李元慈

摘 要：目的：探究茶多酚對(duì)于肝臟的保護(hù)作用，為其在醫(yī)療領(lǐng)域的應(yīng)用提供科學(xué)數(shù)據(jù)。方法：將小鼠設(shè)置空白對(duì)照、模型對(duì)照和處理組，處理組灌胃不同劑量的茶多酚2周后，利用四氯化碳對(duì)小鼠建立急性肝損傷模型，采集小鼠的血液和肝臟組織，用試劑盒測(cè)定小鼠血液中AST和ALT活性以及肝臟中MDA含量和GSH、SOD活性。結(jié)果：與模型對(duì)照組相比，灌胃高劑量茶多酚能使小鼠血液中的AST活性下降18.33%（P<0.05），ALT活性下降20.51%（P<0.05），肝臟中MDA含量下降31.53%（P<0.05），GSH活性增加25.47%（P<0.05），SOD活性增加18.03%（P<0.05）。結(jié)論：茶多酚可以增強(qiáng)小鼠肝臟的抗氧化能力，抑制脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)造成的肝損傷，從而保障肝功能的正常。

關(guān)鍵詞：茶多酚;肝損傷;保肝護(hù)肝;抗氧化

肝臟是一個(gè)較容易發(fā)生病變的器官，病毒性肝炎、酒精性脂肪肝、肝纖維化、肝硬化和肝癌等都是常見(jiàn)的一些肝病[1-5]。為了防止肝臟性疾病的發(fā)生，除了要改善飲食習(xí)慣、減少過(guò)多脂肪的攝入，同時(shí)加強(qiáng)體能鍛煉之外，還要注重具有保肝護(hù)肝作用的一系列保健品的攝入，通過(guò)多方面的預(yù)防措施保證肝臟健康[6-7]。研究發(fā)現(xiàn)，茶葉具有抗氧化作用，可以清除體內(nèi)自由基、延緩機(jī)體衰老，同時(shí)還能夠抑制腫瘤的發(fā)生，對(duì)機(jī)體健康具有諸多益處[8-10]。茶葉中的生理活性成分主要是茶多酚，包括兒茶素、花色苷、黃酮類等物質(zhì)[11]，這些功能成分特殊的結(jié)構(gòu)形式是茶葉能夠發(fā)揮重要生理活性的基礎(chǔ)。鑒于茶多酚是一種具有強(qiáng)抗氧化作用的物質(zhì)，若是能夠抑制或是減輕肝臟中的脂質(zhì)過(guò)氧化作用，就能夠修復(fù)肝細(xì)胞損傷，恢復(fù)肝功能正常，從而保證機(jī)體健康[12]，本研究通過(guò)四氯化碳建立急性肝損傷模型，通過(guò)給予茶多酚，探究茶多酚是否能夠起到保肝護(hù)肝的作用以及可能的機(jī)制，為預(yù)防肝病及開(kāi)發(fā)相關(guān)的茶多酚保健品提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

茶多酚，湖南金農(nóng)生物資源股份有限公司;50只4周齡昆明種清潔級(jí)雄鼠（體重20±2g），重慶騰鑫比爾實(shí)驗(yàn)動(dòng)物銷售有限公司（許可證號(hào)：SCXK（渝）2007-006）;基礎(chǔ)飼料，重慶騰鑫比爾實(shí)驗(yàn)動(dòng)物銷售有限公司;ALT、AST、MDA、GSH、SOD活性測(cè)定試劑盒，南京建成生物工程研究所;其他所用試劑均為分析純。

1.2 儀器與設(shè)備

F6/10勻漿機(jī)，上海弗魯克流體機(jī)械制造有限公司;M680型酶標(biāo)儀，美國(guó)伯樂(lè)公司;H2500R-2型冷凍離心機(jī)，湘儀離心機(jī)儀器有限公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組及喂養(yǎng) 對(duì)上述50只小鼠用基礎(chǔ)飼料進(jìn)行喂養(yǎng)，持續(xù)1周后，隨機(jī)分成5組，每組10只，分別記為正常對(duì)照組，模型對(duì)照組，茶多酚低、中、高劑量組。分組完成后，接著用基礎(chǔ)飼料持續(xù)喂養(yǎng)2周，同時(shí)茶多酚處理組進(jìn)行預(yù)防性給藥，即茶多酚低、中、高劑量組分別灌胃茶多酚劑量100、50、20mg/kg·BW，正常對(duì)照組和模型對(duì)照組分別灌胃等體積的生理鹽水。末次給藥結(jié)束2h后，建立小鼠急性肝損傷模型，對(duì)模型對(duì)照組和茶多酚處理組小鼠采取1次性皮下注射四氯化碳的方式進(jìn)行，注射的四氯化碳劑量為0.1mL/100g。實(shí)驗(yàn)期間，小鼠每周稱2次體重，飼養(yǎng)室環(huán)境條件：室溫22℃左右，相對(duì)濕度保持在60%，12 h輪換照明。

