王吉 嚴思思 肖海思 劉水平 曾禹 周慧娟 謝文 文利新

摘 要：目的：模擬觀察我國居民將植物油與豬油搭配食用的習(xí)慣，探討玉米與豬油調(diào)和油，大豆與豬油調(diào)和油在兩種不同攝入水平下對肝功能、肝臟抗氧化能力及肝脂的影響。方法：將40只8周齡雄性C67BL/6J小鼠隨機均分為4組，按人均理想用油25g/d和目前中國居民實際人均用油42g/d兩個水平，分別在其基礎(chǔ)日糧下添加3.8%玉米油與豬油的調(diào)和油（CR）、6.5%玉米油與豬油的調(diào)和油（CA）、3.8%大豆油與豬油的調(diào)和油（SR）、6.5%大豆油與豬油的調(diào)和油（SA）。8周后進行稱重，取血，采集肝臟。結(jié)果：CR與SR比較，肝指數(shù)、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、堿性磷酸酶（ALP）活性顯著降低;SA相比CA顯著上升AST活性;無論在推薦攝入水平還是實際攝入水平，玉米調(diào)和油相比大豆調(diào)和油能有效降低肝臟中甘油三酯（TG）水平，并顯著提升肝臟抗氧化酶活性，降低丙二醛（MDA）的含量。結(jié)論：與大豆調(diào)和油比較，玉米調(diào)和油有明顯的保護肝功能，增強肝臟抗氧化能力，降低過氧化損傷，并能降低肝脂質(zhì)沉積。

關(guān)鍵詞：豬油;玉米油;大豆油;調(diào)和油;肝功能;抗氧化;肝脂質(zhì)

膳食油脂中的主要成分是飽和脂肪酸（SFAs）、單不飽和脂肪酸（MUFAs）和多不飽和脂肪酸（PUFAs）。此外，動物油脂中還有一定量的膽固醇。根據(jù)世界衛(wèi)生組織和中國營養(yǎng)學(xué)會的建議，除了食物所含脂肪外，每天最佳攝入的油脂量為25～30 g，且需滿足SFA、MUFA和PUFA三者構(gòu)成的質(zhì)量分數(shù)比例為1∶1∶1[1]。但是近幾年來，中國居民植物性油脂攝入增加，而動物性油脂的攝入減少。有研究證明，若長期只食用植物油而不食用動物油脂會導(dǎo)致食欲不振、傷口不易愈合、牙齒松動等營養(yǎng)不良的現(xiàn)象，還會增加糖尿病、貧血和心血管疾病等慢性疾病的風(fēng)險[2]。隨著中國居民生活水平的提高和中國城市化發(fā)展進程加快，我國居民日均油脂總攝入量達到42.1g/d，超過推薦攝入量的1/3。長期高脂飲食會導(dǎo)致肝臟脂質(zhì)沉積，造成非酒精性脂肪肝，還能引起脂質(zhì)過氧化，造成肝臟氧化損傷。本課題研究小組在前期研究中發(fā)現(xiàn)與單一油脂比較，植物油與豬油搭配能有效降低體重和血脂[3]，抑制脂肪酸的合成，促進甘油三酯（TG）的分解[4]，其中玉米油與豬油的調(diào)和油不但顯著改善血脂水平還有效減輕肝臟氧化損傷[5];相比大豆油和豬油調(diào)和油，玉米油和豬油搭配食用后會降低腎功能損傷和痛風(fēng)的風(fēng)險[6]。本實驗在前期研究基礎(chǔ)上根據(jù)中國人的飲食習(xí)慣，以小鼠為模型，用兩種不同的植物油與豬油進行調(diào)和，按照推薦攝入量25g與實際攝入量42g（換算為小鼠日糧中油脂添加量為3.8%、6.5%）飼喂12w以后，探究其對肝脂質(zhì)沉積、肝功能及肝臟抗氧化能力的影響，為人們?nèi)粘Ｅ胝{(diào)油脂的選擇和搭配提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

