張文茂

[摘要] 目的 對丙型肝炎病毒RNA檢測的質(zhì)量控制因素進(jìn)行分析，以保證丙型肝炎病毒RNA檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性，防止漏檢、誤檢，為丙型肝炎的防控提供準(zhǔn)確的檢測依據(jù)。 方法 選取2018年1—4月共50例丙型肝炎患者的血液標(biāo)本，分別根據(jù)血清標(biāo)本存放時(shí)間、檢測人員綜合能力、丙型肝炎病毒RNA檢測所用耗材是否經(jīng)過高壓滅菌分為對照組與觀察組，總結(jié)和分析保證丙型肝炎病毒RNA檢測結(jié)果準(zhǔn)確的因素。 結(jié)果 檢測人員綜合能力，丙型肝炎檢測所用耗材是否經(jīng)高壓滅菌兩個(gè)因素的對照組與觀察組相比較在檢出率上，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=9.543，6.250，P<0.05）；第一個(gè)血清標(biāo)本存放時(shí)間因素，對照組和觀賽組檢出率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=0.102，P>0.05）。 結(jié)論 為了保證丙型肝炎RNA檢測的準(zhǔn)確結(jié)果，檢測人員及檢測所用耗材需要嚴(yán)格選擇。-20℃保存標(biāo)本在1周時(shí)間內(nèi)，血清HCV-RNA檢測結(jié)果影響不大。

[關(guān)鍵詞] 丙型肝炎；RNA檢測；質(zhì)量控制

[中圖分類號] R446.5 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A [文章編號] 1672-5654（2018）10（a）-0174-03

Analysis of Quality Control Factors of Hepatitis C Virus RNA Test

ZHANG Wen-mao

Department of Hereditary Eugenics， Yueyang Maternal and Infant Healthcare Hospital， Yueyang， Hunan Province， 414000 China

[Abstract] Objective To analyze the quality control factors of hepatitis C virus RNA test to ensure the accuracy of test results and prevent the missed diagnosis and misdiagnosis thus providing accurate test basis for the prevention and control of hepatitis C virus. Methods The blood specimens of 50 cases of patients with hepatitis C virus from January 2018 to April 2018 were selected， and divided into two groups according to the serum specimens storage time， comprehensive ability of test staff， and whether the consumables used by the hepatitis C virus RNA test underwent the autoclaving or not， and the factors of ensuring the accuracy of hepatitis C virus RNA test results were summarize and analyzed. Results The differences in the comprehensive ability of test staff， and whether the consumables used by the hepatitis C virus RNA test underwent the autoclaving or not between the two groups the differences were statistically significant（χ2=9.543， 6.250，P<0.05），and the difference in the serum specimens storage time between the two groups was not statistically significant（χ2=0.102，P>0.05）. Conclusion In order to ensure the accuracy results of hepatitis C virus RNA test， the test staff should strictly select the consumables， and the effect of serum HCV-RNA test results is not big when the specimen is stored within 1 week under -20℃.

[Key words] Hepatitis C； RNA test； Quality control

丙型肝炎病毒（hepatitis c virus， HCV）屬黃病毒科，HCV呈球形顆粒，核心含有單鏈正股RNA，長約9500個(gè)核苷酸。目前發(fā)現(xiàn)的全球HCV感染率約為3%，感染HCV的患者逐年上升，每年新發(fā)病例在300萬例左右[1-3]。HCV-RNA的檢測是判斷HCV感染的直接證據(jù)，提高HCV-RNA檢測的準(zhǔn)確性，對丙型肝炎的及時(shí)診斷與治療十分重要[4]。RNA比DNA穩(wěn)定性差，檢測易出現(xiàn)假陰性。國內(nèi)針對丙肝RNA檢測質(zhì)量控制的文章極少，因此，該文選取2018年1—4月50例患者就HCV-RNA檢測細(xì)節(jié)入手，首次針對血清標(biāo)本存放時(shí)間、檢測人員綜合能力、丙肝RNA檢測所用耗材是否經(jīng)高壓滅菌這3個(gè)容易被忽視的因素進(jìn)行了分析以提高丙肝RNA檢測的準(zhǔn)確性。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取共50例丙型肝炎患者的血液標(biāo)本，根據(jù)標(biāo)本存放時(shí)間、檢測人員綜合能力、丙型肝炎病毒檢測所用耗材是否高壓滅菌分為對照組與觀察組分別進(jìn)行檢測，對照組與觀察組所用設(shè)備同一型號，實(shí)驗(yàn)操作參照標(biāo)準(zhǔn)流程一致。

1.2 方法

分別對分組后的血液樣本進(jìn)行HCV-RNA檢測，如下實(shí)驗(yàn)。

1.2.1 血清標(biāo)本存放時(shí)間影響 觀察組：抽取丙肝患者血液3 mL，于含有惰性分離膠的黃色促凝管內(nèi)，室溫1 600rpm離心5 min分離出血清，取200 μL標(biāo)本立即進(jìn)行標(biāo)本提取。