1.3.2 實(shí)驗(yàn)樣品采集 建立急性肝損傷模型后，小鼠采取禁食不禁水24h，結(jié)束后進(jìn)行眼眶取血，所得血液放于含有肝素鈉的離心管中，然后進(jìn)行低溫離心操作，4 000 r/min離心10 min，收集上層血清用于測(cè)定ALT、AST活性。取血結(jié)束后，利用脫頸法處死小鼠，解剖小鼠摘取肝臟組織，用冰冷的生理鹽水清洗干凈表面的血水后，用濾紙吸干表面水分，用錫箔紙包好放于-80 ℃的冰箱保存，用于測(cè)定MDA、GSH和SOD活性。

1.3.3 血清中ALT、AST活性的測(cè)定 利用酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定血清中ALT、AST活性，按照試劑盒中附帶的說(shuō)明書(shū)上的方法進(jìn)行測(cè)定。

1.3.4 肝臟中MDA、GSH和SOD活性的測(cè)定 稱取0.5g左右的肝臟組織，加入5mL冰冷的生理鹽水，用勻漿器在冰水中進(jìn)行勻漿，然后4 ℃ 8 000 r/min離心15 min，吸取上層清液進(jìn)行MDA、GSH和SOD活性測(cè)定。測(cè)定方法按照試劑盒中說(shuō)明書(shū)上的方法進(jìn)行。

1.4 數(shù)據(jù)處理

測(cè)定結(jié)果用±s表示。采用SPSS 19.0對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行顯著性分析，P<0.05認(rèn)為差異有顯著性。

2 結(jié)果與分析

2.1 茶多酚對(duì)急性肝損傷模型小鼠血清中ALT和AST活性的影響

ALT和AST是衡量肝臟功能是否發(fā)生異常的兩個(gè)重要指標(biāo)[13-14]。通常情況下，ALT和AST主要存在于肝臟中，在血液中的含量極低[15]。但是當(dāng)肝臟功能發(fā)生異常時(shí)，ALT和AST就會(huì)從肝臟中轉(zhuǎn)移至血液中，導(dǎo)致血液中ALT、AST含量升高，活性增加[16]。從血清中ALT、AST的活性變化情況便可得知肝臟的健康狀況。由表1可知，給小鼠注射四氯化碳之后，模型對(duì)照組小鼠血清中的ALT、AST活性均較正常對(duì)照組顯著增加（P<0.05），說(shuō)明四氯化碳對(duì)小鼠的肝臟造成了傷害，急性肝損傷模型建立成功。和模型對(duì)照組相比，灌胃茶多酚的小鼠血清中的ALT、AST活性均有所下降。就ALT活性而言，與模型組比較，高劑量組表現(xiàn)出顯著差異（P<0.05），中、低劑量組則無(wú)差異（P>0.05）。和正常對(duì)照組相比，高劑量組仍顯著高于其水平（P<0.05），可見(jiàn)茶多酚不能使ALT活性下降至正常水平。就AST活性而言，與模型組比較，高、中、低三個(gè)劑量組的活性均顯著低于其水平（P<0.05）。和正常對(duì)照組相比，高劑量組無(wú)顯著差異（P>0.05），中、低劑量組顯著高于其水平（P<0.05）?？梢?jiàn)適量的茶多酚可以修復(fù)肝損傷，保證肝功能的正常，降低血液中的ALT、AST活性。

2.2 茶多酚對(duì)急性肝損傷模型小鼠肝臟中MDA含量的影響

四氯化碳造成肝損傷的原因在于四氯化碳會(huì)促使肝臟發(fā)生脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)[17-18]。脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)會(huì)產(chǎn)生一系列的有害物質(zhì)，MDA就是其中的一種。這些有害物質(zhì)難降解，并且它們的存在會(huì)破壞細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)，降低酶活性，損傷血管內(nèi)皮細(xì)胞，造成動(dòng)脈粥樣硬化[19-21]。減少以MDA為代表的有害物質(zhì)可以有效保證肝功能正常。由表2可知，和正常對(duì)照組相比，模型對(duì)照組小鼠肝臟中的MDA含量明顯增加（P<0.05），說(shuō)明四氯化碳導(dǎo)致小鼠肝臟中的脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)加劇，生成的MDA有害物含量增加。但是給予小鼠茶多酚后，肝臟中MDA含量有所下降。和模型對(duì)照組相比，茶多酚高、中劑量組小鼠的MDA含量顯著降低（P<0.05），低劑量組無(wú)明顯變化（P>0.05）。和正常對(duì)照組相比，各劑量組小鼠肝臟中的MDA含量均顯著高于其水平，可見(jiàn)茶多酚不能使MDA含量降至正常水平。由上述分析可知，由于茶多酚具有抗氧化作用，因此能在一定程度上抑制四氯化碳對(duì)肝臟造成的脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)，起到保護(hù)肝臟的作用，但是這種保護(hù)作用是有限的，不能使肝功能恢復(fù)至正常狀況。