8w齡SPF級雄性C57BL/6J小鼠，湖南斯萊克景達實驗動物有限公司，實驗動物許可證號為SCXK（湘）2016-0002。

1.2 實驗材料

1.2.1 材料與試劑 大豆油，中糧糧油工業(yè)有限公司的一級大豆油;玉米油，三星集團的一級玉米油;豬油，湖南煙村生態(tài)農(nóng)牧有限公司提供的煉制豬板油;谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）、堿性磷酸酶（ALP）試劑盒，邁瑞190全自動分析儀配套的試劑盒;抗氧化試劑盒，南京建成科技有限公司;ELISA試劑盒，上海博谷生物科技有限公司;

1.2.2 儀器與設(shè)備 電子天平，日本島津有限公司;BS190 全自動生化分析儀，深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司;Infinite M200 Pro 全波長酶標(biāo)儀，奧地利TECAN 公司;CX41光學(xué)顯微鏡，日本Olympus有限公司。

1.3 實驗方法

1.3.1 動物實驗設(shè)計 將40只8w齡SPF級雄性C57BL/6J小鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1w后，隨機分為4組，每組10只，根據(jù)中國營養(yǎng)學(xué)會所建議的中國居民油脂攝入量（25g/d）和中國居民實際平均油脂攝入量（42.1g/d），由攝入油脂供能比折算成小鼠飼料的2個油脂添加水平，即低水平（3.8%）和高水平（6.5%），實驗分為4組，分別為玉米油與豬油調(diào)和油推薦攝入量組（CR）、玉米油與豬油調(diào)和油實際攝入組（CA）、大豆油與豬油調(diào)和油推薦攝入量組（SR）、大豆油與豬油調(diào)和油實際攝入量組（SA），按表1所示配制日糧。飼養(yǎng)過程自由采食及飲水，溫度控制在22～26℃，第56天禁食不禁水12h，稱重，摘眼球取血，斷頸椎處死，采集肝臟并拍照稱重，分裝保存。

1.3.2 肝指數(shù)的計算 按照式（1）計算肝指數(shù)。

肝指數(shù)=[肝重（g）/體重（g）]*100%（1）

1.3.3 肝功能檢測 采集小鼠血液于4℃靜置2h后，3 000r/min離心8min，取血清，采用深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司BS190全自動生化分析儀，按照試劑盒說明書檢測血清中肝功能指標(biāo)。

1.3.4 肝臟抗氧化能力及肝脂質(zhì)檢測 取小鼠肝組織0.1g加入900μL生理鹽水制成10%的肝臟勻漿，并在2 500r/min的條件下離心10min，取上清。根據(jù)南京建成科技有限公司的操作說明書檢測肝臟中總超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-PX）、總抗氧化能力（T-AOC）、丙二醛（MDA）、TG、膽固醇（TC）的含量。

1.3.5 肝臟病理切片制作 取小鼠肝組織于4%中性甲醛溶液中固定，進行常規(guī)石蠟包埋，5μm切片，依次經(jīng)脫蠟、染色、脫水、透明、封片后，置光學(xué)顯微鏡下進行鏡檢。

1.3.6 數(shù)據(jù)處理及作圖 對所有結(jié)果運用 SPSS17.0 軟件進行方差齊性檢驗和單因素方差分析，再運用最小顯著性差異（LSD）法比較各組數(shù)據(jù)均值顯著性，結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同水平的兩種調(diào)和油對小鼠肝功能的影響

由圖1可知，在推薦攝入水平下，與SR比較，CR的肝指數(shù)、ALT、AST、ALP水平均顯著降低（P<0.05）;而在實際攝入水平下，與SA比較，CA的AST水平極顯著降低（P<0.01），兩組之間的肝指數(shù)、ALT、ALP水平比較無顯著性差異（P>0.05）。攝入推薦量的玉米油豬油調(diào)和油能顯著改善其高劑量造成的肝指數(shù)和AST的升高（P<0.01）。