對照組：血液標(biāo)本按上述方法離心后，取200 μL血清-20℃放置7 d后進(jìn)行標(biāo)本提取。由同一名經(jīng)過專業(yè)培訓(xùn)的檢測人員按照HCV-RNA檢測的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)范進(jìn)行操作，HCV-RNA檢測所用設(shè)備與觀察組都是同一型號，實(shí)驗(yàn)所用耗材均經(jīng)過高壓滅菌，實(shí)驗(yàn)室安全等級均為二級生物安全。

1.2.2 檢測人員綜合能力影響 觀察組：負(fù)責(zé)HCV-RNA檢測的操作人員必須具備2年以上關(guān)于病源微生物及病毒檢測的工作經(jīng)驗(yàn)，接受過正規(guī)的省級PCR技術(shù)人員上崗培訓(xùn)，并獲得培訓(xùn)證書。工作中每隔一定的時(shí)間進(jìn)行與工作相關(guān)的微生物檢測知識的培訓(xùn)與學(xué)習(xí)，同時(shí)具有較好的綜合能力，特別是心理素質(zhì)必須良好，嚴(yán)格遵守實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)操作程序和制度進(jìn)行。

對照組：負(fù)責(zé)HCV-RNA檢測的技術(shù)人員為一般的檢驗(yàn)人員，未經(jīng)過專業(yè)的PCR技術(shù)人員上崗培訓(xùn)，操作過程嚴(yán)格按照HCV-RNA檢測的標(biāo)準(zhǔn)操作程序進(jìn)行。比較二者對于HCV 陽性的復(fù)檢率。HCV-RNA檢測所用設(shè)備與觀察組均為同一型號，實(shí)驗(yàn)所用耗材均經(jīng)過高壓滅菌，實(shí)驗(yàn)室安全等級均為二級生物安全，保證對HCV-RNA檢測的樣品預(yù)處理相同。

1.2.3 丙型肝炎病毒RNA檢測所用耗材是否高壓滅菌 觀察組：丙型肝炎病毒RNA檢測所用耗材（1.5 mL離心管，0.2 mL PCR反應(yīng)管，10 μL、200 μL、1000 μL Tip頭）均經(jīng)過高壓滅菌（121℃，30 min）。

對照組：丙型肝炎病毒RNA檢測所用耗材未經(jīng)高壓滅菌，HCV-RNA檢測所用設(shè)備與觀察組均為同一型號，實(shí)驗(yàn)室安全等級均為二級生物安全，保證對HCV-RNA檢測的樣品預(yù)處理相同，由同一名獲得PCR技術(shù)人員上崗證的專業(yè)檢驗(yàn)人員進(jìn)行操作。

1.3 統(tǒng)計(jì)方法

分析采用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理數(shù)據(jù)，計(jì)數(shù)資料用（%）表示，進(jìn)行χ2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

對觀察組和對照組進(jìn)行HCV-RNA檢測進(jìn)行實(shí)驗(yàn)：檢測人員綜合能力、丙型肝炎病毒檢測所用耗材是否高壓滅菌這兩個(gè)因素的對照組與觀察組相比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），血清存放時(shí)間的對照組與觀察組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），見表1。

3 討論

血中HCV含量僅為HBV的千分之一，熒光定量PCR技術(shù)可以在極低的病毒載量檢測到HCV-RNA的存在，是臨床診斷的有力工具，對HCV-RNA檢測進(jìn)行質(zhì)量控制是保證結(jié)果準(zhǔn)確的關(guān)鍵[5-6]。該研究主要針對HCV-RNA檢測中的3個(gè)方面，即血清標(biāo)本存放時(shí)間影響、檢測人員綜合能力影響、丙型肝炎病毒檢測所用耗材是否高壓滅菌。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示“血清存放時(shí)間”的對照組檢出率為88%， 與觀察組相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=0.102，P>0.05），說明血清-20℃保存一周對檢測結(jié)果影響不大，所以丙肝RNA檢測所用血清如果暫時(shí)不檢測需立馬放到-20℃冰箱進(jìn)行保存，盡量在一周之內(nèi)進(jìn)行檢測。檢測人員綜合能力對照組檢出率為64%，與觀察組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=9.543，P<0.05），說明檢測人員綜合能力影響檢出率，檢測人員必須要經(jīng)過嚴(yán)格培訓(xùn)并具有良好心理素質(zhì)。檢測所用耗材是否經(jīng)高壓滅菌對照組檢出率為70%，與觀察組相比， 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=6.250，P<0.05），說明所用耗材是否進(jìn)行高壓滅菌影響檢出率，所以RNA檢測所用耗材必須要經(jīng)過高壓滅菌。HCV-RNA熒光定量檢測不僅需要保證PCR實(shí)驗(yàn)室安全衛(wèi)生等級、實(shí)驗(yàn)儀器的校準(zhǔn)及試劑盒的篩選，與此同時(shí)也需要保證檢測人員隊(duì)伍極高的綜合能力和耗材必須高壓滅菌，才能夠保證HCV-RNA檢測質(zhì)量，從而減少檢測的誤差率，提高HCV-RNA診斷率。

[參考文獻(xiàn)]

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（收稿日期：2018-00-00）