2.3 茶多酚對(duì)急性肝損傷模型小鼠肝臟中GSH和SOD活性的影響

對(duì)于脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)而言，機(jī)體會(huì)產(chǎn)生GSH和SOD等活性物質(zhì)來(lái)對(duì)抗氧化損傷[22]。GSH和SOD可以有效抑制脂質(zhì)過(guò)氧化，清除體內(nèi)的自由基，減少氧化反應(yīng)產(chǎn)物，使機(jī)體保持良好的氧化還原狀態(tài)[23]。對(duì)于肝損傷而言，若是能夠提高肝臟中GSH、SOD的活性，就能夠有效地保護(hù)肝臟免受損害[24-25]。由表3可知，用四氯化碳建立的小鼠急性肝損傷模型，其肝臟中的GSH、SOD活性會(huì)被抑制。和正常對(duì)照組相比，模型組小鼠肝臟中的GSH、SOD活性顯著下降（P<0.05），說(shuō)明肝功能損傷會(huì)降低抗氧化物質(zhì)的活性。和模型對(duì)照組相比，灌胃茶多酚的小鼠血清中的GSH、SOD活性有所增加。就GSH活性而言，與模型組比較，高、中劑量組活性顯著增加（P<0.05），低劑量組無(wú)顯著差異（P>0.05）。和正常對(duì)照組相比，高、中、低劑量組仍顯著低于其水平（P<0.05），可見(jiàn)茶多酚能在一定程度上增加GSH活性，但不能恢復(fù)至正常水平。就SOD活性而言，與模型組比較，高、中劑量組的活性均顯著提升（P<0.05），低劑量組無(wú)變化（P>0.05）。和正常對(duì)照組相比，高劑量組無(wú)顯著差異（P>0.05），中、低劑量組顯著低于其水平（P<0.05），可見(jiàn)一定劑量的茶多酚可以使SOD活性恢復(fù)至正常水平。由上述分析可知，適量茶多酚能夠增加小鼠肝臟中抗氧化物質(zhì)的活性，提高抗脂質(zhì)過(guò)氧化的能力，從而修復(fù)肝損傷，保護(hù)肝臟組織。

3 結(jié)論

利用四氯化碳建立急性肝損傷模型是一種常用的手段，在該種模型中，四氯化碳引起的自由基和脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)是造成肝損傷的主要原因[26]。本研究在對(duì)小鼠進(jìn)行預(yù)防性給予茶多酚后，便利用四氯化碳建立肝損傷模型，探討茶多酚對(duì)于肝臟的保護(hù)作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)，茶多酚可以通過(guò)增加肝臟中抗氧化物質(zhì)的活性，增強(qiáng)肝臟抵制脂質(zhì)過(guò)氧化的能力，保護(hù)肝臟免受氧化作用造成的損傷，達(dá)到保肝護(hù)肝的作用。本研究只是簡(jiǎn)要探究了茶多酚在提高肝臟抗氧化能力方面的作用，關(guān)于更深層次的機(jī)理還需進(jìn)一步研究。

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Abstract：ObjectiveTea polyphenols （TP）is an active substance with excellent antioxidant activity.Exploring the protective effect of TP on liver can provide data for its application in medical field.MethodThe mice were divided into blank control group，model control group and treatment group.After 2 weeks of intragastric administration of tea polyphenols in different doses，CCl4 was used to establish acute liver injury model in mice.Blood and liver tissues of mice were collected.AST and ALT activities in blood，MDA content in liver and GSH and SOD activities were measured by kit.ResultCompared with the model control group，the high dose of tea polyphenols could decrease AST activity by 18.33% （P<0.05），ALT activity by 20.51% （P<0.05），MDA content in liver by 31.53% （P<0.05），and increase GSH activity by 25.47% （P<0.05），SOD activity by 18.03% （P<0.05）.ConclusionTea polyphenols can enhance the antioxidant capacity of mice liver and inhibit the liver damage caused by lipid peroxidation，thus ensuring the normal liver function.

Keywords：tea polyphenols;liver injury;protecting liver;antioxidant

（責(zé)任編輯 李婷婷）