2.2 不同水平的兩種調(diào)和油對小鼠肝臟抗氧化能力的影響

由圖2可知，在推薦攝入水平下，CR相對于SR能顯著升高SOD水平（P<0.05），降低肝臟中MDA含量（P<0.01）。在實際攝入水平下，CA顯著升高GSH-Px，降低MDA含量（P<0.05）。在同一油脂不同攝入水平，與SR相比較，SA的GSH-Px水平顯著降低（P<0.05）。與CR比較，CA組的SOD水平極顯著降低（P<0.01）。GSH-Px水平顯著上升（P<0.05）。

2.3 不同水平的兩種調(diào)和油對小鼠肝脂質(zhì)的影響

由表2可知，在不同油脂同一攝入水平下，大豆豬油調(diào)和油組相對玉米豬油調(diào)和油組的TG水平顯著升高（P<0.05）;推薦劑量下攝入大豆調(diào)和油能極顯著降低其高水平下造成的TC含量升高（P<0.01）;與CA組相比較，SA組顯著升高肝臟中TC水平（P<0.01）。

2.4 不同水平的兩種調(diào)和油對小鼠肝臟病理組織形態(tài)的影響

由圖3可知，小鼠肝臟切片中，肝小葉位置清晰、肝細胞索清晰，細胞間隙適中，門管區(qū)清晰，細胞內(nèi)未出現(xiàn)圓形空泡，無明顯脂肪組織的浸潤，且顯微觀察無明顯病理變化，未對肝臟造成器質(zhì)性的病理變化。

3 討論

肝臟作為代謝性器官，因各種因素損傷后，導(dǎo)致肝細胞變性、 壞死，或者補償增生，以至于血清酶學(xué)和肝指數(shù)會發(fā)生明顯變化[7-8]，存在于肝細胞內(nèi)的ALT、ALP在肝臟受到損壞時，就會從受損肝細胞釋放到血液中，導(dǎo)致血清中ALT、ALP水平升高。AST主要存在于肝臟線粒體中，當(dāng)肝臟線粒體膜破裂時，血清中AST會大幅度升高[9-10]。在本實驗中，在推薦攝入水平下，CR組肝指數(shù)、ALT、AST、ALP水平顯著低于SR組（P<0.05）。在實際攝入水平，CA組AST水平較SA組極顯著降低（P<0.01）。而從切片結(jié)果來看，各組肝小葉位置清晰且細胞內(nèi)未出現(xiàn)圓形空泡，無明顯脂肪組織的浸潤，說明無論在推薦油脂攝入水平還是實際油脂攝入水平并未使肝臟造成脂肪變性。但也有研究認為，AST、ALT水平的升高可以作為脂肪肝早期診斷的血清學(xué)指標(biāo)[11]。綜上所述，在推薦劑量下攝入玉米調(diào)和油更能有效降低脂肪肝的風(fēng)險，保護肝功能，油脂攝入量的增加會升高脂肪肝的風(fēng)險，并且玉米調(diào)和油能有效降低肝臟線粒體損傷風(fēng)險。

普遍認為，在肝病許多的發(fā)病機制中，脂質(zhì)過氧化是非常關(guān)鍵的環(huán)節(jié)。肝臟氧化反應(yīng)增強，氧化代謝產(chǎn)物增多，導(dǎo)致脂質(zhì)過氧化進而引起肝臟脂肪變性[12]。前氧化物與抗氧化酶之間失去平衡會導(dǎo)致肝臟的氧化應(yīng)激，前氧化物主要是肝臟線粒體中產(chǎn)生的活性氧（ROS）。當(dāng)攝入高脂飲食時，脂肪酸在肝臟中蓄積，產(chǎn)生大量的ROS[13]。SOD、GSH-PX作為機體抗氧化防御系統(tǒng)的重要組成成分，廣泛分布于肝臟中。肝臟氧化應(yīng)激會使得造成其合成抗氧化酶能力下降，從而進一步加重肝臟氧化應(yīng)激作用，形成惡性循環(huán)。本研究顯示，在推薦劑量下，玉米調(diào)和油組相對于大豆調(diào)和油組能顯著提升血清中SOD活性（P<0.05），極顯著降低MDA含量（P<0.01），在實際攝入水平下，玉米調(diào)和油組則能顯著提升血清中GSH-PX活性（P<0.05），顯著降低MDA含量（P<0.05）。這表明玉米調(diào)和油能通過提升抗氧化酶的活性，降低肝臟中脂質(zhì)過氧化物的含量。這其中原因可能是玉米油中含有非常豐富的維生素E，維生素E作為抗氧化劑能作用過氧化物，能降低過氧化速度[14]。有研究表明，維生素E可以通過維持遺傳物質(zhì)的穩(wěn)定性和保持神經(jīng)系統(tǒng)的興奮性，預(yù)防疲勞，調(diào)節(jié)機體代謝活動，起到抗氧化的作用[15-16]。

