測體系，能更好的了解氟蟲腈及其代謝產(chǎn)物在雞蛋中的污染狀況，評估氟蟲腈及其代謝產(chǎn)物經(jīng)雞蛋攝入風險的先決條件。

近年來，氣質聯(lián)用技術不斷發(fā)展提高，尤其在多組分獸藥、農(nóng)藥分析方面的分離和取證方面優(yōu)勢明顯。本文采用氣相色譜與質譜聯(lián)用技術對雞蛋中可能殘留的氟蟲腈及其代謝物進行色譜分離和定性定量分析，通過考察不同前處理方式、回收率、精密度等指標，選擇了高效快速的QUECHERS提取凈化法，建立了鮮蛋中氟蟲腈及其代謝產(chǎn)物殘留量測定的氣相色譜串聯(lián)質譜法（GC-MS法），該方法前處理便捷高效，在10～500 ng/mL范圍內(nèi)線性良好，精密度較好，檢測限能滿足國家標準，經(jīng)驗證適用于鮮蛋中氟蟲腈及其代謝產(chǎn)物殘留的檢測。

1 材料與方法

1.1 儀器及試劑

WondaPak QuEChERS提取包(含氯 化 鈉 等)、WondaPak QuEChERS SPE凈 化 管（ 含PSA、C18等）；7890A/5975氣相色譜質譜聯(lián)用儀（美國 Aglient）；XS205DU型電子天平（梅特勒托利多）；VXR BS25振蕩器（德國IKA）；乙腈（色譜級，美國sigma），氟蟲腈、氟甲腈、氟蟲腈亞砜以及氟蟲腈砜標準品（國家標準物質中心）；蛋類樣品（市售雞蛋，3 000 g）。

1.2 色譜條件

色譜柱：采用DB-5MS，規(guī)格為30 m×0.25 mm×0.25 μm，安捷倫（Agilent）；柱溫：70 ℃保持2 min，以20 ℃/min升溫至230 ℃，保持5 min，繼續(xù)升溫至270 ℃，保持2 min。柱流速為1.0 mL/min；進樣口溫度：250 ℃；進樣方式：不分流進樣，進樣體積：1 μL。

1.3 質譜條件

電離方式：電子轟擊源（EI），70 ev；離子源溫度：230 ℃；離子源電壓：1.20 kV；GC/MC傳輸線溫度：280 ℃；溶劑延遲：4 min；測定方式：選擇離子監(jiān)測（SIM），監(jiān)測離子詳見表1。

表1 各目標化合物選擇監(jiān)測離子表

1.4 樣品制備

稱取5.00 g經(jīng)均漿后的樣品，加入5 mL的1%甲酸乙腈，振蕩30 s后，加入一份WondaPak QuEChERS提取包（含氯化鈉等)，渦旋30 s，于8 000 r/min的條件下離心10 min，吸取1 mL上清液，待凈化。將1 mL上清液轉移至WondaPak QuEChERS SPE凈化管（含PSA、C18等）中，渦旋30 s，于10 800 r/min下離心2 min，取上清液，過0.22 μm有機濾膜，供氣相色譜－質譜測定。

2 結果與討論

2.1 前處理方法的選擇

由于雞蛋中脂肪、蛋白質含量較高，基質復雜，對目標物質干擾大，所以前處理中凈化方法的選擇對實驗結果影響很大。本實驗對比了兩種提取凈化方法對回收率的影響，分別為WondaPak QuEChERS提取法和HLB固相萃取柱凈化法。其中HLB固相萃取柱凈化法提取樣品進入氣相色譜串聯(lián)質譜儀測定，測得4種目標物質的回收率僅有50%，低于WondaPak QuEChERS提取法提取的樣品（回收率80%以上），且WondaPak QuEChERS提取法操作更簡便快捷，提高實驗效率，比較結果之后本實驗選擇了WondaPak QuEChERS提取法作為前處理方法。

2.2 線性實驗和檢測限

標準儲備液的配制：用乙腈將氟蟲腈、氟甲腈、氟蟲腈亞砜和氟蟲腈砜4種標準品配制成濃度約為100 μg/mL的標準儲備液。分別準確吸取上述氟蟲腈、氟蟲腈亞砜、氟蟲腈砜和氟甲腈4種標準儲備液各2.5 mL，置于100 mL棕色量瓶中，用乙腈稀釋至刻度，搖勻，即得混合標準溶液。樣品于-20 ℃保存，保存期1個月（濃度約2 500 ng/mL）。

基質混合標準系列工作溶液的制備：稱取6份陰性樣品5.00 g于50 mL離心管中，分別精密加入混合標準使用液，配制成系列濃度為10、25、50 、100、200、300 ng/mL以 及500 ng/mL基質混合標準系列工作溶液。在1.2和1.3的色譜質譜條件下以峰面積對濃度作線性回歸分析，制成的標準曲線方程如表2所示。采用SIM測定方式得到氟蟲腈及其代謝物的總離子流圖（TIC）如圖1所示。

本方法中以3倍信噪比計算氟蟲腈及其代謝物氟甲腈、氟蟲腈亞砜、氟蟲腈砜的檢測限，如表2所示。該方法線性良好，方法簡便、準確可靠，靈敏度高，可以滿足分析工作要求。

2.3 回收率與精密度

本實驗選取陰性樣品作為基質進行了回收率與精密度的試驗，對氟蟲腈及其代謝物的混合標液按0.05、0.2、0.4 mg/kg 3個濃度水平進行添加回收率試驗，各平行3份，結果見表3。

表2 各組分的標準曲線方程、相關系數(shù)及檢出限表

圖1 四種物質標準品的總離子流圖

表3 各組分加標回收率及相對標準偏差表

3 結論

本實驗建立了鮮蛋中氟蟲腈及其代謝物氟甲腈、氟蟲腈亞砜、氟蟲腈砜氣質聯(lián)用定性定量分析檢測的方法，對前處理凈化條件進行優(yōu)化并對方法進行了方法學試驗。結果，該方法線性良好，回收率較高，且操作簡便高效，適用于雞蛋中氟蟲腈及其代謝的分析檢測。