肝脂質(zhì)檢測主要指的是肝臟內(nèi)TG、TC的含量。有研究認為，肝細胞中TG、TC 合成和排出不平衡是形成脂肪肝的主要原因[17]，膳食因素特別是膳食中的脂肪會影響膽固醇和TG水平的代謝[18]。從本實驗結(jié)果可以看出，無論在推薦攝入水平還是實際攝入水平，玉米調(diào)和油能有效降低肝臟中TG水平（P<0.05）。并且在實際攝入水平下，玉米調(diào)和油與大豆調(diào)和油相比，能極顯著降低肝臟膽固醇的含量（P<0.01）。當(dāng)油脂攝入水平升高，玉米調(diào)和油組小鼠肝臟TC含量無顯著性差異變化，這可能與玉米油中含有較多PUFAs有關(guān)。玉米油中的亞油酸能夠與膽固醇結(jié)合成酯，促進膽固醇的轉(zhuǎn)運，并促進膽固醇轉(zhuǎn)變?yōu)槟懰崤懦鲶w外，有良好的降脂作用，還能抑制血小板在血管內(nèi)壁上凝集，防治血栓形成，起到抗動脈粥樣硬化，預(yù)防心血管疾病的作用[19]。

4 結(jié)論

無論在推薦攝入水平還是實際攝入水平，與大豆調(diào)和油比較，玉米調(diào)和油能保護肝功能，增強肝臟抗氧化能力，降低過氧化損傷，并能降低肝脂質(zhì)沉積，減少患脂肪肝的可能。但過度油脂攝入玉米調(diào)和油，會輕度損傷肝功能，降低了肝臟抗氧化能力，增加了肝臟中TG的沉積。

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Abstract：Objective Simulate the habit of consuming blended oil by different vegetable oil and lard in our country and investigate the effects of two blended oil that corn oil and lard blended and soybean oil and lard blended on liver function，liver anti-oxidative capacity and liver lipid in two different intake levels influences.Method Forty eight-week-old male C67BL / 6J mice were randomly divided into 4 groups，according to the ideal per capita oil consumption of 25g/d and the current average per capita oil consumption of Chinese residents 42g/d.3.8% corn oil and lard oil（CR），6.5% corn oil and lard oil（CA），3.8% soybean oil and lard oil（SR），6.5% soybean oil and lard oil（SA），respectively，were added to their basal diet.After 8 weeks weighed，blood，liver collection.ResultThe liver index，AST，ALT，ALP activity of CR significantly decreased compared with those of SR，SA significantly increased the activity of AST compared with CA，both at the recommended intake level and the actual compared with soybean oil and lard blend oil，corn oil and lard blend oil could effectively reduce triglyceride （TG）in liver and significantly increase liver antioxidant enzyme activity and reduce MDA content.ConclusionCompared with soybean oil and lard blend oil，corn oil and lard blended oil has a significant protection of liver function，enhance liver antioxidant capacity，reduce peroxide damage，and can reduce liver lipid deposition.

Keywords：lard;corn oil;soybean oil;blended oil;liver function;antioxidant;liver lipid

（責(zé)任編輯 李婷婷）